【正文】 如何注意保養(yǎng)？ 切片機(jī)座應(yīng)注意平穩(wěn)，切片時(shí)應(yīng)注意搖轉(zhuǎn)速度的快慢要盡量保持均勻一致?；瑒?dòng)面要經(jīng)常滴上機(jī)油，以利于滑動(dòng)及旋轉(zhuǎn)自如和防銹，切片完后除去殘蠟，取下切片刀，先用濕布擦去余蠟，繼用干布擦干，再用油布擦一遍，最后用罩蓋好切片機(jī)，以防灰塵落于機(jī)上，影響機(jī)器的運(yùn)轉(zhuǎn)。化學(xué)試劑使用時(shí)的注意事項(xiàng)（1）已打開(kāi)的藥品或染色時(shí)的玻璃瓶染色液，每次用后即隨手蓋緊，以免揮發(fā)，易揮發(fā)易吸潮的藥品用后蠟封。（2）易燃的試劑要遠(yuǎn)離火種，謹(jǐn)防火災(zāi)，因病理科有較多的易燃化學(xué)試劑。（3）強(qiáng)酸，強(qiáng)堿試劑或有腐蝕性的廢染液，不要直接倒入下水道，以免腐蝕下水道，造成不必要的損失。（4）易變質(zhì)或易氧化失效的試劑，應(yīng)標(biāo)明配制日期，妥為保存，有的只能一次性用完，因此,應(yīng)本著節(jié)約的原則，用多少，配多少，切勿造成浪費(fèi)。石蠟切片刀應(yīng)怎樣保養(yǎng)好？ 切片刀要經(jīng)常磨，保持鋒利無(wú)刀口，每次用完后用布擦干凈，再用油布擦，以防刀口生銹影響切片。如何使樹(shù)膠處于中性狀態(tài)？ 取少量無(wú)水碳酸鈉，加入到封固用的樹(shù)膠中攪拌后放置數(shù)日取其上清液，即為中性樹(shù)膠。切片染完蘇木素后的分化，應(yīng)該如何控制和注意什么問(wèn)題？（1）分化液中鹽酸不能高于1%，否則會(huì)因分化過(guò)強(qiáng)而將已著色的顏色大部分脫水，造成染色過(guò)淺。（2）對(duì)各種組織應(yīng)視情況而定，如淋巴結(jié)的切片，應(yīng)分化較長(zhǎng)時(shí)間等。（3）分化完后，應(yīng)在顯微鏡下觀察，如發(fā)現(xiàn)核中的物質(zhì)不清楚，則應(yīng)繼續(xù)分化至清晰為止。（4）要認(rèn)真操作，細(xì)心觀察，不斷總結(jié)。切片欠佳表現(xiàn)在哪些方面？切片欠佳的主要表現(xiàn)有：切片見(jiàn)有刀痕皺折、橫裂、折疊、不全、破碎、組織松散。厚薄不勻或呈波浪狀等現(xiàn)象。二 封固? 蓋玻片下封固 結(jié)果：胞核呈藍(lán)色，胞漿呈紅色，紅細(xì)胞呈桔紅色，其它成分呈深淺不同紅色 ? 國(guó)產(chǎn)中性樹(shù)膠 封片,注意樹(shù)膠量適中,掌握封片手法, 防止氣泡.二 封固注意事項(xiàng)：? ，以恰能滴下成珠為宜，用前攪拌均勻。? 。? ，切片上剩余二甲苯不要過(guò)多也不要過(guò)干，如遇少量氣泡可用鑷子輕壓蓋片，切勿放烤箱內(nèi)，如氣泡不易壓出需將切片置二甲苯后重新封固。第七章 特殊染色 HE染色雖是一種快速、經(jīng)濟(jì)、且易掌握的方法，但它不能回答病因?qū)W、Z組織發(fā)生及發(fā)病機(jī)制等方面的許多問(wèn)題。而特殊染色可以協(xié)助解決病理診斷問(wèn)題。 特殊染色法是為了達(dá)到某些特殊的要求，或是為了觀察特殊的組織結(jié)構(gòu)。一、脂肪染色 主要用于心、肝、腎的脂肪變性，動(dòng)脈粥樣硬化，以及因脂肪栓塞導(dǎo)致的死亡病例鑒定等。試劑配制：蘇丹染液，70%乙醇250ml，丙酮250ml染色方法：；，把標(biāo)本放入蘇丹III染液中浸泡30min；％乙醇分化，以脂肪組織呈橙黃色，其它組織不著色為佳；％甲醛液中，為了防腐可加入適量的防腐劑。 二 彈力纖維染色法? 病理診斷應(yīng)用彈力纖維染色，目的是觀察組織內(nèi)彈力纖維是否增生或破壞、斷裂和崩解，從而幫助診斷。? 試劑配制：? 地衣紅酒精液 1g? 70%酒精 100ml? 濃鹽酸 1ml? 結(jié)果：TanerUnna法，彈力纖維呈深棕紅色。? Verhoeff鐵蘇木素染色法，彈力纖維呈黑色。Verhoeff鐵蘇木素染色法三、六胺銀（PASM〕染色? 在腎臟活體組織檢查和一些真菌感染的組織選用此方法PASM染液的配方：? 2％硝酸銀水溶液3ml；? 3％六次甲基四胺液25ml；? 5％硼砂2ml。? 注：2％硝酸銀配制胺溶液，染色時(shí)間40分鐘，溫度? 55~60℃，隨時(shí)鏡下觀察便于控制。PASM染色法：? （1〕1％過(guò)碘酸水溶液內(nèi)染10分鐘；? （2〕自來(lái)水沖洗，蒸餾水沖洗；? （3〕入5％鉻酸水溶液40分鐘，出此溶液后用1％亞硫酸鈉除掉鉻酸；? （4〕自來(lái)水洗數(shù)次，蒸餾水洗3－4次；? （5〕入六胺銀染液（50－60℃〕40分鐘，20分鐘后，每5分鐘鏡下觀察一次，蒸餾水洗四次；? （6〕%氯化金水溶液1－2分鐘，蒸餾水洗三次；? （7〕入5％硫代硫酸鈉水溶液1－2分鐘，蒸餾水洗數(shù)次；? （8〕復(fù)染HE，脫水、透明、封片? 結(jié)果：底膜呈黑色，網(wǎng)狀纖維呈黑色，細(xì)胞核呈藍(lán)色，背景呈粉紅色四、淀粉樣物質(zhì)染色（介紹剛果紅染色）? . 淀粉樣物質(zhì)是一種嗜伊紅性物質(zhì)，性質(zhì)屬于糖蛋白成分。組織出現(xiàn)此物質(zhì)稱(chēng)為淀粉樣變性。? 1〕試劑配制：? （1〕剛果紅染色液。剛果紅1g，蒸餾水100ml；? （2〕Harris蘇木素染色液。淀粉樣物質(zhì)染色（介紹剛果紅染色）? 2〕染色步驟：? （1〕蘇木素染色液浸染2分鐘；? （2〕%鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘；? （3〕流水洗，蒸餾水洗2次；? （4〕剛果紅染色液中25分鐘；? （5〕無(wú)水乙醇迅速脫水2次；? （6〕二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。? 結(jié)果：淀粉樣物質(zhì)呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)色。第八章 細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)? 細(xì)胞學(xué)檢查是腫瘤病理診斷和普查較常用方法。? 特點(diǎn)：簡(jiǎn)便、快速、無(wú)創(chuàng)傷，可反復(fù)多次檢查。? 對(duì)于腫瘤，只做初步診斷，確診依據(jù)活體組織學(xué)檢查。常規(guī)細(xì)胞病理學(xué)技術(shù) 一、取材、涂片制備 痰涂片、胸水、腹水及尿液制片 二、固定 三、染色 (巴氏染色) 常用固定液（1）等量95%乙醇和乙醚混合液（2）氯仿酒精固定液（3）95%酒精固定液（4）福爾馬林固定液 細(xì)胞學(xué)研究，固定液選擇要根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求條件而定，如用細(xì)胞涂片作原位PCR，固定液要選用多聚甲醛。 巴氏染色步驟1．標(biāo)本95％酒精固定35分鐘2．Harris蘇木素液510分鐘3．水（蒸餾水或自來(lái)水）漂洗23次4．1％鹽酸水溶液（或1％鹽酸酒精液） 浸13次5．自來(lái)水浸洗12次6．自來(lái)水或稀碳酸鋰（100ml蒸餾水中加碳酸鋰飽 和液1滴），涂片返藍(lán)為止 7．依次置入70％→80％→95％酒精， 各2分鐘 8．桔黃G6液，1分鐘 9．95％酒精Ⅰ、Ⅱ缸，各1分鐘10．EA36液，5分鐘11．95％酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 各1分鐘12．無(wú)水酒精Ⅰ、Ⅱ，各1分鐘13．二甲苯Ⅰ、Ⅱ，各2分鐘14．中性樹(shù)膠蓋片封固涂片制備? 注意要點(diǎn)：；，不易太厚或太??；。? 適宜的涂片是涂片的細(xì)胞占玻片的2/3，在鏡下每個(gè)視野內(nèi)都布滿細(xì)胞，間隙很小。涂片固定? : 即趁標(biāo)本新鮮而濕潤(rùn)時(shí)即投入固定液內(nèi)，這種標(biāo)本染色后，染色鮮艷，結(jié)構(gòu)清楚。 常用于痰液涂片、陰道涂片、宮頸涂片、穿刺涂片、食管拉網(wǎng)術(shù)涂片等。? ： 即等待涂片自然或吹風(fēng)機(jī)吹干后在固定。? 固定液：95%酒精? 固定時(shí)間：1020分鐘? 染色方法：常規(guī)HE染色第九章 大體標(biāo)本制作有關(guān)知識(shí)? 通過(guò)尸體解剖和活體組織（包括外科手術(shù)切除標(biāo)本和活體組織穿刺標(biāo)本〕檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)并收集。? ： 越新鮮越好? 1〕固定的目的： 將受檢組織盡快地侵入固定液內(nèi)，使組織和細(xì)胞的固有成分迅速凝固，防治自溶和腐敗，使其保持與生活狀態(tài)有相似的結(jié)構(gòu)，以利于切片和觀察。? 2〕固定液的選擇：（Fomaldehyde〕，又稱(chēng)福爾馬林，其濃度在4％，它是一種還原劑，極易揮發(fā)，散發(fā)出強(qiáng)烈的刺激性氣體，使人流鼻涕、流眼淚，呼吸道有異物感。％酒精（乙醇〕，除具有固定組織的作用外，尚有脫水作用? 固定要求：；；? 一般用10%甲醛溶液固定，不易用有色的混合固定液。 2. 動(dòng)物標(biāo)本取材: ①動(dòng)物致死法 麻醉法,空氣栓塞法,斷頭法,擊頭法,股動(dòng)脈放血法等,要求動(dòng)作迅速,及時(shí)解剖,取材與固定 ②動(dòng)物取材注意事項(xiàng): 準(zhǔn)備好鋒利的刀剪,固定液,取材應(yīng)新鮮,最好是心臟還在跳動(dòng)時(shí)取材,(應(yīng)將組織上的血液,滲物,粘液糞便等用生理鹽水沖洗干凈,選好組織塊的切面,切除不需要的部分,再固定),應(yīng)盡可能維持組織原形,對(duì)神經(jīng)肌肉皮膚組織,可將其兩端固定在木板或硬紙板上,然后再固定. 用化學(xué)反應(yīng)原理，在切片上滴加某種化學(xué)試劑，使之與組織或細(xì)胞中的生物化學(xué)物質(zhì)結(jié)合，再用顯色劑使之顯色，達(dá)到定位、定性地顯示組織或細(xì)胞中的某種物質(zhì)成分，這種技術(shù)稱(chēng)為組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。其結(jié)果可用顯微鏡和電鏡觀察。結(jié)合定量病理學(xué)技術(shù)，還可對(duì)有關(guān)成分定量。 ? 糖類(lèi)? 脂類(lèi) ? 核酸 ? 酶類(lèi)? 膠原纖維? 彈力纖維? 神經(jīng)纖維? 細(xì)胞膜、核膜結(jié)構(gòu)概念：免疫組織化學(xué)技術(shù)是指利用已知的抗 體與組織中相應(yīng)的抗原結(jié)合，并利用 顯色劑在原位將抗原物質(zhì)顯示出來(lái)原理：抗原＋抗體＋顯色劑特點(diǎn)：在組織中原位顯示某種特異性抗原常用顯色劑種類(lèi)：酶、金屬粒子、同位素 生物素、化學(xué)顯色劑（DAB）結(jié)果觀察：顯微鏡、透射電鏡 抗 原 ← 組織中 + 抗 體 ← 試劑 ↓ 抗原抗體復(fù)合物 + 第二抗體 ← 標(biāo)記有顯色底物 ↓ 顯色反應(yīng) ← 顯色劑 (DAB)