放線菌抗生素的發(fā)酵及目的產(chǎn)物的提取實驗報告-資料下載頁
2025-07-20 01:31本頁面
【正文】 1. 稱量 稱量前，將抗生素標準品和供試品從冰箱取出，使與室溫平衡，供試品應(yīng)放于干燥器內(nèi)至少30 min方可稱取。供試品與標準品應(yīng)用同一天平；吸濕性較強的抗生素在稱量前1~2小時更換天平內(nèi)干燥劑。標準品稱量不可少于20 mg，取樣后立即將稱量瓶或適宜的容器及被稱物蓋好，以免吸水稱樣量的計算W=V*C/P (式 ) 式中：W：需稱取標準品或供試品的重量（mg） V：溶解標準品或供試品制成濃溶液時用容量瓶的體積量（mL） C：標準品或供試品高劑量的濃度（U/mL，μg/mL） P：標準品的純度或供試品的估計效價（U/mg，μg/mg） 從冰箱中取出的標準品溶液，必須先在室溫放置，使其溫度達到室溫后，方可量取。標準品或供試品溶液的稀釋應(yīng)采用容量瓶，每步稀釋，取樣量不得少于2 mL，稀釋步驟一般不超過3步。每次吸取溶液用胖肚吸管或密刻度玻璃吸管，量取溶液前要用被量液流洗吸管2~3次，吸取樣品溶液后，用濾紙將外壁多余液體擦去，從起始刻度開始放溶液。稀釋標準品與供試品用的緩沖液應(yīng)同一批和同瓶，（預(yù)計不夠時，應(yīng)事先與另一瓶混勻后再用），以免因pH或濃度不同影響預(yù)定結(jié)果。稀釋時，每次加液至容量瓶近刻度前，稍放置片刻，待瓶壁的液體完全流下，再準確補加至刻度。標準品與供試品高低濃度之比為2:1或4:1，但所選用的濃度必須在劑量反應(yīng)直線范圍內(nèi)。3. 雙碟制備 在超凈工作臺上，用滅菌大口吸管（20 mL），取已融化的培養(yǎng)基20 mL注入雙碟內(nèi)，作為培養(yǎng)基的底層，等凝固后更換干燥的陶瓦蓋覆蓋，放置20~30 min，備用。取出試驗用菌懸液，按已試驗適當?shù)木浚ǜ邼舛人碌囊志χ睆?8~22 mm），用滅菌吸管吸取菌懸液加入已融化并保溫在水浴中（一般細菌48~50℃，芽孢可至60℃）的培養(yǎng)基內(nèi)，搖勻作為菌層用。用滅菌大口5mL吸管，吸取菌層培養(yǎng)基5 mL，使均勻攤布在底層培養(yǎng)基上，置水平臺上待凝固，用陶瓦蓋覆蓋，放置20~30 min，備用。4. 放置鋼管 用鋼管放置器，或其他方法將鋼管一致、平穩(wěn)地放入培養(yǎng)基上，鋼管放妥后，應(yīng)使雙碟靜置5~10 min，使鋼管在瓊脂內(nèi)稍下沉穩(wěn)定后，再開始滴加抗生素溶液。5. 滴加抗生素溶液 每批供試品取5~10個雙碟，滴加溶液用毛細滴管或定量加樣器，在滴加之前須用滴加液洗2~3次。在雙碟的4個鋼管中以對角線滴加標準品與供試品溶液的高、低二種濃度的溶液，滴加順序為SH→TH→SL→TL，也可用SL→TL→TH→SH。（S代表標準品，T代表供試品，H代表高濃度，L代表低濃度），滴加溶液至鋼管口平滿，注意滴加溶液間隔不可過長，因溶液的擴散時間不同影響測定結(jié)果。滴加完畢，用陶瓦蓋覆蓋雙碟，平穩(wěn)置于雙碟托盤內(nèi)，雙碟疊放不可超過3個，避免受熱不均，影響抑菌圈大小，以水平位置平穩(wěn)移入35~37℃恒溫培養(yǎng)室，培養(yǎng)至所需時間。6. 抑菌圈測量 用直尺或游標卡尺測量抑菌圈的直徑，以毫米為單位。五、結(jié)果與計算根據(jù)實驗測量的抑菌圈大小，計算抗生素供試品的效價單位。
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