基因工程：第六章-資料下載頁
2025-08-04 14:24本頁面
【正文】 探針具有安全 、穩(wěn)定 、 使用方便等優(yōu)點(diǎn) ， 是一種正在發(fā)展很有前途的方法 。 利用免疫學(xué)方法篩選 免疫學(xué)方法專一性很強(qiáng) 、 靈敏度很高 ， 其基本原理是：以目的基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)產(chǎn)物 （ 多肽 ） 作抗原 ， 以該基因產(chǎn)物的免疫血清作抗體 ， 通過抗原抗體反應(yīng)將目的基因克隆檢出 。 免疫學(xué)方法可以分為兩種：即放射性抗體測(cè)定法和免疫沉淀測(cè)定法 。 這些方法最突出的優(yōu)點(diǎn)是 ， 它們直接檢測(cè)重組克隆所表達(dá)的蛋白產(chǎn)物 ， 能夠檢測(cè)無任何可供選擇的表型特征的重組克隆 。 當(dāng)然這種方法必須具備有效的特異性抗體 。 放射性抗體測(cè)定法 這一方法所依據(jù)的原理為： (1) 一種免疫血清含有好幾種特異性抗體（ IgG） ， 它們識(shí)別抗原分子上的不同定子 ，并分別同各自識(shí)別的抗原定子相結(jié)合； (2) 抗體分子或抗體的 F(ab)部分 ， 能夠十分牢固地吸附在固體基質(zhì) （ 如聚乙烯等塑料制品 ） 上 ，而不會(huì)被洗脫掉； (3) 通過體外碘化作用 ， IgG抗體便會(huì)迅速地被放射性同位素 125I標(biāo)記上 。 放射性抗體測(cè)定的主要程序是： (1) 首先把轉(zhuǎn)化的菌落涂布在平板上 ， 長出菌落以后 ， 再影印到另一塊平板上繼續(xù)培養(yǎng) ， 并保留原來的平板作為母板； (2) 待影印平板上的菌落長好后 ， 置于含有氯仿飽和氣體的容器中使菌落裂解 ， 陽性菌落便釋放出抗原； (3) 將吸附了未標(biāo)記 IgG抗體的聚乙烯薄膜覆蓋在平板表面 ， 如果抗原與抗體具有對(duì)應(yīng)關(guān)系 ，則在薄膜上形成抗原 抗體復(fù)合物； (4) 取下聚乙烯薄膜 ， 再用 125I 標(biāo)記的 IgG處理 ，125IIgG便會(huì)與結(jié)合在聚乙烯薄膜上的抗原決定簇結(jié)合； (5) 漂洗聚乙烯膜除去過剩的 125IIgG， 干燥后進(jìn)行放射性自顯影判斷結(jié)果 ， 并從母板上獲得相應(yīng)的重組克隆 。 對(duì)于能夠分泌表達(dá)產(chǎn)物的重組體克隆 ，可以省去影印平板 、 裂解菌落等程序 ， 操作更為簡化 。 例如分泌胰島素重組體克隆的篩選： 在放射免疫分析法基礎(chǔ)上 ， 最近又發(fā)展了一類非放射性免疫分析技術(shù) ， 例如熒光免疫分析 、 酶免疫分析以及化學(xué)發(fā)光免疫分析等 。 這些方法具有和放射免疫法相同的靈敏度和特異性 ， 而且沒有象同位素那樣的半衰期短和安全防護(hù)問題 ， 是一類很有發(fā)展前途的檢測(cè)技術(shù) 。 免疫沉淀測(cè)定法 相對(duì)于放射性免疫法 ， 該方法靈敏度要低 ，而且易受干擾 ， 但它的價(jià)值在于實(shí)驗(yàn)簡便易行 。其做法是：在生長菌落的瓊脂培養(yǎng)基中 ， 加入專門抗這種蛋白質(zhì)分子的特異性抗體 。 如果有些菌落的細(xì)菌會(huì)分泌出某種蛋白質(zhì) ， 那么在它的周圍就會(huì)出現(xiàn)一條叫做沉淀素的抗體 抗原沉淀物所形成的白色的圓圈 。
范文總結(jié)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1