【正文】 還原糖的酶量，為1個酶活單位，以u/g(u/ml)表示?！?試劑和溶液　　除非另有規(guī)定，試驗中所用試劑均為分析純，所用水為蒸餾水或去離子水。　 羧甲基纖維素鈉（CMC－Na）中國醫(yī)藥公司上?；瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)，分析純，在25℃,2%水溶液粘度300～800厘泊爾?！?磷酸氫二鈉檸檬酸緩沖液: 甲液：稱取磷酸氫二鈉（ ） g, 用蒸餾水溶解，并定容至1000ml。 乙液：稱取檸檬酸（） g，用蒸餾水溶解，并定容至1000ml。. 使用溶液：取甲液414ml，加乙液586ml混合均勻，用pH計校正至pH為（ 177。）,備用?！?1%羧甲基纖維素鈉（CMC－Na）溶液稱取1g羧甲基纖維素鈉，精確至1mg， 的磷酸氫二鈉檸檬酸緩沖液80ml，水浴加熱至全部溶解。冷卻后用2M　HCL或NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH到（ 177。），攪拌均勻，定容至100ml，再用二層紗布過濾。此溶液在4oC冰箱貯存，有效期為3天?！?3,5－二硝基水楊酸（DNS）試劑: 取酒石酸鉀鈉182g，溶于500ml蒸餾水中，加熱。于熱溶液中依次加入3,， 氫氧化鈉 10g，苯酚5g，無水亞硫酸鈉5g，攪拌至溶，冷卻后用蒸餾水定容至1000ml，混勻，過濾，貯于棕色試劑瓶中，于暗處放置1周后使用?！?:注：在黑色或棕色瓶中于室溫下貯存，該試劑最多穩(wěn)定6個月?！?1%(W/V)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液稱取預(yù)先于（103177。2）℃ g，用蒸餾水溶解后定容至100 ml，即為1%濃度的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)使用溶液分別吸取1%、　、加蒸餾水至刻度，搖勻，制成每ml分別含葡萄糖200μg、400μg、600μg、800μg、1000μg 、1200 μg的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液?！?儀器和設(shè)備 　除普通實驗室儀器外，還應(yīng)有：　 恒溫水浴鍋(40177。) oC。 分光光度計　 酸度計　精度177。 ?！?分析天平　?！?秒表或定時鐘。　 測定步驟　 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作，分別吸取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖使用溶液、緩沖液和DNS試劑于各管中（每管號平平行3個樣），混勻。將標(biāo)準(zhǔn)管同時置于沸水浴中，反應(yīng)7min，取出，迅速冷卻至室溫，準(zhǔn)確加入蒸餾水10ml，混勻。用10mm比色杯，以空白管（對照液）調(diào)儀器零點，在分光光度計波長550nm處測吸光度。以葡萄糖量為橫座標(biāo)，以吸光度為縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得線性回歸方程。線性回歸系數(shù)（r）（否則須重做）。對每個新配制的DNS溶液制作新的標(biāo)準(zhǔn)曲線?！∑咸烟菢?biāo)準(zhǔn)曲線管　　號標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖使用溶液磷酸氫二鈉檸檬酸緩沖液(ml)DNS試劑吸取量(ml)濃度（μg/ml）吸取量（ml）00120024003600480051000 61200　 樣品的測定　 待測酶液的制備固體酶：根據(jù)樣品酶活大小，稱取2g－10g固體酶樣，加入40－200ml蒸餾水，溶解后置40oC水浴浸提30min，用濾紙過濾，再根據(jù)樣品酶活性大小，二次稀釋至適宜濃度（，下同）。液體酶：精確量取液體酶若干ml，根據(jù)樣品酶活力大小，直接用蒸餾水稀釋至適宜濃度，待測?！?操作程序――取三支18180mm試管（一支空白管。二支樣品管）。―― 。――將三支試管放入（40177。）oC水浴中預(yù)熱5min，同時將測定底物（1%羧甲基纖維素鈉溶液）置同一溫度水浴中預(yù)熱5min。――　1%羧甲基纖維素鈉溶液，向空白管中加入3mlDNS試劑，準(zhǔn)確計時，反應(yīng)10min，取出。――迅速、準(zhǔn)確向二支樣品管中加入3ml DNS試劑，　1%羧甲基纖維素鈉溶液，搖勻。將三支試管同時放入沸水浴中，待水浴中的水重新沸騰時開始準(zhǔn)確計時，反應(yīng)7min，取出，迅速冷卻至室溫。向三支試管中各加入10ml蒸餾水，混勻。――以空白管（對照液）調(diào)儀器零點，在分光光度計波長550nm下，用10mm比色杯，分別測二支樣品管中樣液的吸光度，取平均值。通過查標(biāo)準(zhǔn)曲線或用線性回歸方程求出還原糖的含量?！?酶活力計算按照下式（）計算樣品的纖維素CMC酶的活力：　　　　　　AVN X1＝ …………………………………………………() W10 式中：　　　　　X1――――纖維素CMC酶活力，u/g?。弧　　　　――――根據(jù)吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得（或從回歸方程計算出）的還原糖生成量，μg；　　　　　V――――樣品提取時加入水的量（ml）；　　　　　N――――樣品二次稀釋時的稀釋倍數(shù)；―――參與反應(yīng)的酶量（ml）；W――――樣品重量（g）；10――――反應(yīng)時間（min）?！?精密度同一試樣兩次測試結(jié)果的絕對差值，不得超過算術(shù)平均值的10%。附　錄　E（資料性附錄）DNS法測定的幾個酶系酶活力與國際單位酶活力、輕工部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及國內(nèi)其他資料報導(dǎo)的酶活力單位的換算　本標(biāo)準(zhǔn)用DNS法測定的幾種酶系（木聚糖酶、β－葡聚糖酶和纖維素CMC酶），因考慮到在我省飼料用酶制劑的生產(chǎn)企業(yè)及應(yīng)用單位的實際情況及所采用的酶活單位的連續(xù)性，其酶活單位的定義均為：在一定溫度（本標(biāo)準(zhǔn)中統(tǒng)一為40oC）、pH條件下，每分鐘分解底物產(chǎn)生1微克（μg）還原糖的量為1個酶活單位。為與國際單位及其他酶活力單位的表示方法比較，將本標(biāo)準(zhǔn)的酶活力單位與其他定義的酶活力單位按如下?lián)Q算公式換算?！?國際酶活力單位　 國際酶活力單位定義在（50177。）oC、相應(yīng)pH條件下，1min水解相應(yīng)底物，產(chǎn)生1μmol還原糖（葡萄糖、木糖）的量為1個酶活力單位，以IU/g(IU/ml)表示。　 換算公式　 木聚糖酶將本標(biāo)準(zhǔn)附錄B計算所得的木聚糖酶的酶活力單位（u/g），換算成為國際單位（μmol/）：X1＝X2/150＝式中：X1―――國際酶活力單位IU/g(IU/ml)。X2―――本標(biāo)準(zhǔn)附錄B計算所得的木聚糖酶活力，u/g(u/ml)?！?β－葡聚糖酶和纖維素CMC酶將本標(biāo)準(zhǔn)附錄C、附錄D（β－葡聚糖酶和纖維素CMC酶）的酶活力單位（u/g），換算成國際單位（μmol/）：X1＝X2/180＝式中：X1―――國際酶活力單位IU/g(IU/ml)。X2―――本標(biāo)準(zhǔn)附錄B計算所得的β－葡聚糖酶和纖維素CMC酶活力，u/g(u/ml)?！?輕工部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)酶活力單位　 酶活單位定義在（50177。）oC、指定pH條件下，1h水解相應(yīng)底物，產(chǎn)生出相當(dāng)于1 mg還原糖（葡萄糖、木糖）的量，為1個酶活力單位，以U/g (U/ml)表示。　 換算公式 將本標(biāo)準(zhǔn)附錄B、附錄C、附錄D計算所得的相應(yīng)酶（木聚糖酶、β－葡聚糖酶和纖維素CMC的酶活力單位（u/g），換算成為輕工部行標(biāo)酶活力單位（mg/）：X1＝X260/1000＝式中：X1―――輕工部行標(biāo)酶活力單位U/g(U/ml)。X2―――本標(biāo)準(zhǔn)附錄B計算所得的木聚糖酶活力，u/g(u/ml)?！?國內(nèi)其它資料酶活力單位　 酶活力單位定義在（50177。）oC、指定pH條件下，1秒鐘水解相應(yīng)底物，產(chǎn)生1nmol還原糖（葡萄糖、木糖）的量為1個酶活力單位，以BU/g(BU/ml)表示?！?換算公式　 木聚糖酶將本標(biāo)準(zhǔn)附錄B計算所得的木聚糖酶的酶活力單位（u/g），（nmol/）：X1＝X21000/15060＝式中：X1―――其它資料酶活力單位BU/g(BU/ml)。X2―――本標(biāo)準(zhǔn)附錄B計算所得的木聚糖酶活力，u/g(u/ml)?！?β－葡聚糖酶和纖維素CMC酶將本標(biāo)準(zhǔn)附錄C、附錄D（β－葡聚糖酶和纖維素CMC酶）的酶活力單位（u/g），換算成其它資料酶活力單位（nmol/）：X1＝X21000/18060＝式中：X1―――其它資料酶活力單位BU/g(BU/ml)。X2―――本標(biāo)準(zhǔn)附錄B計算所得的β－葡聚糖酶和纖維素CMC酶活力，u/g(u/ml)。