網(wǎng)上培養(yǎng)caco-2經(jīng)驗(yàn)總結(jié)-資料下載頁
2025-06-29 16:54本頁面
【正文】 細(xì)胞生長好的情況下可考慮多購買幾瓶同一個(gè)批號(hào)的備用（試驗(yàn)表明冷凍保存放2~3年沒有啥變化）；PH不用調(diào)節(jié)，在配制培養(yǎng)基時(shí)候一般都加入HEPES來平衡酸堿度。培養(yǎng)時(shí)候肉眼觀察即可估計(jì)出PH值，因?yàn)楸旧砼囵B(yǎng)基含有酚紅指示劑，細(xì)胞多的時(shí)候?yàn)辄S色（酸性），細(xì)胞很少為紅色（堿性），加上有5%CO2控制不用考慮酸堿再次調(diào)節(jié)；培養(yǎng)基可考慮重新配制后再培養(yǎng)觀察生長情況，期間要考慮生長為星星點(diǎn)點(diǎn)的是不是有細(xì)菌或霉菌污染的情況?？傊?，試驗(yàn)是要靠你自己去具體分析，以上僅是個(gè)人意見僅供參考。 Caco2在國外基本上已經(jīng)屬于玩爛了的模型了,.至于費(fèi)用,那要看你們現(xiàn)有的條件了,如果已經(jīng)有常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)室的話.花費(fèi)上1個(gè)12WELL的TRANSWELL大概人民幣100多吧,.caco2（人結(jié)腸癌上皮細(xì)胞）的傳代20080824 00:00 來源：丁香園 點(diǎn)擊次數(shù)： 598 關(guān)鍵詞： caco2 人結(jié)腸癌上皮細(xì)胞 傳代 將Caco2 細(xì)胞培養(yǎng)于高葡萄糖(的DMEM培養(yǎng)基中( 1%非必需氨基酸， L谷氨酰胺（Lglutamine)， 培養(yǎng)液含青霉素（ penicillin）10，000U/ml鏈霉素（streptomycin）10，000ug/ml， 10%胎牛血清（Fetal bovine serum，F(xiàn)BS)），長于T75組織培養(yǎng)曲頸瓶中，通入5%CO2(相對(duì)濕度90%)，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)介質(zhì)2～3天更換一次，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到90%融合后，以不含鈣，鎂離子的磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗后與胰酶(%)—EDTA(1mM)于37℃一起孵育至分離(約5～10分鐘)。吹打細(xì)胞使之脫落，置離心管中1000rmp離心5分鐘。細(xì)胞重新懸浮于完全DMEM液中以1:3的比例分配至新培養(yǎng)瓶中。即完成傳代。 我在養(yǎng)黑色素瘤細(xì)胞SKMEL24，非常嬌氣，如果細(xì)胞數(shù)量少，長的很慢，傳代后接種數(shù)量要多才行。我曾經(jīng)試過很多次，單用0、25%胰酶消化，加入胰酶后倒掉，然后放到溫箱中5分鐘，可是效果很不好，吹打不下來。后來改用0、25%胰酶加0、02%的EDTA，用之前水浴加溫，很容易消化下來，大約要六到八天傳代一次。諸位，我也想說幾句：我養(yǎng)的是大鼠系膜細(xì)胞。我的經(jīng)驗(yàn)如下：，每次傳代前，將培養(yǎng)液，PBS，％的胰酶（沒加edta）,放37度烤箱預(yù)熱（此做法是減少4度的涼液體對(duì)細(xì)胞的刺激，以防細(xì)胞死亡）。，一定要燒培養(yǎng)瓶口，做好無菌觀念。，用PBS先沖凈殘留的血清，再加PBS用滴管輕輕的吹打細(xì)胞，將死細(xì)胞吹打掉。：若用加edta的，記住了，在鏡下看到細(xì)胞在收縮時(shí)，趕快吸出胰酶，加血清中止消化。血清可抑制胰酶的活性，但對(duì)edta無效。前后大概不到10秒。若用沒有加edta的，時(shí)間要適當(dāng)延長，看到細(xì)胞變?yōu)橛辛Ⅲw感時(shí)，加血清，輕輕拍打，細(xì)胞就會(huì)散開。若團(tuán)塊大，可用滴管吹打。，不能讓細(xì)胞離開培養(yǎng)箱時(shí)間太長。以上僅是我個(gè)人的心得，有不妥之處，請(qǐng)各位同仁多多指教！謝謝 +10%FBS培養(yǎng)，34天傳代，細(xì)胞第一天往往沒有形態(tài)，2天后開始變成塊狀，3天連成片%TRY+%EDTA，消化后離心去掉EDTA，EDTA影響細(xì)胞貼壁。
醫(yī)療健康相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1