【正文】 上一級實驗室技術人員。 檢查樣品的狀況，記錄血液樣品有無嚴重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況。記錄干血斑和尿液樣品包裝是否完整，如果污染過重或者不符合接收要求，應將樣品安全廢棄。并立即將樣品情況通知送樣人，要求重新采集樣品。 接收樣品時應填寫樣品接收單。 12 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 第二章 HIV抗體檢測 1 范圍 本章規(guī)定了HIV抗體的檢測方法、結(jié)果報告及質(zhì)量控制。適用于各級各類醫(yī)療、疾病預防控制、檢驗檢疫、采供血及衛(wèi)生保健機構(gòu)?？勺鳛閷IV感染者診斷和監(jiān)測的實驗室依據(jù)。 2 規(guī)范性文件引用 《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準》（中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準，WS293有效版本）。 Consolidated Guidelines on HIV Testing Services. WHO July 2015 Statement from the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working Group to the Office of the Global AIDS . Guidelines for using HIV testing technologies in surveillance. UNAIDS/. 《艾滋病病毒抗體快速檢測技術手冊》（中國疾病預防控制中心，2011年版。 3 HIV抗體檢測實驗室要求 應符合國家對實驗室生物安全的有關要求。 13 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 實驗室的質(zhì)量控制按本規(guī)范相關章節(jié)規(guī)定執(zhí)行。 4 HIV抗體檢測的目的和要點 HIV抗體檢測的目的 HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。 以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據(jù)特殊需要進行的體檢等。 以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。 以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢，包括各類高危人群、重點人群和一般人群。 HIV抗體檢測的要點 根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。 嚴格遵守實驗室標準操作程序（SOP）。 結(jié)果判定以試劑盒說明書為標準。 篩查試驗有反應，須作補充試驗。 補充試驗是通過檢測樣本中是否存在艾滋病病毒抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感染的檢測方法。補充試驗包括抗體確證試驗（免疫印跡試驗，條帶/線性免疫試驗，特定條件*下的替代檢測，免疫層析或免疫滲濾試驗）和核酸試驗（核酸定性和核酸定量試驗）。替代檢測包括三種酶聯(lián)免疫試驗、三種快速試驗或酶聯(lián)免疫加快速試驗* * 特定條件：高流行地區(qū)（流行率大于5%）、高危人群（如男男同性戀，吸毒人群）、三種試劑均經(jīng)過使用地區(qū)中心實驗室評價。 篩查試驗無反應，不應做補充試驗。 14 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 對篩查及補充試驗對象均應做好咨詢工作。 5 常規(guī)HIV抗體檢測方法 試劑和樣品 必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊批準、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的方法及試劑。 樣品可采用血清、血漿、全血、濾紙干血斑、口腔黏膜滲出液和尿液。 篩查方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 這類試驗可使用血液（包含血清、血漿和濾紙干血斑）、尿液樣品，ELISA多為HIV抗體檢測試劑。HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑可同時檢測血液中HIV1P24抗原和HIV1/2抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標記的HIV抗原/抗體，加底物顯色，用酶標儀測定結(jié)果。有效試驗的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。 化學發(fā)光或免疫熒光試驗（CIA/IFA） 這類試驗采用發(fā)光或熒光底物，可使用血液(包含血清和血漿)、尿液樣品，既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶或熒光標記的HIV抗原/抗體，加發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)果。有效試驗的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。 快速檢測（RT）及其它試驗 15 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 這類試驗可使用血液、口腔黏膜滲出液，操作簡便快速，適用于應急檢測、門診急診檢測、VCT及檢測點等。一般可在10～30分鐘內(nèi)得出結(jié)果。 明膠顆粒凝集試驗（PA）：是HIV抗體檢測的一種簡便方法。將HIV抗原致敏的明膠顆粒，與待檢樣品作用。當待檢樣品含有HIV抗體時，明膠顆粒與抗體發(fā)生凝集反應，根據(jù)凝集情況判讀結(jié)果。PA試劑有兩種:同時檢測HIV1和HIV2抗體以及分別檢測HIV1和HIV2抗體。有效試驗的陰性和陽性對照質(zhì)控，需符合試劑盒的規(guī)定。 免疫滲濾試驗：斑點ELISA和斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗：均以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原點狀或線狀固定在膜上，加待檢樣品，利用微孔濾膜的可濾過性，使抗原抗體反應。陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點或條帶。反應時間在10分鐘以內(nèi)。有效試驗的質(zhì)控點必須顯色。 免疫層析試驗：以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原線狀固定在膜上，待檢樣品沿著固相載體遷移，陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有效試驗的質(zhì)控帶必須顯色。反應時間在30分鐘以內(nèi)。 抗體確證試驗 免疫印跡試驗（WB） WB可使用血清、血漿和濾紙干血斑。WB采用間接法檢測樣品中的抗HIV1/HIV2特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的HIV1蛋白分離開來，然后再把這些分離的不同蛋白帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上（或PVDF膜）。將此膜切割成條狀，每一膜條上均含有經(jīng)電泳分離 16 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 過的HIV抗原。待測樣品經(jīng)適當稀釋后，加至硝酸纖維素膜上，恒溫震蕩，使其充分接觸反應，血清中若含有HIV抗體，就會與膜條上抗原帶相結(jié)合。加入抗人IgG酶結(jié)合物和底物后，根據(jù)出現(xiàn)條帶情況, 按照試劑盒說明書判定標準，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。 （RIBA/LIA） RIBA/LIA采用間接法檢測樣品中的抗HIV1/HIV2特異性抗體。試劑盒的膜條上包被有HIV1/HIV2不同的重組抗原片段，加入待測樣品后，其中的相應抗體與抗原發(fā)生特異性的免疫反應；隨后加入抗人IgG（堿性磷酸酶標記）與HIV特異性IgG抗體相結(jié)合；加入顯色底物后，在堿性磷酸酶的催化下，特異性抗體的結(jié)合部位出現(xiàn)肉眼可見的條帶, 按照試劑盒說明書判定標準，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。 其他方法： 可用于確證的特定條件下的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗或酶聯(lián)加快速試驗，免疫層析和免疫滲濾試驗。 6 結(jié)果報告 篩查報告 HIV抗體篩查試驗報告使用附表1（HIV抗體篩查檢測報告）。篩查試驗無反應報告為“HIV抗體陰性”；有反應必須進行復檢，復檢兩次檢測均無反應報告為“HIV抗體陰性”，復檢檢測均有反應或一個有反應一個無反應需進行“補充試驗”；報告為“HIV感染待確定”，不能出具陽性報告。 17 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 HIV抗體篩查報告需由一名檢驗人員和一名審核者簽字。 確證報告 WB及 RIBA/LIA報告 HIV抗體WB及 RIBA/LIA試驗結(jié)果報告使用附表2（HIV抗體確證檢測報告）。 （1）符合HIV1抗體陽性判斷標準，報告“HIV1抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報告。符合HIV2抗體陽性判斷標準，報告“HIV2抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報告。 （2）符合HIV抗體陰性判斷標準，報告“HIV抗體陰性”。如疑似“窗口期”感染，建議進一步做HIV核酸檢測或24周后隨訪，盡早明確診斷。 （3）符合HIV抗體不確定判斷標準，報告“HIV抗體不確定”，在備注中應注明“24周后復檢”或盡快做核酸檢測。 （4） HIV抗體確證檢測報告應在收到樣品后的7個工作日內(nèi)發(fā)出。 特定條件的用于確證的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗或酶聯(lián)加快速試驗報告。見附表4。 7 質(zhì)量控制 酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制 試劑盒內(nèi)部對照 試劑盒內(nèi)部對照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照。試劑盒內(nèi)部對照用于判斷每次實驗的有效性，不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。每 18 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 一次檢測臨床樣品時，必須有試劑盒內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。如內(nèi)部對照結(jié)果無效，必須重新試驗。 室內(nèi)質(zhì)控品 為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測的重復性而設置的，質(zhì)控品定值必須為弱陽性。外部質(zhì)控品的作用是判斷該批臨床樣品檢測的可信性。因此，每次實驗必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，出現(xiàn)失控時，必須重新試驗。室內(nèi)質(zhì)控品可以購買或?qū)嶒炇易孕兄苽洹?質(zhì)控品應穩(wěn)定、無菌、且不含有影響試劑反應的防腐劑。 LeveyJennings質(zhì)控圖 質(zhì)控圖參數(shù) 外部質(zhì)控品的均值和標準差應建立在實驗室常規(guī)使用方法對外部質(zhì)控品重復測定的基礎上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做5個批次的檢測，每個批次中不少于4個質(zhì)控血清測定結(jié)果，以建立一個臨時性的均值和標準差，當達到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時性的均值和標準差。 （1）算術平均值（x）：代表一組質(zhì)控品測定S/CO值的均值。為了統(tǒng)計學上有顯著性意義，應該采用至少20次（天）測得的外部對照質(zhì)控品的S/CO值計算平均值。 （2）標準差（s）：是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的一個指標，是與質(zhì)控品S/CO值均值有關的預期范圍。一組S/CO值的標準差以s表示。 （3）變異系數(shù)（cv）：是反映各次S/CO值相對于均值離散程度的一個指標，可以用來衡量檢測的重復性或精密度。 19 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 （4）控制限：由實驗室根據(jù)對外部質(zhì)控品檢測結(jié)果的均值和標準差來確定。例如，按照12S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品S/CO均值加減2 個標準差；按照13S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品S/CO均值加減3個標 準差。 質(zhì)控規(guī)則 實驗室在報告結(jié)果之前必須評價質(zhì)控數(shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計算機審核結(jié)果來決定。目前有許多質(zhì)控規(guī)則，常用的是12S和13S規(guī)則。 （1）告警（12S）：當外部質(zhì)控品的S/CO值超出x+2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。若將12S做失控標準，有較高的假失控概率，所以一般不采用。 （2）失控（13S）：當外部質(zhì)控品的S/CO值超出x+3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部質(zhì)控品 穩(wěn)定性下降所致。 質(zhì)控圖的分析及失控處理 實驗室應建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理的程序。 當出現(xiàn)失控時， 必須找出發(fā)生問題的原因，找出解除問題的方法，并消除原因。 室內(nèi)質(zhì)控其他方式—“即刻法”質(zhì)控 “即刻法”質(zhì)控方法是在對同一批外部質(zhì)控品連續(xù)測定3次后，即可對第3次以后的檢驗結(jié)果進行質(zhì)控。具體計算方法如下： 將質(zhì)控品的測定值從小到大排列：x1，x2，x3??xn（x1為最小值，xn為最大值）。 20 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 計算x和s。 計算SI上限值 和SI下限值。 X最大值x SI上限= S xX 最小值 S SI下限= 將SI上限、SI下限與SI值表（表1）中的數(shù)字比較。 表1 SI值表 （1）當SI 上限 和SI 下限 amp。lt。n2s時表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)測定。 繼續(xù)重復以上各項計算。 21 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 （2）當SI上限和SI下限有一值處于n2s～n3s值之間時說明該值在2s～3s 范圍，處于“告警”狀態(tài)。 （3）當SI 屬“失控”。 “即刻法”只能在前20次內(nèi)使用，超出即可采用LJ質(zhì)控圖方法。 快速法抗體檢測質(zhì)控 試劑內(nèi)對照 在質(zhì)控窗口內(nèi)出現(xiàn)質(zhì)控帶，該質(zhì)控帶是試劑自帶的內(nèi)部過程質(zhì)控，說明實驗操作全部完成并且實驗所用材料處于工作狀態(tài)。清潔的檢測區(qū)背景是內(nèi)部陰性過程質(zhì)控。如實驗完成后未呈現(xiàn)紅色質(zhì)控帶，說明試劑盒內(nèi)質(zhì)控無效，該試驗結(jié)果無效，樣品須重檢。 室內(nèi)質(zhì)控品對照 外部質(zhì)控品 可采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。 質(zhì)控品應包含抗體陽性樣品和陰性樣品。自制質(zhì)控品可使用本室保留的陽性樣品， 。下列情況需做質(zhì)量控制：更換試劑批號；更換檢測人員；更換包裝；更換試劑廠家。除此之外，建議每個檢測日檢測一次陽性和陰性質(zhì)控品；如果日檢測量大于50份樣品，至少應作2次質(zhì)控。 出現(xiàn)以下問題，提示存在質(zhì)量隱患，應引起重視：運輸包裝、內(nèi)盒或試劑盒的物理損傷；在單包裝內(nèi)存在混雜物質(zhì)；標簽出現(xiàn)錯誤、缺失或字跡模糊 （特別是產(chǎn)品名稱或出產(chǎn)廠家名稱，批號和貨號，失效期或/和生產(chǎn)日期）；缺失目錄；泄漏或污染；不適宜的存放條件；保護包裝上限和SI下限有一值amp。gt。 n3s值時說明該值已在3s范圍之外， 22 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 紙破損或污