凝膠過濾層析法測定蛋白質(zhì)分子量(完整版)
【正文】 小分子 后從柱中流出 → Ve值 大 → Kav值 大 Kav ＝ Ve － Vo Vt － Vo Kav值的大小和凝膠柱床的總體積（ Vt）、外水體積（ Vo）以及分離物本身的洗脫體積（ Ve）有關。 它包括自加入樣品時算起，到組分最大濃度出現(xiàn)時所流出的體積。是利用具有網(wǎng)狀結構的凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同 來進行分離的技術。 圖 3 1 凝膠層析分離原理示意圖 ◎ 【 基本概念 】 外水體積、 內(nèi)水體積、 柱床體積 、 洗脫體積 外水體積（ Vo）是指凝膠柱中凝膠顆粒周圍空間的 體積內(nèi)水體積 （ Vi）是指凝膠顆粒中孔穴的體積。 分配系數(shù) 表示某個組分在內(nèi)水體積和在外水體積中的濃度分配關系。Sephadex G25～ 200 數(shù)字是吸水率 10 例如 Sephadex G75 吸水率 177。 收集 藍色葡聚糖 2021洗脫峰 ，測出洗脫體積 Ve ， 得出 Vo值 。 樣品 Mr 1gMr Ｖ e Ｖ ０ Vt Kav 牛血清蛋白 67， 000 雞卵清蛋白 45， 000 溶菌酶 14， 300 待測雞卵粘蛋白樣品 六、實驗結果與分析 實驗結果填入表中 結果分析 繪制 藍色葡聚糖 洗脫曲線 繪制 標準蛋白質(zhì) 洗脫曲線 繪制 雞卵粘蛋白 樣品 洗脫曲線 繪制 lgMrKav標準曲線 ,確定待測 樣品 雞卵粘蛋白 相對分子質(zhì)量 . 謝謝同學們
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