蛋白純化方法大全及優(yōu)缺點比較-資料下載頁
2024-11-17 22:17本頁面
【正文】 不適合用凝膠過濾純化，因為本技術所用樹脂有輕度的親水性，電荷密度較高的蛋白容易吸附在上面。排阻層析從不用于純化過程的早期，因為這種方法要求標本高度濃縮，上樣量只能在柱體積的1％～4％之間，柱子要細而長才能得到好的分離效果，樹脂本身也比較昂貴，規(guī)?；墓I(yè)生產(chǎn)中不太適用。 丙烯酰胺凝膠電泳通常用來查看蛋白混合物樣品的復雜程度和監(jiān)測純化效果。這種方法分離效果極好，可惜很難在不喪失精度情況下放大到制備規(guī)模，因為隨著膠厚度的增加，電泳時的熱效應會嚴重干擾蛋白的泳動。在基礎研究中，有時僅需要少量的純蛋白進行研究，如蛋白質(zhì)測序等，此時電泳純化不失為一種簡便快速的好方法。丙烯酰胺凝膠電泳也是蛋白純化過程中重要的分析工具，可以檢測目的蛋白是在哪個梯度的離子交換柱鹽洗脫液中；可用來判定近年來隨著各學科的迅猛發(fā)展，對蛋白純化技術的需求不斷增長，已有的純化方法被日益改進，新型的純化方法也相繼涌現(xiàn)。羥磷灰石是磷酸鈣的結(jié)晶，由于其理化性質(zhì)不夠穩(wěn)定，結(jié)合能力差，很難用于層析。近來來BioRad公司對其進行了改進，提高了鈣和磷的比例，使形成球形、多孔、性質(zhì)穩(wěn)定的陶瓷羥磷灰石顆粒，其帶正電的鈣離子和負電性的磷酸根離子可分別與蛋白的羧基及氨基結(jié)合。通過調(diào)整緩沖液的pH值，酸性及堿性氨基酸可選擇性地與此樹脂結(jié)合，改變緩沖液的鹽濃度可將蛋白洗脫分離。資料顯示，使用這種方法能使兩種等電點、分子量和疏水性相同的蛋白很好分離。內(nèi)容總結(jié)
（1）蛋白純化方法大全及優(yōu)缺點比較
1.蛋白沉淀 蛋白能溶于水是因為其表面有親水性氨基酸，在蛋白質(zhì)的等電點處若溶液的離子強度特別高或者特別低，蛋白則傾向于從溶液中析出
（2） 這是在所有的蛋白純化與濃縮方法中最有效方法
（3）蛋白質(zhì)由氨基酸組成，氨基酸在不同的pH環(huán)境中所帶總電荷不同
（4）某些單抗也會在純化過程中從樹脂上解離下來混入產(chǎn)物中，也需要從終產(chǎn)物中去除
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