大學生物實驗報告三篇-資料下載頁
2024-12-06 23:22本頁面
【正文】 的濃縮膠?！ 饪s膠制備（濃度5%，制備量6mL） 試劑 H2O 30%丙烯酰胺 10%過硫酸銨 TEMED 進入氣泡，放置約20min，待濃縮膠凝固?！ 〉鞍踪|樣品處理（小離心管裝B）：:1體積比例，加樣品和上樣緩沖液（200μL:200μL）。100℃加熱3min使蛋白變性。 濃縮膠完全聚合后，去掉夾子和膠條，拔去梳子（注意不要產(chǎn)生氣魄，即電泳泳道），將凝膠玻璃板固定于電泳裝置內槽上，加入電泳緩沖液（內、外槽，查漏），緩沖液高過玻璃板凹面?！ ∮靡埔簶屢来卧谟镜兰訕?5個20μL，4個40μL)。（本組將marker置于第六泳道） 電泳：連接正、負極，打開電源（穩(wěn)壓130V或電流5060mA），開始時，電流控制在40A，樣品進入分離膠后，緩慢升高電壓至140V或電流5060mA保持電壓或電流強度不變。帶溴酚蘭指示劑遷移至下沿處，停止電泳?！ 兡z染色：電泳結束后，取出凝膠玻璃板，用水沖洗，用金屬片從玻璃兩側輕輕撬開。使板內進入空氣，同時用水沖洗，取出凝膠板，將剝離下來的凝膠用水漂洗，轉入染色缸中。加染色液，至搖床染色15min。 脫色：染色完畢，回收染色液，用水漂洗，加入脫色液，置搖床脫色，30min換1次脫色液，脫色至背景清晰?！ ∮^察測定蛋白的遷移率及條帶，對照標準樣品，分析蛋白樣品的分子量及純度?！ ?拍照電泳結果，用于完成實驗報告。 用量 60μL 8μL 注意：一旦加入TEMED，應快速搖勻濃縮膠，在已凝固的分離膠層上加濃縮膠，立即將梳子插入膠液頂部，避免 2 結果與討論 小牛腸堿性磷酸酶的酶活測定 堿性磷酸酶酶活定義：在37℃條件下，以每分鐘催化水解1μmol底物的酶量為一個酶活力單位?！ A性磷酸酶作用于緩沖液中的對硝基苯磷酸二鈉，使之水稀釋放出對硝基苯酚，后者在405nm光波長下有最大吸收，通過測定吸光值的變化率，可測知酚的生成量，從而計算出酶的活性單位?！ ∶富盍Φ挠嬎悖骸 ”然盍Γ║/mg）= ΔA/minVRDE405VECL 由實驗小牛腸堿性磷酸酶的提純及酶活測定中實驗步驟可知， 反應液的體積VR= 稀釋倍數(shù) D= 10 405nm波長下對硝基苯酚的摩爾消光系數(shù)E405= (molcm) 所加酶液體積VE= 比色皿光程 L= 405nm波長下的吸光值的變化率通過分光光度計測量得到酶動力學曲線（圖1）可以得到，ΔA/min= (根據(jù)圖片，自己估算斜率，注意單位。) /看后刪除 說明： 圖片均要用自己的?！ ?，~，對于特別大的圖可加大寬度。，~，圖說為字號為小5號黑體字。 / 表注用小5號字，表字用6號字?！ 〉鞍踪|原始濃度C可由實驗考馬斯亮藍法測定蛋白質含量獲得 考馬斯亮藍G250測定蛋白質含量屬于燃料結合法的一種。在一定蛋白濃度范圍內（）,蛋白質色素結合物在 595nm 波長下的光吸收與蛋白質含量成正比，故可用于蛋白質的定量測量?！ ⊥ㄟ^實驗，利用考馬斯亮藍常量法測蛋白質標準曲線（圖2）及其標準曲線擬合解析式y(tǒng)=?！ 」实鞍踪|原始濃度C=50大學生物實驗報告三篇
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