實(shí)驗(yàn)四：細(xì)菌的接種、培養(yǎng)和分離技術(shù)5篇-資料下載頁
2024-11-15 13:11本頁面
【正文】 用針蘸取少量的菌種，沿半固體培養(yǎng)基中心向管底作直線穿刺。該法常用于厭氧菌種的保藏或微生物的動(dòng)力研究。混澆接種是先將待接的微生物放入培養(yǎng)皿中再倒入冷卻至45℃左右的固體培養(yǎng)基，迅速輕輕搖勻，這樣菌液就被稀釋了。待平板凝固后，置于適宜溫度下培養(yǎng)，就可以長出單個(gè)菌落的微生物。涂布接種是將菌液倒入平板上，再用涂布棒在表面迅速的作來回左右的涂布，讓菌液均勻分布，就可以長出單個(gè)菌落的微生物。本實(shí)驗(yàn)采用的是劃線接種。為了防止接種時(shí)引入其它微生物，整個(gè)操作過程均需在無菌操作臺(tái)上進(jìn)行，還需對(duì)操作員的雙手進(jìn)行酒精消毒，每次劃線前都需灼燒接種環(huán)，接種時(shí)才打開培養(yǎng)皿且不能全部打開，接種完馬上關(guān)上。三、實(shí)驗(yàn)器材儀器培養(yǎng)皿、量筒、滴管、吸水紙、燒杯、三角瓶、酒精燈、玻璃棒、接種環(huán)、15ml離心管、試管架、鑷子、電磁爐、鍋、恒溫培養(yǎng)箱、高溫滅菌鍋、無菌操作臺(tái)、酒精燈、天平、濾紙等。材料土豆、瓊脂、蒸餾水、酒精、土壤樣品四、實(shí)驗(yàn)步驟土壤稀釋液的配制① 在菜地用九點(diǎn)取樣法取適量土壤樣品，具體操作為：在菜地選取九個(gè)取樣點(diǎn)，在每個(gè)取樣點(diǎn)取相同量的表層土壤（10cm左右），然后將其混合均勻；② 稱取1g土壤樣品與99ml蒸餾水，將其配制成100ml的土壤溶液； ③ 用移液管取9ml蒸餾水于15ml離心管中，再用移液槍取1ml前一步已配制的土壤溶液于離心管中，搖勻，即為103的土壤溶液；④ 重復(fù)前一步，將土壤溶液稀釋為10101010108一系列稀釋液。土豆培養(yǎng)基的制備① 用天平稱取200g土豆，清洗干凈后去皮切丁；② 用量筒量取1000ml蒸餾水與電磁爐鍋中，再加入已準(zhǔn)備好的土豆，將其煮爛；③ 從鍋中取出已煮爛的土豆，用紗布過濾，濾液待用； ④ 稱取20g瓊脂與濾液中，再用蒸餾水定容至1000ml；⑤ ，然后放入高溫滅菌鍋中，在121℃下滅菌20min；⑥ 取出已滅菌的土豆培養(yǎng)基，待其熔化后冷卻至60℃，倒入每付平板約1520ml，待其凝固后便可使用。微生物的接種與分離① 將接種需要的所有器材均放置于無菌操作臺(tái)上；② 用浸泡在酒精里棉花給雙手滅菌，點(diǎn)燃酒精燈，右手拿接種環(huán)，左手拿培養(yǎng)基；③ 將接種環(huán)放在火焰上燒灼，待其冷卻后在106土壤稀釋液中蘸取少量液體，打開培養(yǎng)基的一部分，采用劃線接種，使之形成單菌落，一共劃線34次，每劃線一次就需在火焰上燒灼一次；④ 重復(fù)上步，接種10108的土壤稀釋液的微生物；⑤ 接種完的培養(yǎng)基放在恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48h，取出觀察。五、結(jié)果與思考實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，采用劃線接種土壤微生物的培養(yǎng)皿里有單菌落出現(xiàn)，這說明劃線接種能達(dá)到分離培養(yǎng)的目的。學(xué)習(xí)過微生物這門課程的同學(xué)都知道，真菌的菌落較大且疏松，菌絲細(xì)長，呈絨毛狀、蜘蛛網(wǎng)狀、棉絮狀，無固定大小，多有光澤，不易挑，孢子會(huì)呈現(xiàn)紅色、褐色、綠色、黑色、黃色等不同的顏色；細(xì)菌的菌落較小，形狀表面或光滑黏稠，或粗糙干燥，易挑起，多為白色。由此可知土壤里既含有真菌又含有細(xì)菌。思考題⑴在平板劃線法中，為什么每次都需要將接種環(huán)上的剩余物燒掉？答：這么做的主要目的是殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，以使下次劃線的菌種直接來自于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少，從而達(dá)到分離菌株的目的。⑵為什么要把培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)？答：①操作時(shí)培養(yǎng)皿蓋上可能粘有水珠或者細(xì)菌，倒著培養(yǎng)可以避免培養(yǎng)皿蓋上的水珠或者微生物落在培養(yǎng)皿上；②培養(yǎng)過程中，細(xì)菌在代謝繁殖過程中會(huì)產(chǎn)生一些有害于細(xì)菌生長繁殖的代謝物，釋放熱量及有水排出，如果不倒著培養(yǎng)會(huì)有水珠滴落到培養(yǎng)基中，影響菌落的生長。③如果培養(yǎng)目標(biāo)是收集細(xì)菌代謝物，而且代謝物易溶于水，倒著培養(yǎng)可能會(huì)方便收集。六、實(shí)驗(yàn)總結(jié) 我本科所學(xué)專業(yè)是材料科學(xué)與工程，本次實(shí)驗(yàn)是我高中后第一次接觸微生物方面的知識(shí)。在本次實(shí)驗(yàn)課里，段老師先給我們?cè)敿?xì)講解了微生物分離培養(yǎng)方面的許多理論知識(shí)，然后才進(jìn)入了理論環(huán)節(jié)。在實(shí)驗(yàn)操作過程中段老師一直在我們旁邊觀察我們的實(shí)驗(yàn)操作過程，一旦出現(xiàn)錯(cuò)誤，會(huì)立即指出并耐心的給我們講解應(yīng)該怎么做，我擔(dān)心自己從來沒做過微生物培養(yǎng)方面的實(shí)驗(yàn)會(huì)做不好，段老師還一直在旁邊鼓勵(lì)我，并給我講解了許多微生物分離培養(yǎng)方面的知識(shí)，最后我獨(dú)立完成了本次實(shí)驗(yàn)。此次實(shí)驗(yàn)課，我真的是受益匪淺，學(xué)到了許多微生物分離培養(yǎng)方面的知識(shí)，十分感謝段老師。圖2 如圖2所示，本次微生物分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，有些培養(yǎng)皿里菌落很少，只有一個(gè)，有的甚至沒有。我認(rèn)為出現(xiàn)這種情況原因可能是：劃線接種時(shí)，未等接種環(huán)冷卻就開始接種，微生物可能被高溫殺死；在接種時(shí)，酒精燈火焰太大，進(jìn)行接種操作的全過程又離酒精燈火焰很近，這也可能將微生物殺死。
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