【正文】 ultures） 細(xì)胞培養(yǎng)廣泛用于科研和診斷 。 腫瘤藥敏 九 、 醫(yī)學(xué)微生物學(xué) （ Medical microbiology） 十 、 分子病理學(xué) （ Molecular pathology） 病理學(xué)發(fā)展中分子病理學(xué)揭示了由于基因組錯(cuò)誤引起的分子化學(xué)結(jié)構(gòu)缺陷和指導(dǎo)氨基酸合成的堿基序列的錯(cuò)誤等疾病基礎(chǔ) 。 利用原位雜交技術(shù) ， 在組織切片中 ， 可以看到一些特殊基因和他們的 mRNA的存在 。 極小量的核酸可用 PCR擴(kuò)增研究基因特異性 。 分子病理學(xué)的作用已證明在各種疾病的診斷中。例如，異常血紅蛋白分子的鐮形紅細(xì)胞疾病、骨化不全疾病中的異常膠原分子、調(diào)控細(xì)胞和組織生長(zhǎng)的基因改變、腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用等。 流式細(xì)胞術(shù) （ flow cytometry FCM） 可以快速定量細(xì)胞內(nèi) DNA， 用于測(cè)定腫瘤細(xì)胞 DNA的倍體類(lèi)型和腫瘤組織中 S+G2/M期的細(xì)胞所占的細(xì)胞比例 （ 生長(zhǎng)分?jǐn)?shù) ） 。 惡性腫瘤細(xì)胞中 DNA含量不規(guī)則增多 ， 主要為多倍體 （ polyploid） 和非整倍體 （ aneuploid） ， 良性腫瘤多為二倍體 。 生長(zhǎng)快的惡性腫瘤生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)較高 ， 檢測(cè) DNA倍體和生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)不僅可作為惡性腫瘤診斷的參考指標(biāo) ， 而且可反映腫瘤的惡性程度和生物學(xué)行為 ， 并可用于細(xì)胞免疫分型等 。 生物芯片在病理中的應(yīng)用 隨著人類(lèi)基因組計(jì)劃（ Human Genome project HGP）即全部核苷酸序列（編碼人類(lèi)全部染色體的約10萬(wàn)條基因）的完成，人類(lèi)基因組研究的重心逐漸進(jìn)入后基因組時(shí)代（ postgenome Era），向基因的功能調(diào)控機(jī)制及基因的多樣性?xún)A斜。對(duì)基因組的表達(dá)全貌進(jìn)行掃描或是對(duì)具有大量多態(tài)性的人群基因組進(jìn)行真正的了解，從而闡明人類(lèi)的整個(gè)生命活動(dòng)。 生物芯片技術(shù)是通過(guò)縮微技術(shù)，根據(jù)分子間特異性地相互作用原理，將生命科學(xué)領(lǐng)域中不連續(xù)的分析過(guò)程集成于硅芯片或玻璃芯片表面的微型生物化學(xué)分析系統(tǒng)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞、蛋白質(zhì)、基因及其它生物組分的準(zhǔn)確、快速、大信息量的檢測(cè)。 生物芯片的本質(zhì)是進(jìn)行生物信號(hào)的平行分析 ， 它利用微點(diǎn)陣技術(shù)將成千上萬(wàn)的生物信息密碼集中到一小片固相基質(zhì)上 ， 從而使一些傳統(tǒng)的生物學(xué)分析手段能夠在盡量小的空間范圍內(nèi) ， 以盡量快的速度完成 。生物芯片技術(shù)與傳統(tǒng)的儀器檢測(cè)方法相比具有高通量 、微型化 、 自動(dòng)化 、 成本低 、 防污染等特點(diǎn) 。 鑒于生物芯片技術(shù)領(lǐng)域的飛速發(fā)展 ， 美國(guó)科學(xué)促進(jìn)會(huì)將生物芯片評(píng)為 1998年的十大科技突破之一 ， 認(rèn)為生物芯片技術(shù)將是繼大規(guī)模集成電路之后的又一次具有深遠(yuǎn)意義的科學(xué)技術(shù)革命 。 通過(guò)基因芯片技術(shù)對(duì)腫瘤的研究可以發(fā)現(xiàn)大量差異表達(dá)基因，即研究與腫瘤相關(guān)的基因群，既可以發(fā)現(xiàn)更多的腫瘤標(biāo)記蛋白，用于臨床診斷與治療，亦有大規(guī)模研究新基因的初步功能。從基因?qū)W上進(jìn)行腫瘤分類(lèi)，從判斷腫瘤細(xì)胞分子異質(zhì)性上解釋腫瘤患者臨床表現(xiàn)的差異。同時(shí)芯片提供了對(duì)未來(lái)評(píng)價(jià)腫瘤治療的新手段。由于發(fā)現(xiàn)在腫瘤基因譜中成百上千的基因參與腫瘤惡性表型，提示新的腫瘤基因治療或功能治療手段將是瞄準(zhǔn)信號(hào)傳遞的上游分子。 組織芯片是繼基因芯片和蛋白芯片之后生物芯片家庭的又一新成員。它的出現(xiàn)無(wú)疑將給病理學(xué)研究開(kāi)辟出一片新天地。 有人預(yù)言：生物芯片將為整個(gè)生命期中疾病預(yù)防提供永久性“線(xiàn)路圖”，該項(xiàng)技術(shù)的應(yīng)用前景看好，不僅將用于許多創(chuàng)新性的研究，如腫瘤發(fā)生機(jī)制的研究等，而且還將代替?zhèn)鹘y(tǒng)體格檢查和疾病診斷方法，盡早預(yù)知疾病。當(dāng)代與信息產(chǎn)業(yè)相伴隨的計(jì)算機(jī)、精密機(jī)械等科學(xué)技術(shù)是大規(guī)模解析基因信息的基礎(chǔ)，而基因芯片從實(shí)驗(yàn)室走向工業(yè)化卻是直接得益于探針影象原位合成技術(shù)和照相平板印刷技術(shù)的有機(jī)結(jié)合、雙色熒光探針雜交系統(tǒng)的建立以及激光共聚焦顯微技術(shù)的引入。它使合成、固定高密度的數(shù)以萬(wàn)計(jì)的探針?lè)肿忧袑?shí)可行，而且借助激光共聚焦顯微掃描技術(shù)使得可以對(duì)雜交信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)、靈敏、準(zhǔn)確的檢測(cè)和分析。 原位雜交技術(shù) （ in situ hybridization ） 原位雜交是組織化學(xué)和免疫組化兩種方法的革命性突破，用已知堿基序列并帶有標(biāo)記的核酸探針與組織或細(xì)胞中待檢測(cè)核酸，按堿基配對(duì)的原則進(jìn)行特異性結(jié)合形成雜交體，然后用與標(biāo)記物相應(yīng)的檢測(cè)系統(tǒng)通過(guò)組化或免疫組化方法在被檢測(cè)的核酸原位形成帶顏色的雜交信號(hào)，在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)定位，這一技術(shù)為研究單一細(xì)胞中 DNA和編碼各種蛋白質(zhì)、多肽的相應(yīng) mRNA的定位提供了可能，為分子水平研究的細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)及相關(guān)基因調(diào)控提供了有效的工具。 臨床應(yīng)用于細(xì)胞遺傳學(xué)、產(chǎn)前診斷、腫瘤和傳染病診斷、病原學(xué)診斷等，可以原位雜交與免疫組化并檢或多重 RNA的原位雜交、雙重原位雜交、原位雜交的 PCR增敏等，預(yù)測(cè)該技術(shù)將會(huì)為生命科學(xué)開(kāi)拓新的領(lǐng)域。 十一 、 遠(yuǎn) 程 病 理 學(xué) （ telemedicine） 隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)與互聯(lián)網(wǎng)絡(luò)的廣泛應(yīng)用 ， 遠(yuǎn)程醫(yī)學(xué)應(yīng)運(yùn)而生 ， 也促使病理學(xué)向信息病理 （ pathological information） 、 遠(yuǎn)程病理學(xué)或稱(chēng)為傳真病理學(xué)（ telepathology） 發(fā)展 ， 遠(yuǎn)程病理學(xué)是利用計(jì)算機(jī)及網(wǎng)絡(luò)通訊技術(shù)在相距遙遠(yuǎn)的兩個(gè)或更多的地域間傳輸數(shù)據(jù)和圖像進(jìn)行診斷會(huì)診 、 教育和研究的病理學(xué)運(yùn)用 。 遠(yuǎn)程病理會(huì)診一方面可以解決疑難疾病的診斷 ， 同時(shí)也是病理醫(yī)生之間相互學(xué)習(xí)的手段 。 遠(yuǎn)程病理學(xué)的特點(diǎn) 1 . 多功能 電話(huà) 、 電 子 郵 件 和 視 頻 會(huì) 議（ videoconferencing） 等進(jìn)行 。 會(huì)診可以是實(shí)時(shí)的 （ 電話(huà) ）或通過(guò)儲(chǔ)存回放 （ storeandforward） 技術(shù) 。 2. 廣覆蓋 ， 只要有電話(huà)網(wǎng)絡(luò)可以到達(dá)的區(qū)域 ， 遠(yuǎn)程病理和會(huì)診就可實(shí)現(xiàn) 。 3. 中心與非中心概念 ， 即以病員為中心 ， 以專(zhuān)家移動(dòng)會(huì)診為中心 。 以中心醫(yī)院的輻射作用為中心 。 4. 可交流性 ， 遠(yuǎn)程病理技術(shù)也方便了病理醫(yī)生與外科醫(yī)生之間的交流 。 5. 遠(yuǎn)程病理目前不夠完善的地方 。 十二 、 圖像分析技術(shù) （ image analysis） 隨電子計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展 ， 形態(tài)定量技術(shù)已從二維空間向三維空間發(fā)展 。 用體視學(xué)的方法和原理定量地描述生物組織的形態(tài)結(jié)構(gòu) ， 并根據(jù)生物組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)研究適用于生物組織的體視學(xué)測(cè)估理論和方法 ， 即生物體視學(xué) 。 計(jì)算機(jī)圖像分析是體視學(xué)的重要測(cè)估工具 。 病理圖像處理的貢獻(xiàn)在于將一門(mén)純形態(tài)學(xué)科轉(zhuǎn)變?yōu)榱炕笜?biāo) ， 使病理形態(tài)分析更為客觀(guān) 、 可信和能夠重復(fù)印證 。圖像分析技術(shù)應(yīng)用于腫瘤方面的研究 ， 主要是核形態(tài)參數(shù)的測(cè)定 ， 如核直徑 、 周長(zhǎng) 、 面積 、 體積 、 形態(tài)因子等 ， 通過(guò)測(cè)定的數(shù)據(jù)分析區(qū)別良 、 惡性腫瘤 、 癌前病變和癌 、 及腫瘤的組織病理分級(jí)等 ， 也用于檢測(cè)腫瘤組織中特定抗原 、癌基因蛋白表達(dá)等定量分析 。 十三、掃描探針顯微鏡 20世紀(jì)以來(lái)由于壓電傳控器的出現(xiàn)使機(jī)械探針的定位性增強(qiáng)， 1985年 IBM公司的 Binning和 Rohrer研究了一種掃描隧道顯微鏡 （ scanning tunueling microscopy STM） ，使他們獲得了 1986年度諾貝爾物理獎(jiǎng)，在此基礎(chǔ)上又發(fā)明了原子力顯微鏡（ atomic force microsopy AFM），使人類(lèi)觀(guān)察的視野又闖進(jìn)了一個(gè)新的層次，利用它人類(lèi)第一次真切地看到了 DNA鏈?zhǔn)锹菪隣畹摹?AFM不僅在分子原子水平上對(duì)物質(zhì)進(jìn)行直接觀(guān)察，還可以在生物學(xué)上對(duì) DNA蛋白質(zhì)進(jìn)行形態(tài)分析，可以進(jìn)行直觀(guān)下的分子剪輯， DNA特殊位點(diǎn)定位等高水平研究 。 STM和 AFM統(tǒng)稱(chēng)為掃描探針顯微鏡（ scanning probe microscopy SPM）。 SPM與經(jīng)典的透射電鏡相比 ， 被測(cè)樣品無(wú)需在制備時(shí)采用噴鍍?cè)黾映上穹床?， 也無(wú)需進(jìn)行染色和標(biāo)記等復(fù)雜處理 ， 保證了所觀(guān)察樣品結(jié)構(gòu)的真實(shí)性 。 SPM成像環(huán)境也沒(méi)有特別的要求 ， 可在活體上觀(guān)察細(xì)胞 DNA的改變 。 1992年美國(guó)斯坦福大學(xué) Braunstein和 Spudich獲得了活細(xì)胞核孔的 SPM影像 ， 并觀(guān)察到細(xì)胞核內(nèi)外離子交換的通道 （ 直徑為 40nm， 深度為 2nm） 。 Kasas等則在常規(guī)緩沖液中用SPM對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀(guān)察 ， 直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束 ， 細(xì)胞仍是活的 ， 不影響細(xì)胞生長(zhǎng) ， 因此有可能用 SPM對(duì)病理細(xì)胞進(jìn)行人工操縱 ， 以達(dá)到對(duì)個(gè)別病理細(xì)胞進(jìn)行手術(shù)的目的 ， 即納米外科 （ namisurgery） 。 由于 SPM針尖采集的表面結(jié)構(gòu)圖像可在掃描過(guò)程中以三維形式直接顯示到計(jì)算機(jī)屏幕上 ， 因此可以定量分析被測(cè)樣品的空間構(gòu)象 ， 這一特點(diǎn)是目前已有的其它顯微鏡無(wú)法比擬的 。 因此人們預(yù)言在 SPM下閱讀人體基因圖的日子已經(jīng)不遠(yuǎn)了 。 第一節(jié) 病理診斷 第二節(jié) 病理與臨床的關(guān)系 第三節(jié) 病理工作的基本流程 第四節(jié) 細(xì)胞病理學(xué) 第五節(jié) 術(shù)中病理診斷 第六節(jié) 尸檢的作用 第七節(jié) 病理學(xué)發(fā)展概要 演講完畢，謝謝觀(guān)看！