凝膠過(guò)濾層析法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量-wenkub.com
2025-05-08 07:50 本頁(yè)面
【正文】 根據(jù)紫外檢測(cè)的洗脫峰位置，量出洗脫體積 Ve ，代入公式計(jì)算待測(cè)蛋白的 Kav值，然后在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得lgMr，其 反對(duì)數(shù) 便是未知樣品的相對(duì)分子質(zhì)量。 3）分別收集各標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的洗脫峰 （ 靈敏度 ），測(cè)量它們的洗脫體積 Ve。用細(xì)滴管吸取 1 mL藍(lán)色葡聚糖 2021液，小心地繞柱壁一圈 （ 距膠面2mm） 緩慢加入，打開出水口 （ 開始收集 ） ，待溶液完全滲入柱床后，關(guān)閉出水口，取 1mL洗脫液沿管壁洗柱一次，等溶液完全滲入柱床，柱上端再加入幾毫升洗脫液，將柱上端接口與儲(chǔ)液瓶連接，打開出水口，開始洗脫。 2） 凝膠柱床總體積（ Vt）的測(cè)定：在距柱上端約 5㎝ 處作一記號(hào)，關(guān)閉柱出水口，加入蒸餾水，打開出水口，液面降至柱記號(hào)處即關(guān)閉出水口，然后用量筒接收柱中蒸餾水，讀出的體積即為柱床總體積 Vt 。所以它不能表示凝膠裝柱后的體積。 大分子 先從柱中流出 → Ve值 小 → Kav值 小 小分子 后從柱中流出 → Ve值 大 → Kav值 大 Kav ＝ Ve － Vo Vt － Vo Kav值的大小和凝膠柱床的總體積（ Vt）、外水體積（ Vo）以及分離物本身的洗脫體積（ Ve）有關(guān)。 內(nèi)水體積 （ Vi）： 可以通過(guò)測(cè)定 完全滲透 的小分子溶質(zhì) （如 重鉻酸鉀 ） 的洗脫體積來(lái)測(cè)定 即 Ve＝ Vo＋ Vi 推出 Vi＝ Ve － Vo 柱床體積（ Vt）： 1)可用下式計(jì)算： Vt＝ π （ D/2） 2 h 2）根
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