【正文】 細(xì)胞 篩 篩選重組體 重組 DNA技術(shù)操作的主要步驟 載體 質(zhì)粒 噬菌體 病毒 目的基因（外源基因） 基因組 DNA cDNA 人工合成 PCR產(chǎn)物 限制酶消化 開環(huán)載體 DNA 目的基因 連接酶 重組體 轉(zhuǎn)化 體外包裝，轉(zhuǎn)染 帶重組體的宿主 篩選 表型篩選 酶切電泳鑒定 菌落原位雜交 表達(dá)體系的建立： ? 表達(dá)載體的構(gòu)建 ? 受體細(xì)胞的建立 ? 表達(dá)產(chǎn)物的分離純化 （六）克隆基因的表達(dá) ? 標(biāo)準(zhǔn)： 選擇標(biāo)志 強(qiáng)啟動(dòng)子 翻譯調(diào)控序列 多接頭克隆位點(diǎn) ? ： 不宜表達(dá)真核基因組 DNA； 不能加工表達(dá)的真核蛋白質(zhì)； 表達(dá)的蛋白質(zhì)常形成不溶性包涵體 (inclusion body) ； 很難表達(dá)大量可溶性蛋白。 1. 原核表達(dá)體系 ( ) 大鼠胰島素原 cDNA 的表達(dá)和分泌 ? 優(yōu)點(diǎn)： 可表達(dá)克隆的 cDNA及真核基因組 DNA 可適當(dāng)修飾表達(dá)的蛋白質(zhì) 表達(dá)產(chǎn)物分區(qū)域積累 ? 缺點(diǎn)： 操作技術(shù)難、費(fèi)時(shí)、經(jīng)濟(jì) ? 轉(zhuǎn)染 —— 將表達(dá)載體導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程 方法： 磷酸鈣轉(zhuǎn)染 DEAE葡聚糖介導(dǎo)轉(zhuǎn)染 電穿孔 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 顯微注射 （酵母、昆蟲、乳類動(dòng)物細(xì)胞） 表達(dá)載體 pFASTBACI 的物理圖譜 表達(dá)載體 YEpI PT的物理圖譜 第三節(jié) 重組 DNA技術(shù)與醫(yī)學(xué) 的關(guān)系非常密切并前景遠(yuǎn)大 DNA Rebination Technique is Closly Related with Medicine and has a Good Perspective 一、疾病基因的發(fā)現(xiàn)與克隆 根據(jù)基因定位克隆之并研究其性質(zhì)，而認(rèn)識(shí)疾病的分子機(jī)制。 ? 疾病基因發(fā)現(xiàn)的兩個(gè)典型例子 : 脆性 X綜合征 Kallmann綜合征 二、生 物制藥 ?利用基因工程生產(chǎn)有藥用價(jià)值的蛋白質(zhì)、多肽產(chǎn)品已成為當(dāng)今世界一項(xiàng)重大產(chǎn)業(yè)，并將有望成為 21世紀(jì)的支柱產(chǎn)業(yè)。 ?美國 Eli Lilly公司于 1982年首先利用重組DNA技術(shù)合成人胰島素并投放市場(chǎng)，標(biāo)志著生物工程藥物時(shí)代的開始。迄今為止，已有50多種基因工程藥物上市，近千種處于研發(fā)狀態(tài)，形成一個(gè)巨大的高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)，產(chǎn)生了不可估量的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。 重組 DNA醫(yī)藥產(chǎn)品 產(chǎn) 品 功 能 組織胞漿素原激活劑 抗凝 血液因子 VIII 促進(jìn)凝血 顆粒細(xì)胞 巨噬細(xì)胞集落剌激因子 剌激白細(xì)胞生成 促紅細(xì)胞生成素 剌激白細(xì)胞生成 生長因子 (bFGF, EGF) 刺激細(xì)胞生長與分化 生長素 治療侏儒癥 胰島素 治療糖尿病 干擾素 (? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 抗病毒感染及某些腫瘤 白細(xì)胞介素 激活、剌激各類白細(xì)胞 超氧化物歧化酶 抗組織損傷 單克隆抗體 利用其結(jié)合特異性進(jìn)行診斷試驗(yàn)、腫瘤導(dǎo)向治療 乙肝疫苗 (CHO, 酵母 ) 預(yù)防乙肝 口服重組 B亞單位菌體霍亂菌苗 預(yù)防霍亂 基因診斷 (geic diagnosis)是 利用分子生物學(xué)及分子遺傳的技術(shù)和原理 ， 在DNA水平分析 、 鑒定遺傳疾病所涉及基因的置換 、 缺失或插入等突變 。 又稱DNA診斷 。 三、基因診斷與治療 （一）基因診斷的概念 ?基本過程： 區(qū)分或鑒定 DNA的異常 分離、擴(kuò)增待測(cè)的 DNA片斷 ? 能正確擴(kuò)增靶基因； ? 能準(zhǔn)確區(qū)分單個(gè)堿基的差別； ? 本底或噪聲低，不干擾 DNA的鑒定 。 ? 便于完全自動(dòng)化操作，適合大面積、大人群普查。 ?標(biāo)準(zhǔn)： （二）基因治療的概念 ?定義 基因治療 (gene therapy)是向有功能缺陷的細(xì)胞補(bǔ)充相應(yīng)功能的基因，以糾正或補(bǔ)償其基因的缺陷，從而達(dá)到治療的目的。 ?方式 體細(xì)胞基因治療 (somatic cell gene therapy) 性細(xì)胞基因治療 (germ line gene therapy) 1. 產(chǎn)前診斷 2. 攜帶者測(cè)試 3. 癥候前診斷 4. 遺傳病易感性 四、遺傳疾病的預(yù)防 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 , April 1, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 20:19:1520:19:1520:194/1/2023 8:19:15 PM 1以我獨(dú)沈久，愧君相見頻。 :19:1520:19Apr231Apr23 1故人江海別，幾度隔山川。 20:19:1520:19:1520:19Saturday, April 1, 2023 1乍見翻疑夢(mèng)，相悲各問年。 :19:1520:19:15April 1, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 2023年 4月 1日星期六 下午 8時(shí) 19分 15秒 20:19: 1比不了得就不比，得不到的就不要。 。 2023年 4月 下午 8時(shí) 19分 :19April 1, 2023 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 2023年 4月 1日星期六 8時(shí) 19分 15秒 20:19:151 April 2023 1做前，能夠環(huán)視四周；做時(shí)，你只能或者最好沿著以腳為起點(diǎn)的射線向前。 下午 8時(shí) 19分 15秒 下午 8時(shí) 19分 20:19: 沒有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。 , April 1, 2023 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 20:19:1520:19:1520:194/1/2023 8:19:15 PM 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 :19:1520:19Apr231Apr23 1世間成事，不求其絕對(duì)圓滿，留一份不足，可得無限完美。 20:19:1520:19:1520:19Saturday, April 1, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 :19:1520:19:15April 1, 2023 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 4月 1日星期六 下午 8時(shí) 19分 15秒 20:19: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 。 2023年 4月 下午 8時(shí) 19分 :19April 1, 2023 1少年十五二十時(shí)，步行奪得胡馬騎。 2023年 4月 1日星期六 8時(shí) 19分 15秒 20:19:151 April 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。 下午 8時(shí) 19分 15秒 下午 8時(shí) 19分 20:19: 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 , April 1, 2023 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 20:19:1520:19:1520:194/1/2023 8:19:15 PM 1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 :19:1520:19Apr231Apr23 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯(cuò)兒。 20:19:1520:19:1520:19Saturday, April 1, 2023 1知人者智，自知者明。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 :19:1520:19:15April 1, 2023 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 4月 1日星期六 下午 8時(shí) 19分 15秒 20:19: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。 2023年 4月 下午 8時(shí) 19分 :19April 1, 2023 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 2023年 4月 1日星期六 8時(shí) 19分 15秒 20:19:151 April 2023 1一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。 下午 8時(shí) 19分 15秒 下午 8時(shí) 19分 20:19: MOMODA POWERPOINT Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blandit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis ut cursus. 感 謝 您 的 下 載 觀 看 專家告訴