有機物的分離與提純課件-資料下載頁
2025-08-04 23:41本頁面
【正文】 要進行活化 。 ? 表 46 濕法制板方法及活化條件 薄層的類別 吸附劑：水的用量 ① 活 化 ② 硅膠 G 硅膠 G 氧化鋁 G 硅藻土 G 1:2或 1:3 1:2(用%CMC溶液 ) 1:1～ 3 1:2 110～ 130℃ 1h 110℃ 30min 80℃ 30min 110℃ 30min ? 2． 點樣 ? 將試樣用適當?shù)娜軇?(— 般用乙醇 、 丙酮 、 氯仿等， 不宜用水 )溶解 ， 制成 ～ 1％ 的試液 。 ? 點樣量要根據(jù)薄層厚度 、 試樣和吸附劑性質(zhì) 、 顯色劑的靈敏度以及定量測定的方法等 ， 通過試驗來確定 。 ? 3． 展開 ? 和紙層析相似 ， 薄層層析在密閉的層析缸中 ， 用上行法 、 下行法或近水平法展開 。 ? 4． 顯色 ? 常用的顯色方法有三類 ， 在紫外光下觀察 、 以蒸氣熏蒸顯色 、 以及噴以各種顯色劑 。 ? 5． 定性分析 ? 顯色后可以根據(jù)各個斑點在薄層上的位置計算出Rf值 ， 然后與文獻記載的 Rf值比較以鑒定物質(zhì) 。但是薄層層析 Rf值的影響因素很多 ， 重現(xiàn)性較差， 文獻上查到的 Rf值只能供參考 。 ? 6． 定量分析 ? （ 1） 目視比較半定量法： ? （ 2） 洗脫法 薄層層析的定量測定 展開后，薄層分離所得斑點中化合物可進一步定量 ，其測定方法可分為兩大類： ? 一類為 洗脫測定法 ，將所需測定的斑點中的組分用適當溶劑洗脫，再選用適當方法定量； ? 另一類為 直接測定法 ，色譜分離后，直接用肉眼觀察比較或用儀器掃描斑點而測定其含量。 1 洗脫測定法 1 斑點的定位 2 斑點的洗脫 :用吸集器將斑點位置的吸附吸下，然后用洗脫溶劑洗脫。 3 測定 (1)紫外分光光度法：洗脫液調(diào)整至一定體積，在此化合物最大吸收波長處測定。同時把樣品斑點相應位置薄層吸附劑同樣取下做空白對照 (2)比色法：選擇靈敏度高、專屬性好的比色反應測定化合物含量，是比較常用的方法。 (3)其它方法：極譜、庫侖滴定、熒光測定等。 吸集器及減壓洗脫裝置 吸集器 減壓洗脫 2 直接測定法 1 目測法 樣品經(jīng)色譜分離后，直接觀察所得斑點的大小和顏 色的深淺，并與標準品在相同條件下展開所得到的一系列 已知不同濃度的標準斑點相比較，而近似地判斷樣品中所 測成分的含量。 2 測面積法 展開后色譜上的斑點面積與化合物含量間，符合一定 的線性關(guān)系。 3 儀器測定法 3 儀器測定法 用光密度計或稱薄層掃描儀（ TLC Scanner）掃描定量，該方法已成為薄層定量的主要方法。 展開后的薄層，用一定波長單色光束進行掃描，記錄其吸光度的變化，得到掃描曲線。 利用樣品掃描曲線上峰高或面積與標準品相比較，可得出樣品含量。 3 儀器測定法 化合物本身有熒光或經(jīng)過適當處理后生成熒光化合物者可測量其熒光強度而進行定量。 由熒光減弱的程度測出斑點中化合物的含量。
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