【正文】 此外，薄層層析法亦應用于中草藥品種、藥材及其制劑真?zhèn)蔚臋z查、質量控制和資源調查，對控制化學反應的進程，反應副產品產物的檢查，中間體分析，化學藥品及制劑雜質的檢查，臨床和生化檢驗以及毒物分析等，都是有效的手段。利用薄層的預分離尋找柱層的洗脫條件時 ,假定在薄層上所測得的 Rf 值一樣品在柱層中的比移率（ R）。在洗脫過程中各個成分將按何種順序被洗脫，每一洗脫液中是否為單一成分或混合體，均可由薄層的分離得到判斷與檢驗。如用數種溶劑展 中國最大的管理資源中心 第 15 頁 共 15 頁 層后，標準品和鑒定品的 Rf 值、斑點形狀顏色都完全相同，則可作初步結論是同一化合物。 ：薄層層析法在中草 藥化學成分的研究中，主要應用于化學成分的預試、化學成分的鑒定及探索柱層分離的條件。 ③ 酸堿薄層和 PH 緩沖薄層：為了改變吸附劑原來的酸堿性，可在鋪制薄層時采用稀酸或稀堿以代替水調制薄層。因此在硝酸銀薄層上，化臺物可由于飽和程度不同而獲得分離。常用的熒光物質多為無機物。 4而展開距離則隨薄層的粒度粗細而定，薄層粒度越細，展開距離相應縮短，一般不超過 10 厘米，否則可引起色譜擴散影響分離效果。 1．薄層層析的 特點：薄層層析在應用與操作方面的特點與柱層析的比較。這一例子說明，同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中層析時，需用不同的溶劑才能達到相同的分離效果，從而說明吸附劑、溶劑和欲分離成分三者的相互關系。如有多組分的混合物，象植物油脂系由烷烴、烯烴、舀醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份。但多數中藥成分的極性較大，則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑（一般Ⅲ～Ⅳ級）?？傊灰獌蓚€成分在結構上存在差別，就有可能分離，關鍵在于條件的選擇。 3．被分離物質的性質：被分離的物質與吸附劑，洗脫劑共同構成吸附層析中的三個要素，彼此緊密相連。溶劑的洗脫能力，有時可以用溶劑的介電常數（ε）來表示。溶解樣品的溶劑應選擇極性較小的，以便被分離的成分可以被吸附。在柱層析時所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時常稱展開劑。例如以醇 水進行洗脫時，則隨乙醇濃度的遞增而洗脫力增加。層析用的活性炭，最好選用顆粒活注炭，若為活性炭細粉，則需加入適量硅藻土作為助濾劑一并裝柱，以免流速太慢。樣品與氧化鋁的用量比，一般在 1： 20～ 50 之間 層析柱的內徑與柱長比例在 1： 1020 之向。中性氧化鋁仍屬于堿性吸附劑的范疇，本適用于酸性成分的分離。 （ 2）氧化鋁：氧化鋁可能帶有堿性（因其中可混有碳酸鈉等成分），對于分離一些堿性中草藥成分，如生物堿類的分離頗為理想。當溫度升高至 500℃時，硅膠表面的硅醇基也能脫水縮臺轉變?yōu)楣柩跬殒I，從而喪失了因氫鍵吸附水分的活往，就不再有吸附劑的性質，雖用水處理亦 不 中國最大的管理資源中心 第 12 頁 共 15 頁 能恢復其吸附活性。硅膠吸附作用的強弱與硅醇基的含量多少有關。 一、 吸附層析法（ AdsorptionChromatography） （一）吸附劑、溶劑與被分離物性質的關系：液一固吸附層析是運用較多的一種方法，特別適用于很多中等分子量的樣品（分子量小于 1， 000 的低揮發(fā)性樣品）的分離，尤其是脂溶性成分一一般不適用于高分子量樣品如蛋白質、多糖或離子型親水住化合物等的分離。此后通過各種層析方法，迄今已發(fā)現 15種單體（其中有 4種為我國首次發(fā)現）。此外，高壓液譜、氣相層析、紫外光譜等，均有助于檢識結晶樣品的純度。經制備其甲醚后，再經紙層層析檢定，可以出現兩個斑點，異高熊果甙的比移值大于高熊果甙。如防己諾林堿在 1760C 時熔化，至 200℃時又固化，再在 2420C時分解。 但有些例外情況，特別是有些化合物的分解點不易看得清楚。原托品堿在氯仿中形成棱往狀結晶，熔點 207℃；在丙酮中則形成半球狀結晶，熔點 203℃；在氯仿和丙酮混合溶劑中則形成以上兩種晶形的結晶。分步結晶法各部分所得結晶，其純度往往有較大的差異，但常可獲得一種以上的結晶成分，在未加檢查前不要貿然混在一起。這種方法稱為重結晶法。如仍無結晶析出，可打開瓶塞任溶液逐步揮散，慢慢析晶。加種晶是誘導晶核形成常用而有效的手段。如果溶液濃度適當，溫度慢慢降低， 中國最大的管理資源中心 第 10 頁 共 15 頁 有可能析出結晶較大而純度較 高的結晶。自秦皮中提取七葉甙（秦皮甲素），也可運用這樣的辦法。 制備結晶溶液，除選用單一溶劑外，也常采用混合溶劑。 “新生態(tài)”的物質即新游離的物質或無定形的粉未狀物質，遠較晶體物質的溶解度大，易于形成過飽和溶液。又如蝙蝠葛堿通常為無定形粉未，但能和氯仿或乙醚形成為加成物結晶。溶劑的沸點亦不宜太高。例如游離生物堿可制備各種生物堿鹽類，羥基化合物可轉變成乙酸化物，碳基化臺物可制備成苯蹤衍生物結晶。有時可通過氧化鋁，硅膠或硅藻土短柱處理后，再進行制備結晶。有時即使有少量或微量雜質存在，也能阻礙或延緩結晶的形成。純化臺物的結晶有一定的熔點和結晶學的特征，有利于鑒定。 （六）結晶、重結晶和分步結晶法：鑒定中草藥化學成分，研究其化學結構，必須首先將中草藥成分制備成單體純品。透析是否完全，須取透析膜內溶液進行定性反應檢查。透析膜有動物性膜、火棉膠膜、羊皮紙膜（硫酸紙膜）、蛋白質膠膜、玻璃紙膜等。 （五）透析法：透析法是利用小分子物質在溶液中可通過半透膜，而大分子物質不能通過半透膜的性質，達到分離的方法。 （四）鹽析法：鹽析法是在中草藥的水提液中、加入無機鹽至一定濃度，或達到飽和狀態(tài)，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質分離。又如橙皮甙、蘆丁、黃芩甙、甘草皂甙均 易溶于堿性溶液，當加入酸后可使之沉淀析出。還應注意脫鉛后溶液酸度增加，有時需中和后再處理溶液，有時可用新制備的氫氧化鉛、氫氧化鋁、氫氧化銅或碳酸鉛、明礬等代替醋酸鉛、堿式醋酸鉛。硫化氫脫鉛比較徹底，但溶液中可能存有多余的硫化氫，必須先通人空氣或二氧化碳讓氣泡帶出多余的硫化氫氣體，以免在處理溶液時參與化學反應?？膳c堿式醋酸鉛產生不溶性鉛鹽或絡合物的范圍更廣。 ：鉛鹽沉淀法為分離某些中草 藥成分的經典方法之一。應用液滴逆流分配法曾有效地分離多種微量成分如柴胡皂甙原小檗堿型季銨堿等。對溶劑系統(tǒng)的選擇基本同逆流分配法，但要求能在短時間內分離成兩相，并可生成有效的液滴。逆流分配法對于分離具有非常相似性質的混合物，往往可以取得良好的效果。本法所采用的逆流分布儀是由若干乃至數百只管子組成。如果一種中草藥的水浸液需要用比水輕的苯、乙酸乙酯等進行萃取，則需將水提濃縮液裝在萃取管內，而苯、乙酸乙酯貯于高位容器內。其裝置可具有一根、數根或更多的萃取管。但親水性較大的成分不易轉入有機溶劑層時，須增加萃取次數，或改變萃取溶劑。乳化現象較嚴重時，可以采用二相溶劑逆流連續(xù)萃取裝置。不過，一般有機溶劑親水性越大，與水作兩相萃取的效果就越不好，因為能使較多的親水性雜質伴隨而出，對有效成 分進一步精制影響很大。萃取 時如果各成分兩相溶劑中分配系數相差越大，則分離效率越高、如果在水提取液中的有效成分是親脂性的物質，一般多用親脂性有機溶劑，如苯、氯仿或乙醚進行兩相萃取，如果有效成分是偏于親水性的物質，在親脂性溶劑中難溶解，就需要改用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。有些總 生物堿，如長春花生物堿、石蒜生物堿，可利用不同 rH 值進行分離。例如內酯類化合物不溶于水，但遇堿開環(huán)生成羧 酸鹽溶于水，再加酸酸化，又重新形成內酯環(huán)從溶液中析出，從而與其它雜質分離；生物堿一般不溶于水，遇酸生成生物堿鹽而溶于水，再加堿堿化，又重新生成游離生物堿。中草藥的水提液中常含有樹膠、粘液質、蛋白質、糊化淀粉等，可以加入一定量的乙醇，使這些不溶于乙醇的成分自溶液中沉淀析出，而達到與其它成分分離的目的。水浸膏或乙醇浸膏常常為膠伏物，難以均勻分散在低極性溶劑中，故不能提取完全，可拌人適量惰性填充劑，如硅藻土或纖維粉等，然后低溫或自然干燥，粉碎后，再以選用溶劑依次提取，使總提取物中各組成成分，依其在不同極性溶劑中溶解度的差異而得到分離。 升華法雖然簡單易行，但中草藥炭化后，往往產生揮發(fā)性的焦油狀物，粘附在升華物上，不易精制除去，其次，升華不完全，產率低，有時還伴隨有分解現象。例如樟木中升華的樟腦（ camphor），在《本草綱目》中已有詳細的記載，為世界上