基因轉染技術及其應用簡介-資料下載頁
2025-08-05 04:28本頁面
【正文】 胞中內源性胡蘿卜素基因也受到了抑制 ， 這種基因失活形式稱之為 抑制 （ quelling, 基因壓制 ） 。 早期的三個實驗，牽?；▽嶒灪痛植诿}孢菌實驗已經(jīng)做出了有意義的結果，但都沒有繼續(xù)研究。 其中以秀麗線蟲實驗有最有意義，因為在這個實驗中給線蟲注射了正義 RNA和反義 RNA，但就是沒有注射二者結合起來的 雙連 RNA。而 RNAi理論形成的形成正是基于后者。 （二） RNAi理論形成 1. RNAi理論 2. RNAi概念 Discovery of RNAi Doublestranded RNA inject C. elegans Neg. control Uninjected Antisense RNA dsRNA sense antisense Nature 1998, 391:806811 Mex3 mRNA detection in embryos by in situ hybridization 1998年， Fire和 Mello運用 asRNA、 sRNA及dsRNA進行研究，結果非常令人吃驚，在使相應的 ， dsRNA 的抑制效能比單一的有義或反義均有效，誘導基因沉默的效率高 10倍。少量的 dsRNA處理線蟲就能呈現(xiàn)基因沉默現(xiàn)象，該抑制現(xiàn)象還可傳給第二代。 2. RNAi概念 RNAi是指一些小的雙鏈 RNA序列導入機體或細胞中，機體或細胞中與之有同源序列的基因的表達將會受到高效特異的抑制或阻斷（沉默），因為 RNAi作用發(fā)生在轉錄后水平，所以又被稱為轉錄后基因沉默 (posttranscriptional gene silencing， PTGS) 二 .參與 RAN干擾的重要分子 （一） Dicer酶 （二） RISC （三） RdRP和 mRNA （一） Dicer酶 Dicer酶是 RNase III家族中特異識別雙鏈 RNA的一員，促使 dsRNA 裂解為小片段 RNA [即短干擾 RNA (short interference RNA， siRNA)]的重要因子 （二） RISC ： RNA誘導沉默復合物（ RNAinduced silencing plex, RISC） ：在 RNAi效應階段， siRNA結合一個核酶復合物從而形成 RISC。 ： 激活的 RISC在特定的位置切割 mRNA。 （三） RdRP和 mRNA RdRP： RNA 依賴性 RNA 聚合酶 (RNA dependent RNA polymerase）， RNAi作用中的關鍵酶之一，它參與催化 dsRNA 的生成與大量擴增。 mRNA： 被降解的 mRNA 片段和未降解的完整 mRNA 均可作為引物，在 RdRP的作用下合成更多的 dsRNA，新合成的 dsRNA 進入下一輪的 RNAi循環(huán)，從而對RNAi效應起放大作用 三、 RNAi作用機制
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