大學(xué)生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告三篇-資料下載頁(yè)
2024-12-06 23:22本頁(yè)面
【正文】 的濃縮膠?！ 饪s膠制備（濃度5%，制備量6mL） 試劑 H2O 30%丙烯酰胺 10%過(guò)硫酸銨 TEMED 進(jìn)入氣泡，放置約20min，待濃縮膠凝固?！ 〉鞍踪|(zhì)樣品處理（小離心管裝B）：:1體積比例，加樣品和上樣緩沖液（200μL:200μL）。100℃加熱3min使蛋白變性?！ 饪s膠完全聚合后，去掉夾子和膠條，拔去梳子（注意不要產(chǎn)生氣魄，即電泳泳道），將凝膠玻璃板固定于電泳裝置內(nèi)槽上，加入電泳緩沖液（內(nèi)、外槽，查漏），緩沖液高過(guò)玻璃板凹面?！ ∮靡埔簶屢来卧谟镜兰訕?5個(gè)20μL，4個(gè)40μL)。（本組將marker置于第六泳道） 電泳：連接正、負(fù)極，打開(kāi)電源（穩(wěn)壓130V或電流5060mA），開(kāi)始時(shí)，電流控制在40A，樣品進(jìn)入分離膠后，緩慢升高電壓至140V或電流5060mA保持電壓或電流強(qiáng)度不變。帶溴酚蘭指示劑遷移至下沿處，停止電泳。 剝膠染色：電泳結(jié)束后，取出凝膠玻璃板，用水沖洗，用金屬片從玻璃兩側(cè)輕輕撬開(kāi)。使板內(nèi)進(jìn)入空氣，同時(shí)用水沖洗，取出凝膠板，將剝離下來(lái)的凝膠用水漂洗，轉(zhuǎn)入染色缸中。加染色液，至搖床染色15min?！ ∶撋喝旧戤?，回收染色液，用水漂洗，加入脫色液，置搖床脫色，30min換1次脫色液，脫色至背景清晰?！ ∮^察測(cè)定蛋白的遷移率及條帶，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)樣品，分析蛋白樣品的分子量及純度。 1拍照電泳結(jié)果，用于完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告?！ ∮昧? 60μL 8μL 注意：一旦加入TEMED，應(yīng)快速搖勻濃縮膠，在已凝固的分離膠層上加濃縮膠，立即將梳子插入膠液頂部，避免 2 結(jié)果與討論 小牛腸堿性磷酸酶的酶活測(cè)定 堿性磷酸酶酶活定義：在37℃條件下，以每分鐘催化水解1μmol底物的酶量為一個(gè)酶活力單位。 堿性磷酸酶作用于緩沖液中的對(duì)硝基苯磷酸二鈉，使之水稀釋放出對(duì)硝基苯酚，后者在405nm光波長(zhǎng)下有最大吸收，通過(guò)測(cè)定吸光值的變化率，可測(cè)知酚的生成量，從而計(jì)算出酶的活性單位。 酶活力的計(jì)算： 比活力（U/mg）= ΔA/minVRDE405VECL 由實(shí)驗(yàn)小牛腸堿性磷酸酶的提純及酶活測(cè)定中實(shí)驗(yàn)步驟可知， 反應(yīng)液的體積VR= 稀釋倍數(shù) D= 10 405nm波長(zhǎng)下對(duì)硝基苯酚的摩爾消光系數(shù)E405= (molcm) 所加酶液體積VE= 比色皿光程 L= 405nm波長(zhǎng)下的吸光值的變化率通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)量得到酶動(dòng)力學(xué)曲線（圖1）可以得到，ΔA/min= (根據(jù)圖片，自己估算斜率，注意單位。) /看后刪除 說(shuō)明： 圖片均要用自己的。 ，~，對(duì)于特別大的圖可加大寬度。，~，圖說(shuō)為字號(hào)為小5號(hào)黑體字?！ ? 表注用小5號(hào)字，表字用6號(hào)字?！ 〉鞍踪|(zhì)原始濃度C可由實(shí)驗(yàn)考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量獲得 考馬斯亮藍(lán)G250測(cè)定蛋白質(zhì)含量屬于燃料結(jié)合法的一種。在一定蛋白濃度范圍內(nèi)（）,蛋白質(zhì)色素結(jié)合物在 595nm 波長(zhǎng)下的光吸收與蛋白質(zhì)含量成正比，故可用于蛋白質(zhì)的定量測(cè)量。 通過(guò)實(shí)驗(yàn)，利用考馬斯亮藍(lán)常量法測(cè)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2）及其標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合解析式y(tǒng)=?！ 」实鞍踪|(zhì)原始濃度C=50大學(xué)生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告三篇
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