石蠟切片制備基本步驟-資料下載頁(yè)
2025-08-05 09:32本頁(yè)面
【正文】 應(yīng)。包埋用過(guò)的石蠟可以反復(fù)使用。 ②準(zhǔn)備包埋框：可以用金屬的，也可以用硬紙摺疊。 ③點(diǎn)燃酒精燈，準(zhǔn)備好無(wú)齒尖鑷子，需作標(biāo)記應(yīng)先寫好標(biāo)簽。 ④在金屬框中倒入硬蠟，然后用無(wú)齒鑷子取組織塊放入石蠟中，置好方向?？墒覝叵吕鋮s。 ⑤包埋框或紙盒內(nèi)的蠟逐漸凝結(jié)，若表面已凝結(jié)形成一層固體狀，即可放入冷水中，加速其凝固。 ⑥待蠟塊完全凝固以后，便可拆卸包埋框架， 或拆開紙盒，取出蠟塊。 （2）注意事項(xiàng) ①包埋時(shí)夾取組織的鑷子，用酒精燈隨時(shí)燒熱，以免石蠟?zāi)Y(jié)后粘附在鑷子上，造成蠟塊凝固不均勻。 ②包埋操作要迅速，組織從浸蠟杯中取出置入包埋框中的時(shí)間應(yīng)盡量縮短。 ③包埋后的蠟塊應(yīng)呈均質(zhì)半透明狀，如果出現(xiàn)白色混濁狀，一般出現(xiàn)在組織周圍或組織的底部，應(yīng)考慮這樣幾個(gè)方面的問(wèn)題：a. 脫水不徹底。，組織進(jìn)行包埋時(shí)，包埋框中的蠟已成凝結(jié)狀。 ④包埋箱中的溫度必須保持恒定。 ⑤如包埋得不好，可將蠟塊溶化，重新浸蠟和包埋。 ⑥較小的組織可在脫水透明時(shí)開始用伊紅染色 六、石蠟切片制備（一）石蠟切片前的準(zhǔn)備 1．切片刀。傳統(tǒng)的切片刀在使用之前，一定要在顯微鏡下檢查刀口的損傷程度，然后進(jìn)行磨刀?，F(xiàn)在也可以使用一次性刀片，可省去磨刀。 2．修整蠟塊：切去組織周圍過(guò)多的石蠟，一般情況下在組織周圍留有約1~2mm的石蠟邊，兩邊必須平行。 3．蠟塊固定：修整好的蠟塊先固定在事先準(zhǔn)備好的小方木塊或者金屬塊上，固定方法是把蠟鏟先在酒精燈上加熱，再將蠟塊底部烙熔，迅速烙粘在小方木塊或金屬塊底座上。 4．載玻片擦洗干凈后，在其表面涂上粘附劑（蛋白甘油、APES或多聚賴氨酸），根據(jù)染色方法選擇不同的粘附劑。 5．準(zhǔn)備好毛筆、鑷子、染色架。 6．調(diào)好展片器內(nèi)水的溫度（45℃），有時(shí)也可以加些酒精到水中。 （二）石蠟切片 1．將切片刀裝在刀片機(jī)的刀架上并固定緊，固定蠟塊底座或蠟塊，調(diào)整蠟塊與刀至合適位置，刀刃與蠟塊表面呈5度角。 2．切片多使用輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)，切片時(shí)，左手執(zhí)毛筆，右手轉(zhuǎn)切片機(jī)轉(zhuǎn)輪，先修出組織塊。 3．調(diào)整切片機(jī)上的切片厚度為4~7181。m，然后切片。 4．切片可以是單張，也可以是連續(xù)切片形成蠟帶 5．展片和撈片： （1）直接展片法：在載玻片上滴加幾滴蒸餾水，然后把切片鋪在小滴上面，用酒精燈在載玻片下面加熱，待完全展平，傾斜載玻片，倒棄多余水分，同時(shí)擺正切片。 （2）溫水漂浮法：此法用展片機(jī)或者用恒溫水浴箱，先使水溫保持在45~50℃，用左手拿毛筆輕輕托起切片，用右手用眼科鑷子夾起切片的一角，正面向上輕輕平鋪放置于展片器的水面上，動(dòng)作要輕快，切好的石蠟切片漂浮在溫水中受熱后及在表面張力的作用會(huì)自然平整地展開，必要時(shí)可用眼科鑷輕輕拔開，然后撈片，并及時(shí)編號(hào)。 6．展好的切片在室溫下稍微干燥后，放在40℃恒溫烤箱中，小片組織30分鐘即可，大的需12~24小時(shí)，烤干備用。 （三）注意事項(xiàng) 1．切片刀刃傾斜過(guò)大或過(guò)小都不能正常進(jìn)行切片。 2．修整蠟塊時(shí)要細(xì)心，看清楚組織在蠟塊中的位置，以免將需要的組織修掉。 3．連續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)切片機(jī)的轉(zhuǎn)輪時(shí)，速度一定要均勻，不能時(shí)快時(shí)慢，以免切片厚薄不一。 4．使用輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)切片時(shí)，是由下向上切，為得到定然整的切片，防止組織出現(xiàn)刀紋裂縫，應(yīng)將組織硬、脆難切的部分放在上端，如皮膚應(yīng)將表皮部分向上，腸胃等組織應(yīng)將漿膜面面朝上。 5．用展片器展片時(shí)，水溫應(yīng)根據(jù)使用的石蠟熔點(diǎn)進(jìn)行了調(diào)整，一般低于石蠟熔點(diǎn)10~15℃；撈片的時(shí)候動(dòng)作要輕、稍快。動(dòng)作太大容易出現(xiàn)氣泡。如果沒有展片器可以用溫水浴鍋來(lái)代替。 6．單個(gè)切片要擺到載玻片的1/3與2/3交界處；連續(xù)切片的粘片順序一般是從左到右，組織切片較小是，可以并列粘貼2~3條蠟帶。 7．烤片的溫度不宜過(guò)高；烤片的時(shí)間要合適。腦組織要待稍微晾干一些后，才能烤片，否則容易產(chǎn)生氣泡影響染色和觀察。 七、HE染色（一）步驟 1．脫蠟 二甲苯I 10分鐘 二甲苯II 5分鐘 2．水化 100%酒精I(xiàn) 5分鐘 100%酒精I(xiàn)I 5分鐘 95%酒精I(xiàn) 5分鐘 95%酒精I(xiàn)I 5分鐘 85%酒精 3分鐘 75%酒精 2分鐘 蒸餾水沖洗 1分鐘 3．染色 蘇木精染色 5分鐘 自來(lái)水洗 鹽酸酒精分化 15秒 自來(lái)水洗（鏡檢） 自來(lái)水洗 15分鐘 蒸餾水洗 2分鐘 75%酒精 2分鐘 85%酒精 2分鐘 %伊紅染色 1分鐘 95%酒精I(xiàn) 5分鐘 95%酒精I(xiàn)I 5分鐘 100%酒精I(xiàn) 5分鐘 100%酒精I(xiàn)I 5分鐘 二甲苯I 5分鐘 二甲苯II 5分鐘 4．封片 中性樹膠封片 上述處理好的玻片，取中性樹膠滴入載玻片的組織上，取蓋玻片從一端逐步蓋下去，避免發(fā)生氣泡 （二）注意事項(xiàng) 1．染色之前一定要了解清楚所用的染色液的配制方法，不同的染色液染色后的處理是不一樣的。 2．染色過(guò)程中所用的時(shí)間要根據(jù)染色時(shí)的室內(nèi)溫度、染液的新鮮程度及實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況等靈活掌握。在室溫高、切片、染色液又是新配制的，染色時(shí)間就要短，反之時(shí)間就長(zhǎng)。 3．伊紅有水溶的和醇溶的，如果用的是水溶的，應(yīng)該在脫水前進(jìn)行染色，如果是醇溶的，應(yīng)使用與溶解伊紅等濃度的酒精開始脫水。 4．在二甲苯脫蠟之前可以先在60℃~1小時(shí)，這樣可以使切片粘附更牢固不易脫片，也有利于脫蠟。 5．二甲苯在HE染色中有脫蠟、透明的作用。二甲苯脫蠟的好壞主要取決于切片在二甲苯內(nèi)放置的時(shí)間和脫蠟時(shí)的溫度以及二甲苯的使用次數(shù)。染好的切片必須經(jīng)過(guò)透明，有利于顯微鏡觀察，同時(shí)并為封片起到了橋梁作用。 6．用梯度酒精脫水時(shí)，在低濃度酒精中時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，到高濃度時(shí)逐步延長(zhǎng)脫水時(shí)間。以免脫水不徹底，影響二甲苯透明的效果。 7．在酸性分化液內(nèi)停留的時(shí)間不要過(guò)長(zhǎng)，分化不可過(guò)度，避免使細(xì)胞核內(nèi)該染上色的結(jié)構(gòu)脫色。不需分化處理的蘇木精染色時(shí)要注意掌握染色時(shí)間，以防止組織切片染色背景過(guò)深或細(xì)胞核、胞質(zhì)染色不足。
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