【正文】 同時，本片畢業(yè)論文的寫作也得到了郭衛(wèi)國、任瑞妮等同學(xué)的熱情幫助。這次畢業(yè)論文設(shè)計我得到了很多老師和同學(xué)的幫助，其中我的論文指導(dǎo)老師季曉暉老師對我的關(guān)心和支持尤為重要。感謝我的母校陜西理工學(xué)院給了我大學(xué)四年深造的機會，讓我能繼續(xù)學(xué)習(xí)和提高 。= A 表示峰面積 C 表示各組分濃度（ μL/mL） 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液 10 微升，重復(fù)進樣 5 次，計算大黃素的峰面積平均值和 RSD 見表 1 表 1 名稱 大黃素 峰面積平均值 RSD % 樣品含量的測定 陜西理工學(xué)院畢業(yè)論文 第 10 頁 共 20 頁 表 2 樣品中大黃素測定結(jié)果 樣品類型 產(chǎn)地 大黃素 含量 RSD 大黃 清水 白河 正交實驗： 以回流時間（ A）、溶劑用量（ B）和溶劑（ C）為考查因素進行正交實驗，實驗條件如下表 表 3 序號 條件 A/h B/mL C/氯仿 :乙醇 1 100 1:0 2 1 80 1:1 3 2 50 1:2 表 4 氯仿和乙醇混合溶劑提取結(jié)果分析 A/h B/mL 氯仿 :乙醇 大黃素 /g 1 50 1:2 2 80 1:1 3 100 1:0 4 1 50 1:0 5 1 80 1:2 6 1 100 1:1 7 2 50 1:1 8 2 80 1:0 9 2 100 1:2 由表 4 可得最佳條件為 A（ 2h） B(100) C(氯仿比乙醇 1:2)，在此條件下大黃素的分離效果最好 3 結(jié)論 通過查閱資料，本文建立了一個通過高效液相色譜法同時測定藥用大黃中大黃素的方法，通 過實際樣品的測定得出大黃素在 時得到分離，與參考資料比較，實驗結(jié)果比較接近，得到了預(yù)期的效果，驗證了此方法的可行性。 樣品的配置 在 60177。因此選擇甲醇 :%磷酸 (80:20)作為流動相。 甲醇：色譜純 氯仿 陜西理工學(xué)院畢業(yè)論文 第 8 頁 共 20 頁 兩種大黃分別購于漢中鎮(zhèn)巴縣清水白河兩地 色譜條件 色譜柱： 應(yīng)用 Eclipse XDBC18 色譜柱 （ 250mm， 5μm） ， 流動相為 1%磷酸 99%甲醇，流速為 ，進樣體積為 10μg，柱溫為 30℃ ，檢測波長為 254nm。紀(jì)松崗 [10]等人采用超臨界流體萃取膠束電動毛細(xì)管色譜法分離測定了大黃中的蘆薈大黃素、大黃素和大黃酸，被測組分在10min 內(nèi)全部分離，這種方法準(zhǔn)確、簡便、快速、結(jié)果也比較準(zhǔn)確。國內(nèi)宗 玉英等 [22]人建立了利用膠束電動毛細(xì)管色譜法分離和測定大黃中大黃素、蘆薈大黃素和大黃酸含量的方法。我們可以把這一計算機模擬方法廣泛地用于到其它中草藥的分離分析中 。 （ 4） 高效液相色譜法 高效液相色譜法簡稱 HPLC，根據(jù)分離原理的不同又可分為液 液色譜法、液 固色譜法、離子交換色譜法、離子對色譜法、離子色譜法、空間排阻色譜法，日本學(xué)者 [18]報道用 Sen shu Pak SS21251N柱，以 15%乙 酸 2 四氫 呋喃進行梯度洗脫，用 UV 2361nm 檢測，在 70min 內(nèi)分離了大黃中蒽醌衍生物、葡萄糖甙類和番瀉甙類共 13 種化合物。 （ 3） 薄層色譜法 薄層色譜法（ TLC)是一種 吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使移動相（溶劑）在流過固定相（吸附劑）的過程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的， 此法在大黃的分離中是一種常用的層析方法。（ 2） 柱色譜 法 柱色譜法 又稱柱層析，固定相裝于柱內(nèi)，流動相為液體，樣品沿豎直方向由上而下移動而達到分離的色譜法。超臨界流體萃取是近代分離領(lǐng)域出現(xiàn)的新技術(shù)，具有萃取效率高、環(huán)境污染小、萃取溶劑便于揮發(fā)、提取物較為“干凈”、省時、操作條件易 于改變等特點。超聲提取法所用時間短，對蒽類成分沒有破壞作用，能顯著的提高提取效率。提取率受溶劑種類、濃度、浸泡及浸泡時的溫度、煎煮時間、煎沸時間等因素的影響。 大黃有效成分的分析與測定 大黃中有效成分的提取方法 有效成分的量的多少， 與提取方法有很大關(guān)系。增加 23 月齡小鼠游泳能力和耐缺氧能力。另外，大黃酸可以抑制糖尿病大鼠腎臟高代謝，明顯減少尿蛋白 ，并可抑制高糖培養(yǎng)條件下腎小球系膜細(xì)胞的增殖及細(xì)胞外基質(zhì)的合成，可以逆轉(zhuǎn) 7GFp(轉(zhuǎn)化生長因子 p)誘導(dǎo)的近端腎小管上皮細(xì)胞肥大和 TGFβ1 所致的系膜細(xì)胞 I 型葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的高表達以及系膜細(xì)胞糖攝人的增加也有顯著抑制作用。大黃兒茶素、大黃素、大黃酸都是大黃抗腫瘤的有效成分。也有報道，大黃對正常人的凝血功能無明顯的影響。 （ 7） 止血作用 各種動物實驗 證明，大黃能縮短凝血時間，降低毛細(xì)血管通透性。中醫(yī)認(rèn)為的大黃苦寒傷胃，與其影響消化酶有關(guān)。臨床上用的膽道排石湯中大黃是主藥之一。臨床應(yīng)用大黃可以抑制 MDA 生成，減輕組織器官損傷，防止病情惡化。大黃抗病毒作用也很廣泛，其抗單純皰疹病毒的作用，主要通過抑制病毒的吸附和穿入過程而阻止病毒的復(fù)制。大黃的瀉下成分能排泄于乳汁中。大黃性味苦寒，藥性峻烈，素有“將軍”之稱。大黃素甲醚是高活性植物源殺菌劑，以天然植物大黃為原料，經(jīng)精心提取其活性成分，加工研制而成，對白粉病、霜霉病、灰霉病、炭疽病等有很好的防治效果，對人畜 低毒，對環(huán)境友好，特別適合于綠色和有機蔬菜生產(chǎn)?？诜蚱は伦⑸?, 均有明顯縮短血液凝固時間的作用。特別是對中老年性便秘，治療效果更明顯 . 蘆薈大黃素 現(xiàn) 在 代應(yīng)用 中主要在醫(yī)藥化工中間體、保健食品添加劑、化妝品原料及護發(fā)原料等。體外在 100μg/mL 濃度對 [3H]— TDR 和 [3H]Urd 參入淋巴細(xì)胞有明顯的抑制作用。蘆薈大黃素對金黃色葡萄球菌的核酸和蛋白質(zhì)合成有較強的抑制作用。其作用機制之一是抑制癌細(xì)胞的 DNA、RNA 和蛋白質(zhì)的生物合成。 熔點 223～ 224℃ ，易升華。最新資料表明：大黃素可以影響角朊細(xì)胞體外增殖；可預(yù)防冠脈介入性治療后再狹窄，可抑制人腎成纖維細(xì)胞。它對很多細(xì)菌如各種葡萄球菌、溶血性鏈球菌、白喉桿菌、霍亂孤菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、皮膚真菌、枯 草桿菌、草分枝桿菌、淋球菌、炭宜桿菌、草狀菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌等均有抑制作用，其中對葡萄球菌、淋球菌、鏈球菌更為有效。臨床應(yīng)用口服大黃素在腸內(nèi)易于吸收， 2～ 3 小時后血中即達最高濃度，以后慢慢下降，尿及膽汁在服藥后 4～ 8 小時即達高峰，由尿排出可持續(xù) 2 天，在體內(nèi)的分布以肝腎為最多。例如，在新鮮植物中發(fā)現(xiàn)的大黃素蒽酚或大黃素蒽酮（熔點 250～ 258℃ ），都是大黃素的還原產(chǎn)物，如經(jīng)長時間貯存，往往被氧化成蒽醌類。 （ 6） 利尿作用 大黃素可使尿中鈉和鉀含量增加，促進輸尿管蠕動，增加尿量。 （ 4） 解痙、止咳作用 大黃素對乙酰膽堿所致離體大鼠腸管的痙攣有很強的抑制作用，約為罌栗堿的 4 倍。 （ 2） 抗微生物生長作用 大黃素對金黃色葡萄球菌 209P、鏈球菌、白喉桿菌、枯草桿菌、副傷寒桿菌、痢疾桿菌、大腸桿菌、流感桿菌、肺炎球菌、卡他球菌等均有抑制作用；對臨床常 見厭氧性細(xì)菌有較強的抑制作用；其 MIC 略高于甲硝唑，在 8μg/mL 濃度能使 76%~91%的厭氧菌生長受抑。幾乎不溶于水，溶于乙醇及堿溶液。在國外，大黃酸被用作合成關(guān)節(jié)炎良藥雙醋瑞因的原料。在轉(zhuǎn)錄水平上 ,報告基因?qū)嶒灥贸龃簏S酸與 RXR 結(jié)合能分別抑制 RXR 同源 二聚體、 RXR/TR3 和 RXR/RAR 異源二聚體的轉(zhuǎn)錄活性。 凋亡實驗 [7]顯示大黃酸處理的細(xì)胞明顯呈現(xiàn)出染色質(zhì)邊緣化，出現(xiàn)凋亡小體，核固縮等凋亡形態(tài)，說明大黃酸能引起癌細(xì)胞的凋亡。 研究人員對大黃酸進行了系統(tǒng)的體外和體內(nèi)活性研究，發(fā)現(xiàn)大黃酸能夠通過抑制細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的功能，抑制細(xì)胞糖代謝己糖胺通路的活性，抑制內(nèi)皮細(xì)胞 PAI1 的表達，保護內(nèi)皮細(xì)胞的功能，逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗等發(fā)揮其治療糖尿病腎病的作用，這些都是糖尿病腎病治療中新的作用機制。前列腺素在大黃酸蒽酮瀉下活性上起到了重要作用。大黃酸對金黃色葡萄球菌的核酸和蛋白質(zhì)合成有較強的抑制作用，對無細(xì)胞系統(tǒng) DNA 的生物合成也有抑制作用。腹腔注射大黃酸 50μg/kg、 21 天，對小鼠黑色素瘤抑制率為 76%。 大黃酸 大黃酸化學(xué)名為 1,8二羥基 3羧基蒽醌，為咖啡色針晶，升華后為黃色針晶。本實驗樣品為藥用大黃，又名南大黃，這種 大黃 是蓼科植物藥用大黃，被我國藥典 [1]規(guī)定為中藥大黃的原植物之一，主要 產(chǎn)于陜西、四川、湖北、貴州、云南、河南等地，生于海拔 12004000 米山溝或林下，多有栽培，根狀莖及根供藥用。目前，大黃蒽醌的測定方法主要有電化學(xué)法、光度法和色譜法，而高效液相色譜是最快捷最有效的測定方法。 作者簽名： 日期： 年 月 日 導(dǎo)師簽名： 日期： 年 月 日 陜西理工學(xué)院畢業(yè)論文 注 意 事