【正文】 列，5%u2ca端2 0個(gè)核苷酸（C區(qū)）為附加修飾堿基。與mRNA逆轉(zhuǎn)錄后，經(jīng)超速離心使 cDNA與多余引物分開，再用和第二引物（C）以第一鏈cDNA為模板合成第二鏈cDNA，以后的PCR循環(huán)中用逆轉(zhuǎn)錄引物的B區(qū)和引物C進(jìn)行擴(kuò)增加尾cDNA，而污染的DNA或質(zhì)粒DNA才不會被擴(kuò)增。（六）抗污染引物法該對引物擴(kuò)增時(shí)通過病毒DNA克隆如入質(zhì)粒的位點(diǎn)。這一區(qū)域只存在完整的原病毒中，在重組質(zhì)粒中，這一區(qū)域分成兩個(gè)區(qū)域與克隆位點(diǎn)被。如果重組質(zhì)粒污染了標(biāo)本，也不能擴(kuò)增出任何條帶，即使出現(xiàn)了擴(kuò)增帶，其大小也與預(yù)期的不同。只有原病毒DNA才能被引物擴(kuò)增，因此只要出現(xiàn)預(yù)期大小的擴(kuò)增帶就可以證明標(biāo)本是陽性的，該法試用于環(huán)狀靶分子系列。四．其它PCR檢測方法：（一）兩步法：是指在用套式PCR方法擴(kuò)增某些含量低微的標(biāo)本時(shí)，兩對引物在同一個(gè)管中以簡化步驟，減少污染。通常第一步進(jìn)行2025個(gè)循環(huán)，擴(kuò)增外引物片段；第二步再進(jìn)行10個(gè)循環(huán)，擴(kuò)增內(nèi)引物片段。兩步法對內(nèi)外引物的Tm值有特殊要求，即內(nèi)外引物的退火溫度高（如68℃），在此溫度下內(nèi)引物不與模板退火，然后降低退火溫度（至55℃）再擴(kuò)增內(nèi)引物片段，這樣，在操作過程中，僅打開PCR反應(yīng)管一次，大大減少了污染的可能性。（二）熒光法：亦稱熒光PCR技術(shù)（fluoresence PCR, FPCR），是1995年由美國PE公司首先研制成功的，它融匯了PCR的靈敏性、DNA雜交的特異性和光譜技術(shù)精確定量的優(yōu)點(diǎn)，電腦同步跟蹤，數(shù)據(jù)自動化處理，直接探測PCR過程中的變化以獲得定量的結(jié)果，不需要做PCR后處理或檢測，完全閉管操作。探針標(biāo)記除用TET和FAM外，還可用HEX、JOE作為報(bào)告熒光，3′端的淬滅基團(tuán)常用TAMRA。在探針保持完整時(shí)，熒光報(bào)告基團(tuán)的熒光被熒光抑制基團(tuán)淬滅，而在探針被切斷后，熒光報(bào)告基團(tuán)才發(fā)出報(bào)告熒光，且熒光的強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物的數(shù)量呈正比。熒光檢測儀器透過PCR管壁能直接檢測到熒光信號的波長和長度變化。主要有以下優(yōu)點(diǎn)：，假陽性率低； ，不需要PCR后處理；，HBV (102106 Dane′s particle/ml)； ，PCR產(chǎn)物污染少； 。主要方法有： 1..熒光探針法：進(jìn)行熒光PCR檢測時(shí)，要求熒光探針必須完全與靶基因互補(bǔ)，長度以2030個(gè)堿基為宜，必要時(shí)3′端磷酸化封閉，以防在擴(kuò)增時(shí)作為引物延伸。該方法利用Taq酶的3′→5′聚合酶活性及5′→3′外切酶活性，可以在鏈延伸過程中實(shí)現(xiàn)鏈替換，并將被替換的探針切斷，故可進(jìn)行定性與定量檢測。熒光探針5′端標(biāo)記的TAMRA，在480nm激發(fā)下產(chǎn)生530nm的紅色熒光；3′端標(biāo)記的FAM，激發(fā)后產(chǎn)生綠色熒光。PE公司推出的TaqMan系統(tǒng)，即采用雙熒光探針，如配合使用PCR擴(kuò)增與熒光檢測合二為一的儀器，可進(jìn)行實(shí)時(shí)（realtime）定量檢測。2．分子信標(biāo)法：分子信標(biāo)（molecular beacon）是一個(gè)發(fā)夾樣結(jié)構(gòu)的特異探針，其環(huán)狀部分與靶序列互補(bǔ)。在室溫時(shí)，分子信標(biāo)的發(fā)夾緊閉，熒光淬滅。PCR擴(kuò)增時(shí)，隨著溫度升高，發(fā)夾松開，與單鏈模板特異結(jié)合，發(fā)出熒光。熒光強(qiáng)度與模板呈正比，故可用于PCR產(chǎn)物的定性及定量。第五篇：防塵治理措施方案巢湖市鳳凰之家安置小區(qū)配套道路黎明路施工防塵治理方案安徽豐陽建設(shè)工程有限公司二零一五年七月?lián)P塵治理措施方案一、編制依據(jù)《安徽省人民代表大會常務(wù)委員會關(guān)于加強(qiáng)建筑施工揚(yáng)塵污染防治工作的規(guī)定》《合肥市重污染天氣應(yīng)急預(yù)案要求》《合肥市大氣污染防治管理辦法》《合肥市揚(yáng)塵污染防治管理辦法》二、工程概況巢湖市鳳凰之家安置小區(qū)配套道路黎明路施工工程位于巢湖市，黎明路北起吳澗路，南至鳳凰山路，位于巢湖市鳳凰之家小區(qū)西側(cè)，為新建道路。，規(guī)劃為城市支路，道路紅線寬18米。工程包括道路工程、排水工程、管線綜合、交通工程、照明工程、綠化工程、電器設(shè)備安裝工程等。三、防塵措施根據(jù)市建委關(guān)于《合肥市揚(yáng)塵污染防治管理辦法》的要求，同時(shí)結(jié)合本工程的實(shí)際情況，本項(xiàng)目特制定了以下措施來努力做好此項(xiàng)工作。為有效防治城市揚(yáng)塵污染，改善施工現(xiàn)場環(huán)境空氣質(zhì)量，保障人體健康，結(jié)合本項(xiàng)目的實(shí)際情況特制定揚(yáng)塵治理實(shí)施措施。嚴(yán)格執(zhí)行市建委《合肥市揚(yáng)塵污染防治管理辦法》。施工階段，派專人定時(shí)對道路進(jìn)行灑水降塵，控制粉塵污染。施工道路采用砂夾石鋪筑，每天應(yīng)派專人進(jìn)行清掃，維護(hù)。同時(shí)采用灑水車灑水，灑水次數(shù)不少于2次；在路具備機(jī)動車通行能力的每天應(yīng)采用人力灑水車隨時(shí)灑水，保持工地不揚(yáng)塵。水泥和其他易飛揚(yáng)、細(xì)顆粒散體材料，安排在庫內(nèi)存放或嚴(yán)密遮蓋，運(yùn)輸時(shí)要防止遺灑、飛揚(yáng)，卸運(yùn)時(shí)采取措施，減少污染?，F(xiàn)場內(nèi)所有交通路口和物料堆放地全部實(shí)現(xiàn)硬化，防止泥土隨車輛，行人帶出工地。施工運(yùn)輸車輛、挖掘機(jī)械等駛出工地前必須清除泥土作防塵處理，嚴(yán)禁將泥土、塵土帶出工地。管線安裝施工的磚墻溝槽切割，應(yīng)采用濕作業(yè)法進(jìn)行施工。側(cè)石工程所用石材應(yīng)優(yōu)先組織半成品進(jìn)入施工現(xiàn)場，實(shí)施裝配式施工，減少因石材切割、加工所造成的揚(yáng)塵污染?，F(xiàn)場石材切割加工應(yīng)設(shè)置專用封閉式作業(yè)間，操作人員必須佩帶防塵口罩，以降低或減少揚(yáng)塵對環(huán)境的污染和人體的危害。按照《合肥市揚(yáng)塵污染防治管理辦法》的要求，運(yùn)輸料石等易產(chǎn)生揚(yáng)塵物品的車輛必須覆蓋或密封運(yùn)輸；施工工程中采用車輛進(jìn)出場沖洗以及現(xiàn)場圍擋、物料覆蓋和晴天灑水等多種措施，嚴(yán)防車輛攜帶泥沙出場造成道路的污染?，F(xiàn)場內(nèi)設(shè)置的食堂和宿舍，由專人負(fù)責(zé)管理，確保衛(wèi)生和安全符合規(guī)定。出入口無垃圾、無污水等，做到施工現(xiàn)場周邊安全。1嚴(yán)禁在施工現(xiàn)場焚燒廢棄物，防止有毒、有害、惡臭塵煙和氣體發(fā)生。1土石方施工必須濕法作業(yè)。應(yīng)對現(xiàn)場使用微細(xì)顆粒材料采取防塵措施。提倡采用能減少揚(yáng)塵污染的先進(jìn)施工工藝。遇有四級以上大風(fēng)或異常天氣時(shí)，嚴(yán)禁拆倒微細(xì)顆粒材料的作業(yè)。1對出入施工現(xiàn)場的各種車輛進(jìn)行限速﹙行駛速度不得超過15km/h﹚,防止速度過快產(chǎn)生揚(yáng)塵。1派專人負(fù)責(zé)天氣預(yù)報(bào)，遇有四級以上大風(fēng)不得進(jìn)行土方運(yùn)輸、開挖、回填等工作。1施工人員生活污水采用化糞池預(yù)處理，通過市政污水管網(wǎng)排入市污水排放。