內(nèi)毒素是革蘭陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖(lps)成分-脂多糖的類脂a-…-資料下載頁
2025-09-24 15:23本頁面
【正文】 測定。目前，在國外細(xì)菌內(nèi)毒素定量法的使用率大約占65%～70%，已經(jīng)超過凝膠法，而且還呈上升趨勢?！∶嘎?lián)免疫吸附測定法(ELISA) 酶聯(lián)免疫測定法(ELISA法)基于抗原抗體的酶聯(lián)免疫測定法，目前在國外應(yīng)用十分普遍。主要由外加熱原質(zhì)刺激巨嗜細(xì)胞后產(chǎn)生的內(nèi)熱原物IL1等，而進(jìn)行的定量測定方法。體外人全血熱原檢測方法是近年來國內(nèi)外正在興起的一種研究熱原檢測的新方法，具有檢測范圍廣，靈敏度高，不同個體血液的結(jié)果差異小等優(yōu)點[12]。國內(nèi)一些學(xué)者，已采用酶聯(lián)免疫測定法對體外人全血熱原檢測方法的可行性進(jìn)行研究和優(yōu)化，取得了可喜的進(jìn)展[13]。 免疫學(xué)方法 目前采用的方法主要有酶聯(lián)免疫吸附檢測法、火箭免疫電泳試驗法、L聚賴氨酸法、雙抗體夾心法、熒光偏振法、125I氣同位素標(biāo)記法。這些方法的特點是特異性、準(zhǔn)確性高，但其應(yīng)用尚待大量臨床實踐的驗證，操作尚待進(jìn)一步簡化?！∩飳W(xué)方法 利用LPS刺激免疫細(xì)胞產(chǎn)生ILTNF的特性，以標(biāo)化的細(xì)胞系作為靶細(xì)胞，檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中的ILTNF等細(xì)胞因子含量，推算出待檢樣本中的LPS含量。 化學(xué)發(fā)光法 應(yīng)用CR1和CR3受體誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的氧化反應(yīng)作為一個反應(yīng)平臺，通過測定內(nèi)毒素對中性粒細(xì)胞的生物學(xué)作用來檢測內(nèi)毒素的含量。 流式細(xì)胞術(shù) 應(yīng)用針對內(nèi)毒素表面抗原決定簇的單克隆抗體對內(nèi)毒素進(jìn)行熒光標(biāo)定而后應(yīng)用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。6 內(nèi)毒素的制備內(nèi)毒素的制備方法很多，各種方法所得的制品在純度、活性、產(chǎn)量等方面均有所差異。方法主要有三氯醋酸法、酚水法、二乙二醇法、水乙醚法、水丁醇法、酚氯仿石油醚法等［14］。目前應(yīng)用較多的是酚水法。7 內(nèi)毒素抗體的保護(hù)作用內(nèi)毒素具有較強(qiáng)的免疫原性，只需幾十至數(shù)百微克即能明顯誘導(dǎo)小鼠及家兔產(chǎn)生抗內(nèi)毒素抗體。內(nèi)毒素核心結(jié)構(gòu)和類脂A在幾乎所有革蘭氏陰性菌之間具有明顯的相似性和高度的穩(wěn)定性，而且又是最具生物學(xué)活性和毒性的成份，因此用核心結(jié)構(gòu)和類脂A統(tǒng)稱為核心糖脂，CGL作為免疫原制備抗體，可獲得具有廣泛交叉反應(yīng)性的保護(hù)性抗體，從而達(dá)到阻斷幾乎所有內(nèi)毒素的病理生理作用。由CGL產(chǎn)生的抗體具有與幾乎所有革蘭氏陰性菌內(nèi)毒素的結(jié)合能力。大多數(shù)科學(xué)家認(rèn)為，這種結(jié)合能夠阻斷內(nèi)毒素誘導(dǎo)靶細(xì)胞或組織釋放炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子，起中和內(nèi)毒素的毒性和促進(jìn)網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞系統(tǒng)吞噬清除的功能。臨床研究表明，抗CGL血清或免疫球蛋白具有明顯的防治革蘭氏陰性菌感染性休克和減少死亡率的作用。但由于缺乏再次免疫應(yīng)答，抗體滴度難以控制，導(dǎo)致抗體來源和標(biāo)準(zhǔn)化工作受到限制，此類抗體難以在臨床上推廣應(yīng)用。近十年來，應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)制備的抗CGL抗體，克服了以上諸多缺點，臨床上應(yīng)用也是安全有效的，具廣闊的發(fā)展前景。還有研究表明，內(nèi)毒素抗體保護(hù)作用的大小與所使用的動物模型和感染的嚴(yán)重程度有關(guān)。在細(xì)菌生長初期，LPS的構(gòu)建不完全，此時抗CGL抗體與核心結(jié)構(gòu)結(jié)合，能顯示出交叉抗感染的作用。如感染菌量過大，細(xì)菌還未充分繁殖，動物就死于細(xì)菌的直接毒性作用，此時抗CGL抗體也無法發(fā)揮中和LPS毒性的作用［15］?？傊?，內(nèi)毒素抗體的研究為革蘭氏陰性菌感染提供了免疫治療的新途徑，單抗的研制和開發(fā)具有潛在的臨床實用價值，前景光明。參考文獻(xiàn)[1]羅海波，鮑行豪．細(xì)菌內(nèi)毒素研究(第一版)[M]．人民衛(wèi)生出版社，1983，6：1～37[2]李鳴真．腸道細(xì)菌和內(nèi)毒素的易位[J]．中國危重病急救醫(yī)學(xué)，1998，10(12)：764～767[3]馮俊明，劉友生，王曉東．燒傷合并內(nèi)毒素血癥早期纖維連接蛋白在腎臟的 及其意義[J]．第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，1998，20(2)：138～141[4]羅海波，朱平，李蘭娟．細(xì)菌毒素與臨床[M]．北京人民衛(wèi)生出版社，1991.[5]董小青，王金蘭，崔穎，等．內(nèi)毒素致病機(jī)理與抗內(nèi)毒素藥物研究[J]．天津 藥學(xué)，2000，15(4)：51～53[6]崔穎，劉俊媛，王金蘭，等．內(nèi)毒素的致熱特性[J]．天津藥學(xué)，2002，(05).： 29～30[7]趙虎，周庭銀．CD14的結(jié)構(gòu)和功能[J]．免疫學(xué)雜志，2000，1(16)：74～75 [8]白潔，蔭?。瓹D14生物學(xué)特性[J]國外醫(yī)學(xué)．生理．病理科學(xué)與臨床分冊， 2000，(2)：124～125[9]秦玉新，張慶柱．內(nèi)毒素作用中的蛋白質(zhì)和信號通路[J]．中國藥理學(xué)通報， 2001，1(10)：1336[10]鄭仲謹(jǐn)．細(xì)菌內(nèi)毒素信號受體的研究[J]．中國急救學(xué)，2001，12(12)：735～737[11]馮起甲，徐智，吳國明，等．脂多糖結(jié)合蛋白與CD14結(jié)合位點模擬肽 的初步篩選[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2007，(16)：1572[12][J].，2003，26(5)：230[13]黃清泉，劉文英．體外人全血熱原檢測方法的研究[J].中國藥學(xué)雜志，2004，39(5)：372[14]陳海松．動態(tài)濁度法定量測定頭抱呱酮鈉中的細(xì)菌內(nèi)毒素[J]．中國藥師， 2005，8(1)：34～35[15]王金蘭．中藥抗內(nèi)毒素生物活性機(jī)理的研究[J]．中草藥學(xué)，1996，27(2)：121～125內(nèi)容總結(jié)
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