第六章-獸藥殘留檢測技術(shù)--苯并咪唑類-資料下載頁
2025-08-05 15:47本頁面
【正文】 ,建立了基于 HRP的競爭性 ELISA法檢測牛肝組織中的苯并咪唑類殘留。 氣相色譜法 ? 只有 少數(shù) 苯并咪唑類藥物 (如 :TBZ、 5OHTBZ)可 直接用 GC法分析 。 ? Lafuente等采用硅酮鍵合相的 毛細(xì)管柱 (10m )分離水果中 TBZ殘留物 ,分別用 氮磷檢測器 (NPD)和 電子捕獲檢測器 (ECD)檢測 ,發(fā)現(xiàn) NPD檢測的靈敏度更高 ,LOD為 10181。g/kg。 ? Oishi等采用 GCNPD法檢測 TBZ,石英毛細(xì)管柱 (25m )分離 ,LOD為 10181。g/kg。 ? 大部分 苯并咪唑類藥物極性較高 ,難以氣化 ,熱穩(wěn)定性差 ,故 GC法分析需要 衍生化 。 衍生化 ? 由于苯并咪唑類分子結(jié)構(gòu)上含 氨基 和 羥基 ,可與衍生劑發(fā)生?；?、硅烷化和烷基化反應(yīng)。 ? 常用的 ?；苌?劑有三氟乙酸酐 (TFA)、七氟丁酸酐(HFB)和五氟芐基酰氯 (PFBCOCl)。 ? 硅烷化 試劑有 N,O雙三甲硅基乙酰胺 (BSA)、 N甲基 N(叔丁基二甲基硅烷基 )三氟乙酰胺 (MTBSTFA)和 N甲基(三氟乙酰胺 ) (MBTFA)。 ? 烷基化 衍生劑有碘甲烷、溴代五氟苯、五氟芐基溴(PFBBr)、二甲基乙縮醛 二甲基甲酰胺 (DMADMF)和氫氧化三甲基苯胺 (TMAH)。 ? 另外也可以將氨基甲酸酯官能團(tuán)水解后形成氨基 ,再進(jìn)行?；?、硅烷化和烷基化反應(yīng)。 ? 衍生物經(jīng) GC分離后 ,可采用 電子捕獲檢測 、 氮磷檢測 和質(zhì)譜 (MS) 檢測。 ? Jacob等用 N,O雙三甲硅基乙酰胺衍生化 GCMS法 ,測定了 TBZ殘留物的光分解產(chǎn)物 ,后來用相同的方法證實(shí)了尿中 CAM代謝物的結(jié)構(gòu)式。 ? Van den Heuvel等建立了柱上甲基化衍生、 GCMS法測定 CAM殘留物 ,進(jìn)樣前殘留物溶解于 基氫氧化銨的甲醇溶液中。 ? Tanaka等用 GCFID法測定 TBZ的甲基衍生物 ,衍生化是通過在乙腈中二甲基甲酰胺和二甲基乙縮醛反應(yīng) (120℃ 、40min),該方法可檢測出水果中 TBZ殘留量 100181。g/kg。 ? Physalo等將 BEN通過乙酸酐衍生化 (100℃ 、 30min),毛細(xì)管GCNPD測定 ,檢測限 10181。g/kg,但采用 GCECD檢測 ,靈敏度約降低 10倍。 ? Bardalaye等對 Physalo的方法作了改進(jìn) ,用來檢測水果中的TBZ殘留。 ? Markus等建立了衍生化 GCMSEI法測定組織中的 ABZNH2SO2殘留。 ? Balizs等用 PFBBr衍生化 ,毛細(xì)管 GC高分辨質(zhì)譜法 (HRMS)測定組織中的 TBZ和 ABZ殘留。 液相色譜法 ? HPLC法被廣泛應(yīng)用于動物組織中苯并咪唑類殘留的分析 ,通常采用反相柱如 C1 C8柱分離 ,也有采用正相柱如uBondapak NH2柱分離。 存在問題： ? 采用硅膠基質(zhì)的 RPHPLC法測定苯并咪唑類時 ,硅膠鍵合相表面殘余的帶負(fù)電荷硅醇基能強(qiáng)烈吸附苯并咪唑類藥物 ,導(dǎo)致 保留時間過長、峰拖尾或變形 。 ? 當(dāng)流動相在弱酸性或中性時 (pH5~7),苯并咪唑類的離子化被抑制 ,最后出峰的組分保留時間較長 ,峰展寬嚴(yán)重 。當(dāng)流動相為酸性時 (pH2~3),苯并咪唑類的離子化增強(qiáng) ,先出峰的組分容易分離 ,但后出峰的組分 拖尾嚴(yán)重 。 解決辦法： ? 為降低游離硅醇基的吸附作用和增加苯并咪唑類藥物在流動相中的溶解性 ,可采取 離子抑制 或 離子增強(qiáng) 的方法來解決。 ? 通過 調(diào)節(jié)流動相的 pH值 、加入 離子對試劑 、 掩蔽劑 、鹽 和較高比例的 有機(jī)改性劑 等 ,對流動相進(jìn)行優(yōu)化。 ? 例如 ,在酸性流動相中加入四丁基銨陽離子 ,可改善苯并咪唑類的色譜性能 ,消除峰變形 ,提高分辨率。 ? 早期 ,分離柱有采用 硅膠柱 或 陽離子交換柱 。 ? Karlaganis等用硅膠柱分離血漿中的 BNZ,以乙腈 氯仿飽和水溶液 甲酸 (75++)作流動相。 ? Alvinerie等用硅膠柱分離 TCB、 TCBSO、 TCBSO2和OFZ,在 15min內(nèi)獲得良好的分離。 ? Kirkland等用陽離子交換柱分離植物和土壤中的 BEN殘留。 ? Arenas等用強(qiáng)陽離子交換柱分離牛奶中的 TBZ和 5OHTBZ。 ? Bogan等最早采用 C18柱 分離 8種苯并咪唑類殘留 ,分析時間14min,但分離度較差。 ? Long等和 Wilson等分別建立了 多殘留 RPHPLC法 分離 8種苯并咪唑類藥物 ,分析時間為 35min,采用梯度洗脫 ,可改善分離度。 ? Rose用 C8柱 、 二元泵梯度洗脫 ,35min內(nèi)分離 OFZ和 9種代謝產(chǎn)物。 ? Roudaut等用 C18柱 ,二元泵梯度洗脫 ,分離了 10種苯并咪唑類殘留 ,除 OXI和 OFZ外 ,所有殘留物在 16min內(nèi)獲得分離。 ? Negro等采用 離子對色譜法 分離血漿和尿中 TCBSO和TCBSO2,考察了影響色譜性能的實(shí)驗(yàn)參數(shù) ,如溶液 pH、有機(jī)改性劑含量、離子對試劑 (烷基磺酸鈉 )的烷基鏈長 ,結(jié)果表明 ,最適宜的流動相為 ()乙腈 (55+45)含 。 ? De Ruyck等建立了 離子對色譜法 分離 FBZ、 TBZ、 ABZ、OXI和 LEV殘留的方法 ,采用梯度洗脫 ,辛烷磺酸鈉作為離子對試劑 ,用磷酸調(diào)節(jié)流動相 。 檢測器 ? 苯并咪唑類及其代謝物在 245nm和 295nm處有強(qiáng)的吸收 ,可用 紫外檢測 。在 295nm處摩爾吸收系數(shù)相對較低(10000),但干擾少 ,吸收峰穩(wěn)定、靈敏度足夠 ,應(yīng)用較多。 ? 對于本身有熒光的化合物 ,如阿苯達(dá)唑及其代謝物和噻苯達(dá)唑及其代謝物 ,可用 熒光檢測 ,內(nèi)源性雜質(zhì)干擾小、檢測靈敏度高。 ? 光電二極管陣列檢測 (PDA)可提供化合物的吸收光譜圖(200~700nm),與標(biāo)準(zhǔn)品譜圖進(jìn)行對照 ,可對樣品作出初步的定性判斷。 ? PDA檢測器價格低廉、應(yīng)用廣 ,但在專一性和靈敏度上欠高 ,特別在檢測動物組織中痕量的藥物殘留時有一定局限性。 ? 質(zhì)譜檢測 (MS) 特別是串聯(lián)質(zhì)譜檢測 (MS/MS) 作為通用型檢測器 ,具有高靈敏和高選擇性的優(yōu)點(diǎn) ,能提供化合物的結(jié)構(gòu)信息 ,予以定性確證 ,在殘留分析中的應(yīng)用日趨廣泛。 ? LCMS通常采用短柱 ((150mm)分離 ,色譜柱平衡時間短 ,適合樣品的高通量分析。 ? Blanchflower等采用 LCMS法測定 FBZ和 OFZ殘留 ,發(fā)現(xiàn)等度洗脫比梯度洗脫重復(fù)性好。 ? Cannavan等采用梯度洗脫來分離 TBZ和 5OHTBZ,流動相由乙腈和 。 ? Balizs建立了 15種苯并咪唑殘留測定的 LCMS/MS方法 ,采用細(xì)直徑柱 ()分離 ,流動相流速為 ~,苯并咪唑類藥物在 6min內(nèi)出峰 ,但沒有達(dá)到完全分離。 ? De Ruycke等建立了 LCMS/MS法測定蛋和肌肉組織中苯并咪唑殘留 ,包括 FLU、 FLUHMET和 FLURMET。后來 ,他們還檢測了牛奶中左旋咪唑和 7種苯并咪唑類藥物的殘留。
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