20xx年醫(yī)學(xué)專(zhuān)題—第5講動(dòng)物細(xì)胞制藥1-資料下載頁(yè)
2024-11-16 00:28本頁(yè)面
【正文】 有使基因表達(dá)的調(diào)控元件。,第四十五頁(yè)，共五十五頁(yè)。,③能用以篩選出外源基因已整 合的選擇標(biāo)記(biāoj236。)。 ④有時(shí)還帶有選擇性增加拷貝 數(shù)的擴(kuò)增系統(tǒng)。,第四十六頁(yè)，共五十五頁(yè)。,⒉基因載體的導(dǎo)入和高效表達(dá)工程(gōngch233。ng)細(xì)胞株 的篩選,第四十七頁(yè)，共五十五頁(yè)。,基因載體導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞 常用(ch225。nɡ y242。nɡ)方法是： 磷酸鈣沉淀法 電穿孔法,第四十八頁(yè)，共五十五頁(yè)。,磷酸鈣沉淀法：溶解的DNA 加Na2HPO4和CaCl2 形成磷酸鈣沉淀， DNA被包在磷酸鈣沉淀中， 形成DNA—磷酸鈣共沉淀物，當(dāng) 和細(xì)胞(x236。bāo)表面接觸時(shí)，則通過(guò)細(xì)胞(x236。bāo) 吞噬作用而將DNA導(dǎo)入。,第四十九頁(yè)，共五十五頁(yè)。,電穿孔法： 借助電穿孔儀的高壓脈沖電場(chǎng)(di224。n chǎng)， 使細(xì)胞膜出現(xiàn)瞬時(shí)可逆性小孔， 外源DNA沿小孔進(jìn)入細(xì)胞。轉(zhuǎn) 化率較高，拷貝數(shù)低。,第五十頁(yè)，共五十五頁(yè)。,五、細(xì)胞庫(kù)的建立 生產(chǎn)用的工程細(xì)胞必須建立兩個(gè)(liǎnɡ ɡ232。)細(xì)胞庫(kù)： ⒈原始細(xì)胞庫(kù) ⒉生產(chǎn)用細(xì)胞庫(kù),第五十一頁(yè)，共五十五頁(yè)。,⒈原始細(xì)胞庫(kù)貯存時(shí)須有該細(xì) 胞的詳細(xì)擋案，包括(bāoku242。)： ①該細(xì)胞系的歷史 ②該細(xì)胞系的特性 ③對(duì)各種有害因子的檢查結(jié)果,第五十二頁(yè)，共五十五頁(yè)。,⒉生產(chǎn)用細(xì)胞庫(kù) 從原始細(xì)胞庫(kù)來(lái)的，或從單 一安瓶來(lái)，或從多個(gè)安瓶來(lái) 即刻混合，經(jīng)培養(yǎng)擴(kuò)增再分 裝儲(chǔ)存(chǔcn)形成細(xì)胞庫(kù)。,第五十三頁(yè)，共五十五頁(yè)。,需建擋案， 進(jìn)行無(wú)菌性無(wú)細(xì)胞交叉污 染的檢查(jiǎnch225。)。 需確定最高使用的傳代數(shù)。,第五十四頁(yè)，共五十五頁(yè)。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),第 五 章 動(dòng)物細(xì)胞制藥。生長(zhǎng)不依賴(lài)支持物表面(biǎomi224。n)，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)。間期（G1+S+G2）。細(xì)胞代數(shù)=傳代數(shù)分種數(shù)/2。倍增時(shí)間=培養(yǎng)經(jīng)過(guò)時(shí)間247。代數(shù)。長(zhǎng)因子、貼壁因子等。二倍體細(xì)胞有正常細(xì)胞的。培養(yǎng)基：DEME培養(yǎng)基。培養(yǎng)基為199培養(yǎng)基。通常用的培養(yǎng)基為Grace培養(yǎng)基。和細(xì)胞表面(biǎomi224。n)接觸時(shí)，則通過(guò)細(xì)胞。從原始細(xì)胞庫(kù)來(lái)的，或從單。需確定最高使用的傳代數(shù),第五十五頁(yè)，共五十五頁(yè)。,
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