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2025-08-04 10:04本頁面
【正文】 s model trace”以外我們還有幾個(gè)項(xiàng)目沒有填入數(shù)據(jù)。這些當(dāng)時(shí)未填入的數(shù)據(jù)其實(shí)是“”和“Quantity/Unit”這2項(xiàng)。剛才我們已經(jīng)學(xué)習(xí)了如何預(yù)測分子量，大家現(xiàn)在再用“BandBand Information”命令看看您感興趣的Band，是不是“”已經(jīng)被填上數(shù)字了？現(xiàn)在只剩下“Quantity/Unit”，讓我們開始學(xué)習(xí)如何測定具體的定量值（原來測定的僅僅是光密度值和Band之間的物質(zhì)的量的比，而沒有落實(shí)到具體的實(shí)際數(shù)字）。 創(chuàng)建定量標(biāo)準(zhǔn)：所謂創(chuàng)建“定量標(biāo)準(zhǔn)”其實(shí)類似于剛才我們?cè)O(shè)置的分子量Marker。只不過這里我們用已知Band的物質(zhì)的量做為Marker，就像用5ul的DL2000跑電泳，每條Band含50ng的雙鏈DNA。具體操作如下：執(zhí)行“AnalysisQuantity Standards”，在彈出的“Calibration Curve”對(duì)話框中選擇“Creat New”，在隨后的“Quantity Standards”對(duì)話框中填寫一系列相關(guān)信息。重要的信息包括： 1.“Units”：指作為marker的物質(zhì)的量的單位，例如ng，ug，mg等等。 2.“Measure”：指對(duì)于Maker和待測Band的測量方式。點(diǎn)擊“Measure”按鈕后可以選擇“Trace Density”、“Contour Density”、“Peak Density”和“Average Density”。如果您前面的分析采用的是軌跡法定量的話可以選擇“Trace Density”；如果您采用的是等高線法定量可以采用“Contour Density”。 3.“Select”：在“Select”后面有三個(gè)選項(xiàng)，Band、Match、Lane。選中其中一個(gè)選項(xiàng)比如“band”，然后將變成向上小箭頭的鼠標(biāo)指向您自己跑的Marker條帶，點(diǎn)擊左鍵，就會(huì)發(fā)現(xiàn)此時(shí)該Band已經(jīng)變成黃色。您可以多點(diǎn)選幾個(gè)作為Marker的Bands（至少3個(gè)，多多益善），然后回到“Quantity Standards”框。這時(shí)框下部的表格變成可填寫狀態(tài)，在“Quantity ug”中填入相應(yīng)的數(shù)字，每個(gè)數(shù)字對(duì)應(yīng)您剛才標(biāo)記的作marker的Bands。后面的“Dilution factor”項(xiàng)可暫時(shí)不管；其他兩項(xiàng)“Lane”和“Match”主要用來一次性填入一條泳道上所有的Bands的標(biāo)記，填寫方法類似“Band”。 現(xiàn)在我們?cè)俅问褂谩癇andBand Information”來查看我們感興趣的任何泳道上的條帶，是不是所有的信息都填滿了？包括該band的定量也直接給出了實(shí)際數(shù)字。到此我們的軌跡法定量終于告于一個(gè)段落了。 看了前面的軌跡定量法大家是不是有些頭暈了？呵呵是有些煩。不過大家如果會(huì)用Quantity One提供的“Automation manager”就可以把前面的繁瑣程序一步搞定了。不過我也不打算在這里教大家用這個(gè)工具了，因?yàn)檫@個(gè)工具個(gè)性化太強(qiáng)，不好舉例說明。大家可以在以后的學(xué)習(xí)中自己實(shí)踐?，F(xiàn)在要教大家一個(gè)簡單的定量方法等高線定量法。他的好處和壞處最前面已經(jīng)有過闡述，請(qǐng)大家斟酌使用。 等高線定量法：十分簡單快捷。首先打開您的電泳照片，不用任何泳道或者條帶識(shí)別步驟，直接執(zhí)行“VolumnVolumn Contour Tool”，將變成綠色加號(hào)的鼠標(biāo)指向您感興趣的Bands，在Bands的外圍輕輕點(diǎn)擊一下，Quantity One會(huì)為您自動(dòng)描繪出這個(gè)band的等高線輪廓范圍。 提示: 其實(shí)在Volumn工具中不止只有等高線可以使用，還有Freehand（手工繪制）、圓形、方形等工具。這些工具都可以用來圈定Band的范圍。只是我覺得等高線法在這其中是最好的工具。Quantity One有一個(gè)很明顯的缺點(diǎn)就是“Edit”工具中居然沒有“Undo”的選項(xiàng)！如果我們對(duì)圈定的等高線不滿意而又不能使用“Undo”怎么辦？可以用鼠標(biāo)指向我們想刪除的Band，然后用“Del”鍵刪除。 現(xiàn)在我們就可以直接看結(jié)果了。執(zhí)行“VolumnVolumn Analysis Report”，在彈出的“Volumn Report Options”選項(xiàng)卡中選擇你感興趣的項(xiàng)目，然后按“Done”按鈕，在隨后的報(bào)告單中就會(huì)顯示出關(guān)于你圈定的Band的相關(guān)信息了。其中“.”和“% ”最為重要，因?yàn)樗麄兪潜尘芭懦蟮腂and相對(duì)量。 提示: 在“Volumn Report Options”中大家注意一個(gè)參數(shù)“Backgroud Substruction Method”。如果您自己選擇了一塊不含Band的凝膠區(qū)域作為背景區(qū)（可以使用“VolumnVolumn Rec tool”圈定一塊不含Band的方向區(qū)域做背景。圈定后雙擊該區(qū)域，在彈出的“Volumn Properties”選項(xiàng)中選擇該區(qū)域作為“Backgroud”），這時(shí)您最好選擇“Globe”方式；如果您沒有選擇一塊區(qū)域作背景則選擇“l(fā)ocal”方式做背景去除。 提示: 如果您想像剛才軌跡法定量時(shí)直接讓等高線法的“VolumnVolumn Analysis Report”中包含直接的定量值，可以在您自己跑的Maker band上用Volumn工具標(biāo)記，然后再雙擊打開“Volumn Properties”選項(xiàng)，在“Volumn Type”中選擇“Standard”，并將數(shù)值填入下面的“Concentration”框中。這樣一來您就可以直接在“VolumnVolumn Analysis Report”得到真實(shí)的定量值了。
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