【正文】 ultures） 細胞培養(yǎng)廣泛用于科研和診斷 。 腫瘤藥敏 九 、 醫(yī)學微生物學 （ Medical microbiology） 十 、 分子病理學 （ Molecular pathology） 病理學發(fā)展中分子病理學揭示了由于基因組錯誤引起的分子化學結(jié)構(gòu)缺陷和指導(dǎo)氨基酸合成的堿基序列的錯誤等疾病基礎(chǔ) 。 利用原位雜交技術(shù) ， 在組織切片中 ， 可以看到一些特殊基因和他們的 mRNA的存在 。 極小量的核酸可用 PCR擴增研究基因特異性 。 分子病理學的作用已證明在各種疾病的診斷中。例如，異常血紅蛋白分子的鐮形紅細胞疾病、骨化不全疾病中的異常膠原分子、調(diào)控細胞和組織生長的基因改變、腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用等。 流式細胞術(shù) （ flow cytometry FCM） 可以快速定量細胞內(nèi) DNA， 用于測定腫瘤細胞 DNA的倍體類型和腫瘤組織中 S+G2/M期的細胞所占的細胞比例 （ 生長分數(shù) ） 。 惡性腫瘤細胞中 DNA含量不規(guī)則增多 ， 主要為多倍體 （ polyploid） 和非整倍體 （ aneuploid） ， 良性腫瘤多為二倍體 。 生長快的惡性腫瘤生長分數(shù)較高 ， 檢測 DNA倍體和生長分數(shù)不僅可作為惡性腫瘤診斷的參考指標 ， 而且可反映腫瘤的惡性程度和生物學行為 ， 并可用于細胞免疫分型等 。 生物芯片在病理中的應(yīng)用 隨著人類基因組計劃（ Human Genome project HGP）即全部核苷酸序列（編碼人類全部染色體的約10萬條基因）的完成，人類基因組研究的重心逐漸進入后基因組時代（ postgenome Era），向基因的功能調(diào)控機制及基因的多樣性傾斜。對基因組的表達全貌進行掃描或是對具有大量多態(tài)性的人群基因組進行真正的了解，從而闡明人類的整個生命活動。 生物芯片技術(shù)是通過縮微技術(shù)，根據(jù)分子間特異性地相互作用原理，將生命科學領(lǐng)域中不連續(xù)的分析過程集成于硅芯片或玻璃芯片表面的微型生物化學分析系統(tǒng)，以實現(xiàn)對細胞、蛋白質(zhì)、基因及其它生物組分的準確、快速、大信息量的檢測。 生物芯片的本質(zhì)是進行生物信號的平行分析 ， 它利用微點陣技術(shù)將成千上萬的生物信息密碼集中到一小片固相基質(zhì)上 ， 從而使一些傳統(tǒng)的生物學分析手段能夠在盡量小的空間范圍內(nèi) ， 以盡量快的速度完成 。生物芯片技術(shù)與傳統(tǒng)的儀器檢測方法相比具有高通量 、微型化 、 自動化 、 成本低 、 防污染等特點 。 鑒于生物芯片技術(shù)領(lǐng)域的飛速發(fā)展 ， 美國科學促進會將生物芯片評為 1998年的十大科技突破之一 ， 認為生物芯片技術(shù)將是繼大規(guī)模集成電路之后的又一次具有深遠意義的科學技術(shù)革命 。 通過基因芯片技術(shù)對腫瘤的研究可以發(fā)現(xiàn)大量差異表達基因，即研究與腫瘤相關(guān)的基因群，既可以發(fā)現(xiàn)更多的腫瘤標記蛋白，用于臨床診斷與治療，亦有大規(guī)模研究新基因的初步功能。從基因?qū)W上進行腫瘤分類，從判斷腫瘤細胞分子異質(zhì)性上解釋腫瘤患者臨床表現(xiàn)的差異。同時芯片提供了對未來評價腫瘤治療的新手段。由于發(fā)現(xiàn)在腫瘤基因譜中成百上千的基因參與腫瘤惡性表型，提示新的腫瘤基因治療或功能治療手段將是瞄準信號傳遞的上游分子。 組織芯片是繼基因芯片和蛋白芯片之后生物芯片家庭的又一新成員。它的出現(xiàn)無疑將給病理學研究開辟出一片新天地。 有人預(yù)言：生物芯片將為整個生命期中疾病預(yù)防提供永久性“線路圖”，該項技術(shù)的應(yīng)用前景看好，不僅將用于許多創(chuàng)新性的研究，如腫瘤發(fā)生機制的研究等，而且還將代替?zhèn)鹘y(tǒng)體格檢查和疾病診斷方法，盡早預(yù)知疾病。當代與信息產(chǎn)業(yè)相伴隨的計算機、精密機械等科學技術(shù)是大規(guī)模解析基因信息的基礎(chǔ)，而基因芯片從實驗室走向工業(yè)化卻是直接得益于探針影象原位合成技術(shù)和照相平板印刷技術(shù)的有機結(jié)合、雙色熒光探針雜交系統(tǒng)的建立以及激光共聚焦顯微技術(shù)的引入。它使合成、固定高密度的數(shù)以萬計的探針分子切實可行，而且借助激光共聚焦顯微掃描技術(shù)使得可以對雜交信號進行實時、靈敏、準確的檢測和分析。 原位雜交技術(shù) （ in situ hybridization ） 原位雜交是組織化學和免疫組化兩種方法的革命性突破，用已知堿基序列并帶有標記的核酸探針與組織或細胞中待檢測核酸，按堿基配對的原則進行特異性結(jié)合形成雜交體，然后用與標記物相應(yīng)的檢測系統(tǒng)通過組化或免疫組化方法在被檢測的核酸原位形成帶顏色的雜交信號，在顯微鏡下進行細胞內(nèi)定位，這一技術(shù)為研究單一細胞中 DNA和編碼各種蛋白質(zhì)、多肽的相應(yīng) mRNA的定位提供了可能，為分子水平研究的細胞內(nèi)基因表達及相關(guān)基因調(diào)控提供了有效的工具。 臨床應(yīng)用于細胞遺傳學、產(chǎn)前診斷、腫瘤和傳染病診斷、病原學診斷等，可以原位雜交與免疫組化并檢或多重 RNA的原位雜交、雙重原位雜交、原位雜交的 PCR增敏等，預(yù)測該技術(shù)將會為生命科學開拓新的領(lǐng)域。 十一 、 遠 程 病 理 學 （ telemedicine） 隨著計算機技術(shù)與互聯(lián)網(wǎng)絡(luò)的廣泛應(yīng)用 ， 遠程醫(yī)學應(yīng)運而生 ， 也促使病理學向信息病理 （ pathological information） 、 遠程病理學或稱為傳真病理學（ telepathology） 發(fā)展 ， 遠程病理學是利用計算機及網(wǎng)絡(luò)通訊技術(shù)在相距遙遠的兩個或更多的地域間傳輸數(shù)據(jù)和圖像進行診斷會診 、 教育和研究的病理學運用 。 遠程病理會診一方面可以解決疑難疾病的診斷 ， 同時也是病理醫(yī)生之間相互學習的手段 。 遠程病理學的特點 1 . 多功能 電話 、 電 子 郵 件 和 視 頻 會 議（ videoconferencing） 等進行 。 會診可以是實時的 （ 電話 ）或通過儲存回放 （ storeandforward） 技術(shù) 。 2. 廣覆蓋 ， 只要有電話網(wǎng)絡(luò)可以到達的區(qū)域 ， 遠程病理和會診就可實現(xiàn) 。 3. 中心與非中心概念 ， 即以病員為中心 ， 以專家移動會診為中心 。 以中心醫(yī)院的輻射作用為中心 。 4. 可交流性 ， 遠程病理技術(shù)也方便了病理醫(yī)生與外科醫(yī)生之間的交流 。 5. 遠程病理目前不夠完善的地方 。 十二 、 圖像分析技術(shù) （ image analysis） 隨電子計算機技術(shù)的發(fā)展 ， 形態(tài)定量技術(shù)已從二維空間向三維空間發(fā)展 。 用體視學的方法和原理定量地描述生物組織的形態(tài)結(jié)構(gòu) ， 并根據(jù)生物組織結(jié)構(gòu)特點研究適用于生物組織的體視學測估理論和方法 ， 即生物體視學 。 計算機圖像分析是體視學的重要測估工具 。 病理圖像處理的貢獻在于將一門純形態(tài)學科轉(zhuǎn)變?yōu)榱炕笜?， 使病理形態(tài)分析更為客觀 、 可信和能夠重復(fù)印證 。圖像分析技術(shù)應(yīng)用于腫瘤方面的研究 ， 主要是核形態(tài)參數(shù)的測定 ， 如核直徑 、 周長 、 面積 、 體積 、 形態(tài)因子等 ， 通過測定的數(shù)據(jù)分析區(qū)別良 、 惡性腫瘤 、 癌前病變和癌 、 及腫瘤的組織病理分級等 ， 也用于檢測腫瘤組織中特定抗原 、癌基因蛋白表達等定量分析 。 十三、掃描探針顯微鏡 20世紀以來由于壓電傳控器的出現(xiàn)使機械探針的定位性增強， 1985年 IBM公司的 Binning和 Rohrer研究了一種掃描隧道顯微鏡 （ scanning tunueling microscopy STM） ，使他們獲得了 1986年度諾貝爾物理獎，在此基礎(chǔ)上又發(fā)明了原子力顯微鏡（ atomic force microsopy AFM），使人類觀察的視野又闖進了一個新的層次，利用它人類第一次真切地看到了 DNA鏈是螺旋狀的。 AFM不僅在分子原子水平上對物質(zhì)進行直接觀察，還可以在生物學上對 DNA蛋白質(zhì)進行形態(tài)分析，可以進行直觀下的分子剪輯， DNA特殊位點定位等高水平研究 。 STM和 AFM統(tǒng)稱為掃描探針顯微鏡（ scanning probe microscopy SPM）。 SPM與經(jīng)典的透射電鏡相比 ， 被測樣品無需在制備時采用噴鍍增加成像反差 ， 也無需進行染色和標記等復(fù)雜處理 ， 保證了所觀察樣品結(jié)構(gòu)的真實性 。 SPM成像環(huán)境也沒有特別的要求 ， 可在活體上觀察細胞 DNA的改變 。 1992年美國斯坦福大學 Braunstein和 Spudich獲得了活細胞核孔的 SPM影像 ， 并觀察到細胞核內(nèi)外離子交換的通道 （ 直徑為 40nm， 深度為 2nm） 。 Kasas等則在常規(guī)緩沖液中用SPM對活細胞進行動態(tài)觀察 ， 直到實驗結(jié)束 ， 細胞仍是活的 ， 不影響細胞生長 ， 因此有可能用 SPM對病理細胞進行人工操縱 ， 以達到對個別病理細胞進行手術(shù)的目的 ， 即納米外科 （ namisurgery） 。 由于 SPM針尖采集的表面結(jié)構(gòu)圖像可在掃描過程中以三維形式直接顯示到計算機屏幕上 ， 因此可以定量分析被測樣品的空間構(gòu)象 ， 這一特點是目前已有的其它顯微鏡無法比擬的 。 因此人們預(yù)言在 SPM下閱讀人體基因圖的日子已經(jīng)不遠了 。 第一節(jié) 病理診斷 第二節(jié) 病理與臨床的關(guān)系 第三節(jié) 病理工作的基本流程 第四節(jié) 細胞病理學 第五節(jié) 術(shù)中病理診斷 第六節(jié) 尸檢的作用 第七節(jié) 病理學發(fā)展概要 演講完畢，謝謝觀看！