定量分析方法與驗(yàn)證-wenkub.com
2025-05-11 01:36 本頁(yè)面
【正文】 空白樣品加對(duì)照品測(cè)定：求得樣品回收率，檢驗(yàn)樣品中是否有干擾。 Y=?102X+?103 r= ?至少 6個(gè)濃度點(diǎn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線 ?線性范圍必須覆蓋全部待測(cè)濃度，不得外推 ?最低濃度點(diǎn)偏差在 177。 HPLC中化學(xué)衍生化 常用衍生化試劑有：鄰苯二醛、丹酰氯、熒胺等。 （ 2）液 固萃?。?LSE） ： 將生物樣品溶液通過填有適宜擔(dān)體的小柱，使藥物保留在擔(dān)體上，洗去雜質(zhì)后，用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵撓聛?lái)測(cè)定；或雜質(zhì)保留在擔(dān)體上，先把藥物洗脫下來(lái)測(cè)定。 硝酸 高氯酸消化 ) 目的：從大量共存物中分離出所需要的微量組分 方法： （ 1）液 液萃?。?LLE） ： 多數(shù)藥物是親脂性的，可用有機(jī)溶劑萃取出來(lái)，而大多數(shù)內(nèi)源性雜質(zhì)是強(qiáng)極性的，不被萃取出。 三 生物樣品的前處理 （一）藥物在體內(nèi)的存在形式 游離型：原形藥物 或 代謝物 綴合物：藥物或其代謝物與葡萄糖醛酸等結(jié)合 結(jié)合物：藥物與蛋白質(zhì)結(jié)合 （二）樣品前處理的目的 提高測(cè)定方法靈敏度、準(zhǔn)確度和專屬性 保護(hù)測(cè)定儀器不受生物樣品中類脂和蛋白質(zhì)等的污染。 采?。簞?dòng)物應(yīng)在代謝籠中進(jìn)行，通過籠下漏斗接收。也可采取物理、化學(xué)方法刺激使唾液流出。 ? 4．藥物濃度監(jiān)測(cè)和藥物濫用 ：要求分析方法簡(jiǎn)便、快速 二 常用樣品的種類、采集和貯存 （一）樣品及采集 血樣 ： 血漿 (plasma)： 全血加肝素、枸櫞酸 鹽 、草酸鹽等抗凝劑后經(jīng)離心分取，量約為全血的一半。 （三）體內(nèi)藥物分析的特點(diǎn) ? 1．干擾物質(zhì)多 ：生物樣品中含有大量的內(nèi)源性物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂肪等，以及代謝物、結(jié)合物等，樣品一般均需經(jīng)過分離、凈化后才能進(jìn)行分析。 思 考 題 在原料藥的分析方法驗(yàn)證中，是否所有指標(biāo)均需進(jìn)行驗(yàn)證？ 怎樣設(shè)計(jì)回收率試驗(yàn)？ 體內(nèi)藥物分析 ：是一門研究進(jìn)入人或動(dòng)物體內(nèi)，存在于生物樣品（如體液、組織、器官和排泄物等）中的藥物及其代謝物和內(nèi)源性物質(zhì)的質(zhì)與量變化規(guī)律的分析方法學(xué)。 線性： 吸收度 A一般在 ～ ，濃度點(diǎn) n≥5。 變動(dòng)因素：溶液穩(wěn)定性、不同的測(cè)試耗用時(shí)間、不同的分析溫度、不同的測(cè)定日期、流動(dòng)相的組成和 pH，商品柱的品牌，柱溫等。 方法： 線性與范圍的確定可用作圖法 (響應(yīng)值 Y／濃度 X)或計(jì)算回歸方程 (Y＝ a+bX)來(lái)研究建立。 方法： ?非儀器分析方法 ：與檢測(cè)限的確定方法相同； ?儀器分析方法 ： S / N=10時(shí)相應(yīng)的濃度，作為定量限的估計(jì)值。 方法： ? 信噪比法（儀器分析方法） ： HPLC、 GC ：用已知濃度樣品與空白試驗(yàn)對(duì)照，記錄測(cè)得的被測(cè)藥物信號(hào)強(qiáng)度 S與噪音 (或背景信號(hào) )強(qiáng)度 N，以能達(dá)到 S／ N＝ 2或 S／ N＝ 3時(shí)的樣品最低藥濃為 LOD； UV或熒光分析：多次空白試驗(yàn)，求得其背景響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)差，將三倍空白標(biāo)準(zhǔn)差 (即 3δ空或 3S空 )作為檢測(cè)限的估計(jì) ? 目視法（非儀器分析方法） ：通過已知濃度的樣品，目視確定能被可靠地檢測(cè)出的最低量作為檢測(cè)限。 （三）專屬性（ specificity） 氧氟沙星乳膏的含量測(cè)定圖譜 乳膏基質(zhì) 樣品 （四）檢測(cè)限 (limit of detection， LOD) 定義： 系指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。 2. 中間精密度 不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。 或把被測(cè)物濃度當(dāng)作 100%，至少測(cè) 6次計(jì)算RSD進(jìn)行評(píng)價(jià)。 （二）精密度 (Precision) 定義 ： 系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之接近的程度。還應(yīng)作單獨(dú)輔料的空白測(cè)定。 藥物合成方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。 ③ 樣品的燃燒 點(diǎn)燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，俟燃燒完畢（應(yīng)無(wú)黑色碎片），充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放置 15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，同法另做空白試驗(yàn)。 (二 ) 干法破壞 氧瓶燃燒法 ：將有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的待測(cè)物質(zhì)吸收于適當(dāng)?shù)奈?
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