【導(dǎo)讀】調(diào)實驗室管理層和個人責(zé)任對實驗室生物安全的重要作用。作的在職職工、訪問者都必須嚴(yán)格遵守本手冊。

　　

【正文】 期除霜和清掃。其中所有的安瓿、凍存管等在貯存過程中已破裂的要拿走。在清掃的過程中應(yīng)配戴臉部保護裝置以及戴手套，清掃后，抽屜內(nèi)表面應(yīng)消毒。 2. 所有保存在冰箱里的容器等，都應(yīng)該有清楚的標(biāo)簽，并且標(biāo)簽上有內(nèi)容物的科學(xué)命名、貯存日期和貯存人姓名。無標(biāo)簽的和過期的材料應(yīng)高壓滅菌后丟掉。 3. 應(yīng)該始終有冰箱內(nèi)容物的詳細目錄。 4. 易燃液不準(zhǔn)保存在冰箱里，除非是防爆的，冰箱的門上應(yīng)張貼這方面 的注意事項。 開啟裝有凍干傳染性物質(zhì)的安瓿 當(dāng)開啟裝有凍干傳染性物質(zhì)的安瓿時應(yīng)注意，因其中的內(nèi)容物可能處于負壓下，空氣的突然涌入會使內(nèi)容物的一部分?jǐn)U散到空氣中。安瓿應(yīng)始終在生物安全柜內(nèi)打開，打開安瓿推薦使用下面的步驟。 首先消毒安瓿的外表面。 瓶子里如果有棉塞或纖維塞，應(yīng)先用砂輪在安瓿外表面的塞子中部附近刻下劃痕。 于劃痕處打破安瓿以前，先在手里墊一塊酒精浸透的棉花再握住安瓿，以保護手部。 輕輕地移去頂部并且視作污染物對待。 如果棉塞或纖維塞仍然留在安瓿的內(nèi) 容物上，用滅菌的鑷子拿走。 向安瓿內(nèi)緩慢地加液體重懸內(nèi)容物，避免產(chǎn)生氣泡。 32 關(guān)于血液、體液、組織和排泄物的特殊預(yù)防措施 下面列出的要點旨在保護實驗室人員避免血源性微生物的感染 標(biāo)本的收集、貼標(biāo)簽及運輸 1. 應(yīng)始終堅持全面的預(yù)防措施；所有的操作都要戴手套完成。 2. 從病人或動物身上采集血液應(yīng)由受過訓(xùn)練的人員來完成。 3. 靜脈采血時，應(yīng)以專用的安全真空采血器代替常規(guī)的針頭和注射器，這樣可使采集到的血液直接流入有塞子的運輸管和 /或培養(yǎng)管，并且針頭用后可以自毀。 4. 管子應(yīng)放在適當(dāng)?shù)娜萜骼镆?備運往實驗室和在實驗室內(nèi)運輸。標(biāo)本申請單應(yīng)放在防水的袋子或信封里。 5. 收樣人員不應(yīng)打開這些袋子。 打開標(biāo)本管或標(biāo)本容器 1. 標(biāo)本管應(yīng)該在 Ⅰ 級或 Ⅱ 級生物安全柜里打開。 2. 必須戴手套。也推薦使用眼部和粘膜保護裝置（護目鏡或面罩（頭盔））。 3. 防護服外應(yīng)再戴一個塑料圍裙。 4. 打開標(biāo)本管的塞子時，應(yīng)在手里先墊上一塊紙或紗布再握住塞子，防止濺出。 玻璃和 “銳器 ” 1. 只要有可能，就應(yīng)以塑料器皿代替玻璃器皿，只有實驗室級玻璃（硼硅酸鹽）才可使用，而且任何碎裂的或有 裂紋的器皿都應(yīng)丟掉。 2. 皮下注射針不應(yīng)用作吸管，帶有鈍套管的可以。 用于顯微鏡技術(shù)的薄膜和涂片 用顯微技術(shù)檢測固定并染色的血液、痰和排泄物標(biāo)本時，不需殺死涂片上的所有微生物和病毒，所以這些涂片等物品應(yīng)用鑷子來操作，適當(dāng)貯存，并且在丟掉以前要消毒和 /或高壓滅菌。 消毒 推薦使用次氯酸鹽和高級消毒劑進行消毒。一般新配制的次氯酸鹽溶液有效氯含量應(yīng)為 1g/l，但用于消毒溢出的血液，有效氯含量 則應(yīng)為 10g/l。戊二醛可用于表面消毒。 33 第八章 病原微生物采集、包裝、運輸、接收制度 安全指南 對于實驗室工作人員最先考慮到的應(yīng)是實驗的安全，其他醫(yī)務(wù)人員也許沒在意在送往實驗室的標(biāo)本中潛在有病原體，所以要制定安全規(guī)章制度以保護實驗室人員和其他可能接觸到病原體的人員。大多數(shù)的微生物實驗室的手冊中都有實驗室安全操作章節(jié)部分，實驗室操作手冊中還應(yīng)該包括有關(guān)標(biāo)本管理的安全操作的內(nèi)容。有關(guān)生物安全的參考資料對于每個微生物實驗室都適用 。 直接有關(guān)標(biāo)本的安全管理方針： 1， 所有采集標(biāo)本的操作要戴手套，穿工作 外套、口罩、甚至護目鏡。 2， 所有標(biāo)本容器必須防漏，運送也應(yīng)裝入密封防漏的塑料袋中，袋上附有一表格用于填寫日期、時間、姓名之用。 3， 決不能將針頭暴露的注射器送到實驗室。應(yīng)將注射器中的標(biāo)本注入無菌試管中?；虿捎梅雷o手段取掉針頭，再蓋上注射器并放入密封防漏的塑料袋中送檢。 4， 不得將裝有標(biāo)本的破損容器送往實驗室，也不能對其進一步處理。應(yīng)該及時向醫(yī)生通報容器滲漏，解釋如果留用標(biāo)本，會帶來的潛在危害性并要求重新送檢。如果新標(biāo)本送來，則將泄漏的標(biāo)本高溫高壓處 理后再廢棄掉 。 標(biāo)本采集的原則 1， 采集任何標(biāo)本前，都應(yīng)先填寫檢驗單，選擇適當(dāng)?shù)臉?biāo)本容器，在容器外面貼上標(biāo)簽，標(biāo)明、姓名、性別、檢驗?zāi)康募八万炄掌诘取? 2， 采集標(biāo)本前、后及送驗前均應(yīng)仔細遂項核對檢驗單，以防發(fā)生差錯，并應(yīng)向病人說明檢驗項目的有關(guān)事宜。以消除顧慮，取得配合。 34 3， 采集時應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，不可混入防腐劑、消毒劑及其它藥物，以免影響檢驗結(jié)果。 4， 采集各項標(biāo)本均應(yīng)按照規(guī)定要求做到：及時采集，標(biāo)本要新鮮，量要準(zhǔn)確，按時送驗，不應(yīng)放置過久，以免影響檢驗結(jié)果 ，特殊標(biāo)本要注明采集時間。 5， 必須掌握正確的標(biāo)本采集方法。 標(biāo)本的選擇與采集 采集送檢標(biāo)本前，必須有所選擇標(biāo)本的種類和采集部位并要反應(yīng)有效病程。如果不選擇有效部位，再好的方法采集的標(biāo)本，沒有有效病原體也沒多大臨床價值。以下為普通標(biāo)本的選擇與采集指南： 痰標(biāo)本 根據(jù)痰標(biāo)本采集的時間，可將標(biāo)本分為三類： 即時痰：就診時深呼吸后咳出的痰液； 晨痰：患者晨起立即用清水漱口后，咳出的第 2 口、第 3 口痰液； 夜間痰：送痰前一日，患者晚間咳出的痰液。 痰采集方法宣教 對肺結(jié)核可疑癥狀者，臨床醫(yī)護人員應(yīng)通過解釋，使其充分了解痰標(biāo)本質(zhì)量對檢查結(jié)果的影響，示范并指導(dǎo)其掌握從肺部深處咳痰的方法；如患者識字，可提供宣教材料。 患者留取的痰標(biāo)本，應(yīng)由檢驗人員或經(jīng)培訓(xùn)的專人目視檢查標(biāo)本質(zhì)量（特別是用于初次診斷的痰標(biāo)本）。合格的痰標(biāo)本應(yīng)是患者深呼吸后，由肺部深處咳出的分泌物，標(biāo)本量一般在 3～ 5 ml。 留痰場所 由于患者咳嗽、咳痰時，易產(chǎn)生含有結(jié)核菌的飛沫，感染周邊人群的機率較高，故采集痰標(biāo)本時應(yīng)在遠離人群的開放空間進行，或在通風(fēng)良好的室內(nèi)進行。 痰標(biāo)本性狀 干酪痰： 標(biāo)本外觀以黃色（或奶酪色）、膿樣、團塊狀的肺部分泌物為主，粘度較粘液痰低，制片時較易涂抹；涂片染色后鏡檢，可發(fā)現(xiàn)大量膿性炎癥細胞、 35 肺上皮脫落細胞。由于此類標(biāo)本是由肺部深處咳出，對肺結(jié)核的診斷最有價值，故抗酸桿菌（ Acidfast bacillic， AFB）的檢出率較高。 血痰： 此類標(biāo)本是因粘液痰或干酪痰標(biāo)本中混有血液而形成，顏色為褐色或深褐色、鮮紅色或伴有血絲；痰涂片染色后鏡檢除能夠觀察到粘液痰或干酪痰的細胞特征外，含新鮮血液的標(biāo)本中可見到被染色的血細胞。由于含血標(biāo)本易干擾抗 酸桿菌鏡檢的結(jié)果，故在制片時應(yīng)盡量避免挑取含血標(biāo)本。 粘液痰： 標(biāo)本外觀以白色、粘稠度較高的肺部和支氣管分泌物為主，制片時需仔細涂抹；痰涂片染色后鏡檢時，鏡下可見支氣管內(nèi)膜纖毛柱狀上皮細胞，伴有少量肺上皮脫落細胞、膿性炎癥細胞、口腔脫落細胞及口腔寄生菌。此類標(biāo)本的抗酸桿菌檢出率較唾液高。 唾液： 目視觀察標(biāo)本整體外觀，以透明或半透明水樣、粘度較低的口腔分泌物為主，標(biāo)本中有時伴有氣泡；痰涂片染色鏡檢時，鏡下可見少量口腔上皮脫落細胞和口腔內(nèi)寄生菌，有時可見食物殘渣。由于此類標(biāo)本進行抗酸桿菌檢查時的檢出率很低，用于確 診患者是不合格的標(biāo)本。 合格的痰標(biāo)本一般為干酪痰、褐色血痰或含少量新鮮血液的血痰、粘液痰。痰標(biāo)本不合格時，應(yīng)進一步指導(dǎo)并要求患者重新送檢。進行細菌學(xué)檢查時應(yīng)在登記本和檢驗報告單上注明標(biāo)本性狀，以供分析結(jié)果時參考。 標(biāo)本的接收和拒收標(biāo)準(zhǔn) 有時，送到實驗室的標(biāo)本采集的部位不當(dāng)、采集和運送不當(dāng)，這些在本質(zhì)上屬于標(biāo)本失控，失控的過程也必須予以同樣的重視。失控標(biāo)本得出的結(jié)果會提供錯誤的信息，導(dǎo)致誤診和治療不當(dāng)。因此，實驗室必須堅持一條嚴(yán)格的標(biāo)本接收和拒收準(zhǔn)則。 正確采 集和處理標(biāo)本是診斷感染性疾病的關(guān)鍵。實驗室有責(zé)任指導(dǎo)臨床正確地采集和運送標(biāo)本，這就要求實驗室提供實驗室手冊印刷品，若有必要實驗室也可以提供培訓(xùn)，若實驗室的策略和規(guī)程有變化應(yīng)該及時予以補充并傳達。 實驗室一旦接收到標(biāo)本，應(yīng)該馬上在檢驗申請單上簽上收到日期和時間。此時，應(yīng)該檢查標(biāo)本和申請單以確保其達到所要求的接收標(biāo)準(zhǔn)。要建立標(biāo)本接收的最低標(biāo)準(zhǔn)，同時要有不合格標(biāo)本（未達到接收標(biāo)準(zhǔn)）的拒收標(biāo)準(zhǔn)。 36 一旦確定拒收標(biāo)本，就一定要及時通知提供標(biāo)本的相關(guān)人員，以便及時重新采集合格的標(biāo)本送檢。 以下列舉了幾條明確的實驗室準(zhǔn)則，必 須使其成為制度，予以執(zhí)行，以保證標(biāo)本質(zhì)量： 1， 無標(biāo)簽的標(biāo)本， 標(biāo)本容器上未貼標(biāo)簽或貼錯了標(biāo)簽 ， 不接收。 標(biāo)本容器上的信息與化驗單不符，不接受。 2， 延誤的標(biāo)本， 運送標(biāo)本的時間過長 ， 不接收。警告送檢者并要求其重新送檢，在報告中注明 “送檢延誤 ”。 3， 送檢容器不當(dāng)或滲漏，不予接收，告知送檢者并要求重新送檢。 4， 標(biāo)本不合要求，標(biāo)本量不夠，不接收。聯(lián)系送檢者，闡明試驗要求，說明其不同之處，要求其再送檢符合試驗要求的標(biāo)本。 5， 也有例外的情況，就是即使得到的標(biāo)本質(zhì)量不好也必須要作檢測，例如情況特殊或取材困難等。 標(biāo)本容器 痰盒 統(tǒng)一使用螺旋蓋、可密封、廣口的痰盒收集痰標(biāo)本。參考規(guī)格：直徑 4 厘米，高度 2 厘米。醫(yī)務(wù)人員在容器上應(yīng)注明患者姓名、編號（門診序號或登記號）、檢查項目、痰標(biāo)本序號 3（ 1 為即時痰， 2 為夜間痰， 3 為次日晨痰），然后交給患者。 接收標(biāo)本 接收標(biāo)本指定一個 送痰處 。 打開包裝 接收并打開標(biāo)本包裝的人員應(yīng)該知道由此引起的潛在的健康威脅，并且應(yīng)受過全面的防護方面的培訓(xùn)，尤其是處理破裂的或滲露的容器。標(biāo)本應(yīng)該在生物安全柜里打開包裝，同時備有消毒劑。 37 第九章 菌種 （株） 的 管理 菌（毒）種及樣本的保管、使用和銷毀制度 (一 ) 因工作需要使用毒種以及樣本從事相關(guān)實驗活動時，需經(jīng)實驗室負責(zé)人和單位負責(zé)人批準(zhǔn)后方可進行，并登記備案。 (二 ) 從事醫(yī)學(xué)病原微生物毒種以及樣本實驗活動的專業(yè)人員，單位應(yīng)該按照國家規(guī)定采取有效的安全防護和醫(yī)療保障措施。 (三 ) 使用和操作一、二類醫(yī)學(xué)微生物毒種時，須按照國 家標(biāo)準(zhǔn)《 人間傳染的病原微生物名錄 》，和生物安全操作規(guī)程進行，應(yīng)由 2 名工作人員同時操作，做好實驗記錄并按規(guī)定保存。 (四 ) 凡進行醫(yī)學(xué)病原微生物毒種以及樣本的動物實驗時，都應(yīng)相應(yīng)地升一級管理。 (五 ) 需要銷毀的醫(yī)學(xué)病原微生物毒種以及樣本包括：國際組織建議的經(jīng)衛(wèi)生主管部門批準(zhǔn)的已經(jīng)消滅的傳染病保藏毒種和樣本，經(jīng)專業(yè)機構(gòu)認可的無保留價值的保藏毒種和樣本，保藏過程中出現(xiàn)的無保留價值的保藏毒種或中間產(chǎn)物，實驗室完成相關(guān)實驗活動后上交的無保留價值的毒種和樣本。 (六 ) 銷毀國際組織建議的已經(jīng)消滅的傳染病保藏毒種和樣本，需獲得國務(wù)院衛(wèi)生主管部 門批準(zhǔn)。 (七 ) 銷毀長期無流行但可能會涉及生物多樣性的保藏毒種，需經(jīng)相關(guān)專業(yè)機構(gòu)認可批準(zhǔn)。 (八 ) 在實施銷毀前，應(yīng)制訂銷毀方案，注明銷毀原因、時間、方法、品種和數(shù)量。 (九 ) 對于特殊理化性質(zhì)的毒種和樣本的銷毀應(yīng)使用可靠的銷毀設(shè)施和方法，并進行滅活效果驗證。 (十 ) 實驗室在相關(guān)實驗活動結(jié)束后，依照規(guī)定及時將病原微生物菌 (毒 )種和樣本就地銷毀或者送交保藏機構(gòu)保管 。 38 (十一 ) 實驗室使用新技術(shù)、新方法從事高致病性病原微生物相關(guān)實驗活動 必須 經(jīng)國家病原微生物實驗室生物安全專家委員會論證 。 (十二 ) 在同一個實驗室的同一個獨立安全區(qū)域內(nèi) 只能 同時從事 一 種 高致病性病 原微生物的相關(guān)實驗活動 。 實驗室菌（毒）種使用管理方法 1. 免疫預(yù)防所設(shè)有專門的菌（毒）種室。 2. 放置 1 臺－ 70℃ 超低溫冰柜專門用于存放 菌（毒）種 ，不得存放任何其它物品。 3. 冰柜需有雙路電源系統(tǒng)，保證冰柜能有連續(xù)而穩(wěn)定的電力供應(yīng)，并配有冰柜溫度自動監(jiān)測報警系統(tǒng)，值守人員還需要每天檢查冰柜運行狀況并記錄。 4. 菌（毒）種 由實驗室的專業(yè)技術(shù)人員分類后裝入毒種盒， 并 存入上述冰柜 中 ，冰柜需加 雙 鎖。由 實驗室 主任和實驗室菌（毒）種負責(zé)人分別保存 鑰匙，只有兩把鑰匙同時存在時才能取出 菌（毒）種 。 5. 菌（毒）種 存放應(yīng)有清晰而明確的標(biāo)記。 6. 每一 菌（毒）種 均有分離株 ID 號，年份和來源地等信息。存放 菌（毒）種 的毒種盒和冰柜要有 相關(guān)“菌（毒）種” 的明顯標(biāo)記。 7. 所有 菌（毒）種 的詳細資料要妥善保管。包括 菌（毒）種 詳細的實驗室和流行病信息以及