《線粒體相關(guān)研究》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 來測定單鏈分子核苷酸序列間是否具有互補關(guān)系 。 ? 一般用 14C和 3H標(biāo)記 。 三、顯微光譜分析技術(shù) ? 細胞中有一些成分具有特定的吸收光譜，核酸、蛋白質(zhì)、細胞色素、維生素等都有自己特征性的吸收曲線。 二、免疫細胞化學(xué) immunocytochemistry ? 根據(jù)免疫學(xué)原理 ， 利用抗體同特定抗原專一結(jié)合 ， 對抗原進行定位測定的技術(shù) 。 3. 聯(lián)苯胺反應(yīng)：過氧化酶分解 H202。 顯示多糖常用乙醇固定 ， 顯示酶類多用甲醛丙酮緩沖液固定 。 我國著名學(xué)者童第周等上個世紀(jì) 70年代在魚類細胞核移植方面進行了許多工作 ， 并取得了豐碩成果 。 掃描隧道顯微鏡原理 STM image, Benzene molecules accumulate at step edges on Cu 三、顯微操作技術(shù) micromanipulation technique ? 在倒置顯微鏡下利用顯微操作器進行細胞或早期胚胎操作的一種方法 。 掃描電子顯微鏡原理 人類紅細胞 酵母 人類精子 （三）掃描隧道顯微鏡 scanning tunneling microscope， STM ? 原理：根據(jù)隧道效應(yīng)而設(shè)計 ， 當(dāng)原子尺度的針尖在不到一個納米的高度上掃描樣品時 ， 此處電子云重疊 ， 外加一電壓 （ 2mV~2V） ， 針尖與樣品之間形成隧道電流 。 A Yeast Cell ? 20世紀(jì) 60年代問世 ， 用來觀察標(biāo)本表面結(jié)構(gòu) 。 標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍 。 1. 原理 透射電子顯微鏡 TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPE， TEM 電子束 名 稱 可見光 紫外光 X 射線 α 射線 0. 1Kv 10Kv 波長（ nm ） 390~ 760 13~ 390 0. 05~ 13 0. 005~ 1 0. 123 0. 0122 表二、不同光線的波長 制樣技術(shù) ? 1）超薄切片 ? 電子束穿透力很弱，用于電鏡觀察的標(biāo)本須制成厚度僅50nm的超薄切片，用超薄切片機（ ultramicrotome）制作。 電子束的波長短 ， 并且波長與加速電壓 (通常 50~120KV)的平方根成反比 。 （八 ）倒置顯微鏡 inverse microscope ? 物鏡與照明系統(tǒng)顛倒 ， 前者在載物臺之下 ， 后者在載物臺之上 ， 用于觀察培養(yǎng)的活細胞 ， 通常具有相差物鏡 ， 有的還具有熒光裝置 。 ? 光源前有偏振片 （ 起偏器 ） ， 使進入顯微鏡的光線為偏振光 ， 鏡筒中有檢偏器 （ 與起偏器方向垂直的偏振片 ） 。 在構(gòu)造上 ，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個特殊之處 。 ? 用途類似熒光顯微鏡，但能掃描不同層次，形成立體圖像。用途：免疫熒光觀察、基因定位、疾病診斷。 – sin α /2的最大值必然小于 1；介質(zhì)為空氣，鏡口率一般為 ~；油鏡頭用香柏油為介質(zhì)，鏡口率可接近。 — 、光學(xué)顯微鏡 ? 1. 構(gòu)成： ? ①照明系統(tǒng) ? ②光學(xué)放大系統(tǒng) ? ③機械裝置 ? 2. 原理：經(jīng)物鏡形成倒立實像，經(jīng)目鏡進一步放大成像。 ? 電子顯微鏡：以電子束為光源。 ? 思考： 如何提高顯微鏡的分辨能力？ 表一、幾種介質(zhì)的折射率 介質(zhì) 空氣 水 香柏油 α 溴萘 折射率 1 ? 顯微鏡的幾個光學(xué)特點： – 制作光學(xué)鏡頭所用的玻璃折射率為 ~，所用介質(zhì)的折射率越接近玻璃的越好。 Fluorescence image of epithelial cell, DNA in blue and Microtubules in green ? 用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。 ? 分辨力是普通光學(xué)顯微鏡的 3倍。 ? 把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差 ， 從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度 ， 使
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