【正文】 3cm即可采得心血。 (5)鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采血方法有耳靜脈、斷尾和心臟采血法。斷尾采血是在動(dòng)物尾尖部消毒后，剪去尾尖拭去前面數(shù)滴血液，取血供檢查。 3．血液樣本的抗凝及常用的抗凝劑 抗凝是應(yīng)用物理或化學(xué)的方法，除去或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固。能阻止血液凝固的化學(xué)試 o ∞ ji鬻懿。項(xiàng)目二崗位技能!戇；囊i *■￥ }，xH器量?需釜釜耄薔羞袈萎篡嚳?雷釜釜薹銎囂妻薹[虱。安2麗8英1，詈囂曩慧產(chǎn)恰當(dāng)，用量過(guò)少血液仍會(huì)凝固，用量過(guò)多會(huì)導(dǎo)致滲 f寄而奠．獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)診斷，2000)透壓升高，影響血液細(xì)胞的形態(tài)和成分測(cè)定。血液檢查需要用血漿或全血的項(xiàng)目，采血要用抗凝管或在采血器皿中加入抗凝劑。抗凝劑種類(lèi)很多，臨床檢驗(yàn)常用的抗凝劑如下。 (1)乙二胺四乙酸鹽：乙二胺四乙酸鹽是一種鈣配位劑，能與血液內(nèi)鈣離子結(jié)合形成配位化合物，從而阻止血液凝固。本品對(duì)血細(xì)胞和血小板形態(tài)影響很小，適用于一般血液學(xué)檢查，特別是血小板計(jì)數(shù)。通常配成159／I。水溶液，分裝經(jīng)100℃烘干使用，其有效抗凝濃度為1～2mg／m1血液。二鉀鹽比二鈉鹽溶解度大，與血液混合后溶解更快，故更為優(yōu)越。在血細(xì)胞分析儀用二鉀鹽作抗凝劑。 (2)雙草酸鹽：雙草酸鹽抗凝劑是以草酸鉀與草酸銨按一定比例(4：6)混合而成。本品可與血液中的鈣離子結(jié)合生成不溶性草酸鈣沉淀，從而阻止血液凝固。其優(yōu)點(diǎn)是草酸鉀可使紅細(xì)胞縮小，而草酸銨可使紅細(xì)胞脹大，二者混合后，對(duì)紅細(xì)胞形態(tài)和體積影響較小，故適用于紅細(xì)胞壓積測(cè)定等；其缺點(diǎn)是草酸鹽可影響白細(xì)胞形態(tài)，并可引起血小板聚集，故不適用于白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)和血小板計(jì)數(shù)。100ml抗凝劑中含草酸鉀08草酸銨129，取此液0．5ml，分裝于小瓶中，在80。C以下溫度烘干，可使2～5ml血液不凝固。 (3)枸櫞酸三鈉：枸櫞酸三鈉可與血中游離鈣離子松散地結(jié)合為枸櫞酸鈣復(fù)合物。常用于血沉、凝血因子和血小板功能檢查。因其毒性小，故又可作為血液保養(yǎng)液。但不適用于血液化學(xué)檢驗(yàn)。配成329／L的水溶液，此液0．5ml可使5ml血液不凝固。由于此抗凝劑溶解緩慢。故只能配成溶液，不能用粉劑。 (4)肝素：肝素是一種硫酸基團(tuán)的黏多糖，相對(duì)分子質(zhì)量15 000。肝素通過(guò)與抗凝血酶Ⅲ結(jié)合，增強(qiáng)抗凝血酶的作用，滅活絲氨酸蛋白酶，從而具有阻止凝血酶形成，對(duì)抗凝血酶和阻止血小板聚集等多種抗凝作用。其優(yōu)點(diǎn)是抗凝作用強(qiáng)，不影響血細(xì)胞的體積，不致溶血等，可用于多種血液生物化學(xué)分析和紅細(xì)胞壓積測(cè)定。肝素不適用于白細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)，也不適用于血涂片檢查。肝素粉劑配成lg／L水溶液，取05ml置小瓶?jī)?nèi)，于37～50℃烘干后貯于冰箱內(nèi)保存，能使5ml血液不凝固。肝素抗凝劑應(yīng)及時(shí)使用，放置過(guò)久易失效。 (二)紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 1．稀釋血液可選用紅細(xì)胞稀釋管或者試管稀釋法。蘸：≥…包 紅細(xì)胞稀釋管稀釋法：用紅細(xì)胞稀釋管吸取血液至刻度0．5處，用棉花拭去管尖外部的血液，再吸稀釋液至刻度101處，用食、拇指堵住吸管上下端，搖蕩數(shù)次，血液被稀釋200倍。 試管稀釋法：在試管中加稀釋液3．98ml(4ml亦可)，用沙利氏吸管吸取血液20ram3，拭去管壁外血液，吹入稀釋液中，并清洗內(nèi)壁數(shù)次，搖勻?；蛘哂冒肓?，稀釋液2ml，血液]Omm。 2．向計(jì)數(shù)室充液先將計(jì)數(shù)板和血蓋板擦拭干凈并將血蓋片蓋上，棄去稀釋管前面的數(shù)滴液體，將管尖前掛的液滴放于計(jì)數(shù)室與蓋玻片接觸處，液體即可自然流人計(jì)數(shù)室內(nèi)，充液不應(yīng)太多而溢人溝內(nèi)或滴到血蓋片之上，也不應(yīng)太少以防止產(chǎn)生氣泡(圖2—82)。 圖2—82計(jì)數(shù)室充液與血細(xì)胞計(jì)數(shù)順序 (朱金鳳、王懷友，獸醫(yī)臨床診療技術(shù)，2007) 3．顯微鏡計(jì)數(shù)靜置2～3min后，計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)四角與最正中的五個(gè)中方格計(jì)80個(gè)小方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)(圖2—83)。對(duì)壓線(xiàn)細(xì)胞采取“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的法則。 圖2—83血細(xì)胞計(jì)數(shù) 血細(xì)胞計(jì)數(shù)器柵格線(xiàn)，用于紅細(xì)胞和白細(xì)胞計(jì)數(shù)。 最暗區(qū)(中間5個(gè)中方格)一高倍鏡下計(jì)數(shù)紅細(xì)胞的區(qū)域； 白區(qū)(四角4個(gè)大方格)一低倍鏡下計(jì)數(shù)白細(xì)胞的區(qū)域 (朱金鳳、王懷友，獸醫(yī)臨床診療技術(shù)，2007) 4．計(jì)算 每立方毫米血液內(nèi)紅細(xì)胞總數(shù)=X247。8040010200=XX 104(q／mm3)，《《麓60 。；“轔。l瓣豫NN崗位技能荔》爹 式中，X為計(jì)數(shù)為5 4oe方格(80個(gè)小方格)內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)；400為一個(gè)大方格，即1mm3有400個(gè)小方格；200為血液稀釋倍數(shù)；10表示計(jì)數(shù)室厚度0．1ram，乘10等于1ram。 或， 每升血液內(nèi)紅細(xì)胞總數(shù)=X．39。lOOXl012(個(gè)／L) 5．參考值見(jiàn)表2—8。表2—8健康動(dòng)物紅細(xì)胞數(shù) 動(dòng)物 RBC(1012個(gè)／L) 動(dòng)物 RBC(1012個(gè)／L) 動(dòng)物 RBC(1012個(gè)／L) 馬 177。 騾 177。 驢 黃牛 乳牛 水牛 177。 牦牛 山羊 奶山羊 + 豬 177。 犬 + 兔 雞 177。 火雞 177。 鴨 177。 鵝 鴿 177。 鵪鶉 177。 猴 6．臨床意義 紅細(xì)胞數(shù)增多：見(jiàn)于各種原因所致的脫水，如劇烈嘔吐、腹瀉、大出汗，急性胃腸炎、腸便秘、腸變位，牛的瓣胃或真胃阻塞、滲出性胸膜炎、Et射病與熱射病、某些傳染病及發(fā)熱性疾病等。肺慢性疾病、充血性心衰等引起缺氧也會(huì)引起單位體積血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)增多。 紅細(xì)胞數(shù)減少：見(jiàn)于各種原因引起的貧血(如牛血紅蛋白尿病、馬傳染性貧血、仔豬貧血)、營(yíng)養(yǎng)代謝病、血孢子蟲(chóng)病、白血病及惡性腫瘤等。 (三)白細(xì)胞計(jì)數(shù) 1．稀釋血液試管中加入白細(xì)胞稀釋液0．38ml，用沙利氏吸管吸取血液20mm3，拭去管壁外血液，吹入稀釋液中，并清洗內(nèi)壁數(shù)次，輕輕搖勻。 2．向計(jì)數(shù)室充液先將計(jì)數(shù)板和血蓋板擦拭干凈并將血蓋片蓋上，棄去稀釋管前面的數(shù)滴液體，將管尖前掛的液滴放于計(jì)數(shù)室與蓋玻片接觸處，液體即可自然流入計(jì)數(shù)室內(nèi)，充液不應(yīng)太多而溢人溝內(nèi)或滴到血蓋片之上，也不應(yīng)太少或產(chǎn)生氣泡。 3．顯微鏡計(jì)數(shù) 靜置2 3min后，計(jì)數(shù)四角四個(gè)大方格內(nèi)的全部白細(xì)胞，依次數(shù)完(圖2—83)。對(duì)壓線(xiàn)細(xì)胞采取“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的法則。 4．計(jì)算 lmm3中的白細(xì)胞個(gè)數(shù)一X247。(420X 10) 式中，X為四角四個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)；20為稀釋倍數(shù)；10表示計(jì)數(shù)室厚度0．1mm，乘10等于1ram。 5．參考值見(jiàn)表2—9。61瀚》蘸：…包 表2—9健康動(dòng)物白細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)參考值動(dòng)物 WBC(109個(gè)／L)嗜堿性粒細(xì)胞(％)嗜酸性粒細(xì)胞(％) 嗜中性粒細(xì)胞(％)桿狀核細(xì)胞 分葉核細(xì)胞淋巴細(xì)胞 (％)單核細(xì)胞 (％) 馬9．5(5．40～13．5)0．3 4．7 3．13 45．75 44．08 1．99騾8．70(4．60～12．0)0．5 5．0 5．2 46．0 42．0 1．1驢黃牛乳牛水牛牦牛瘤牛10．51177。325 0．17土0．53 5．37+_3．37 1．77177。1．61 36．65177。7．29 53．90t7．23 0．740．77 8435=2．08 0．14_+o．02 3．10+1．64 4．10177。1．18 32．86+6．28 58．03+6．29 1．7710．73 9．41177。2．13 o．12+0．83 7．80=L4．72 9．52+4．62 19．64177。7．95 59．24土10．37 2．96177。1．89 8．04_+O．30 O～1 6．5～29．9 0．3～8．4 12～38 36．7～78．5 o．3～5．4 9．86177。1．04 0．48+0．51 5．67i0．89 3．45+O．75 28．52177。2．92 57．15土3．39 4．73+O．7210．62+1．12 0．42_+0．60 8．08士1．40 1．6140．73 23．22177。3．36 62．92：t3．98 3．75+_0．77雙峰駝 16．90_+3．50 0．04 4．40 4．60 59．56 28．00 3．40山羊 12．47177。O．90 0．59+O．50 4．665=O．60 3．47+_0．57 31．84士2．55 55．19土2．84 4．25177。0．67乳山羊 13．20_+1．88 0．40_+O．10 4．00_+0．55 4．20+1．02 35．40_+3．64 53．20zt2．32 2．60+O．30 8．00177。1．7014．02177。0．9310．93177。1．2911．35177。0．830．20(O～1) 2．90(O～8) 3．10(O～7)23．8(18～45)68．1(40～75)1．90(O～5)0．23土0．43 3．03士1．08 3．74+O．77 31．42_+2．73 58．45士2．67 2．58土O．850．28j0．46 5．16177。1．32 6．25士2．06 55．59_+3．38 29．41L：4．72 3．31士O．69 0．37士0．49 3．77+_0．82 4．06+0．94 55．10+_4．18 32．80+_4．53 3．90177。O．80 兔 9．48士1．12 0．52_+0．57 1．70+_O．88 3．03_+O．64 30．3643．16 61．09+_3．80 3．30177。O．81 (四)白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù) 1．涂血片 取一清潔、干燥、脫脂的玻片作為載片；另以一較厚蓋片或一端邊緣光滑的載片為推片。用一手拇指和中指挾持載片，另一手持推片。 取供檢血一小滴(可用推片角蘸取)，放于載片的一端；將推片傾斜30?！?0。，使其一端與載片接觸，并放于血滴之前；向后拉動(dòng)推片，使之與血液接觸，待血液擴(kuò)散開(kāi)后，以勻速輕輕向前推動(dòng)推片至載片另一端，即形成一血膜；自然干燥(圖2—84)。良好的血片，應(yīng)薄而均勻，對(duì)光觀察呈霓紅色。血膜兩端應(yīng)留有空隙，以便注明動(dòng)物類(lèi)別、編號(hào)及Lt期。 2．血片染色 取干燥血涂片，在血膜兩端用蠟筆各劃一道線(xiàn)，以防染液外溢。置血涂片于染色支架上。 方法一：瑞氏染色法。餐糕62手持玻片推制血膜 推片≮蚤—弩‘用推片壓血滴推片角度《警℃二譬 ／ ／推完血片吸附血液成一線(xiàn)圖2—84血涂片的制作方法(鄧俊良，獸醫(yī)臨床實(shí)踐技術(shù)，2007)撣豬犬貓．ZH項(xiàng)目二崗位技譽(yù)罄 在血涂片上滴加瑞氏染色液，使染色液完全覆蓋血涂片，染色1～2min后，加等量磷酸鹽緩沖液，混勻后再染色3～5min。用蒸餾水沖去染液，晾干或用吸水紙吸干。 方法二：姬姆薩染色法。 在血涂片上滴加甲醇固定血涂片3～5min，滴加姬姆薩染色液，使染色液完全覆蓋血涂片，染色15～30min。用蒸餾水沖去染液，晾干或用吸水紙吸干。 方法三：瑞一姬姆薩染色法。 在血涂片上滴加瑞氏染色液，使染色液完全覆蓋血涂片，染色0．5min后水洗；滴加姬姆薩染色液，使染色液完全覆蓋血涂片，染色10min(或直接將血涂片置于染色缸中染色)。用水沖去染液，晾干或用吸水紙吸干。 3．鏡檢、分類(lèi)計(jì)數(shù)一般先用低倍鏡做大體觀察，再換用油鏡。視野下細(xì)胞不重疊或重疊不明顯，結(jié)構(gòu)清楚。可采取四區(qū)法、三區(qū)法或中央一區(qū)法，有秩序地移動(dòng)血片，計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，得出各類(lèi)白細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)(圖2—85)。 識(shí)別各類(lèi)白細(xì)胞時(shí)，應(yīng)注意細(xì)胞的大小、形態(tài)；胞漿中染色顆粒的有無(wú)，染色及形態(tài)特征；核的染色、形態(tài)等特點(diǎn)。 嗜中性粒細(xì)胞中等大小，呈圓形或橢圓形，胞漿中有嗜中性的呈淡玫瑰紅的細(xì)小顆粒；根據(jù)其細(xì)胞核的形態(tài)特征而分為髓細(xì)胞、幼稚型細(xì)胞、桿狀形細(xì)胞和分葉核細(xì)胞。髓細(xì)胞核色淡，著色不勻，呈豆形；幼稚型細(xì)胞核色淡，呈腎形；桿狀形細(xì)胞核致密、色深；分葉核細(xì)胞核深紫色。四區(qū)法三區(qū)法一區(qū)法 圖2—85血涂片計(jì)數(shù)方法(鄧俊良，獸醫(yī)臨床實(shí)踐技術(shù)，2007) 嗜酸性粒細(xì)胞較大，呈圓形或橢圓形，胞漿中有較大的呈鮮紅色的染色顆粒。 嗜堿性粒細(xì)胞較大，呈圓形或橢圓形，胞漿中有呈深紫色的染色顆粒。 淋巴細(xì)胞大，呈圓形而胞漿較多者為大淋巴細(xì)胞，小而胞漿少者為小淋巴細(xì)胞，位于兩者之問(wèn)的為中淋巴細(xì)胞；淋巴細(xì)胞核呈深藍(lán)紫色，常偏位，胞漿呈淡天藍(lán)色，于核的周?chē)械救Α? 單核細(xì)胞極大，呈多邊、多角形，胞漿呈煙灰色，較暗，核呈紫褐色，近似橢圓。 馬、牛、豬血涂片模式圖見(jiàn)圖2—86