網(wǎng)上培養(yǎng)caco-2經(jīng)驗總結(jié)(編輯修改稿)
2025-07-26 16:54 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 好消化，細胞養(yǎng)了幾代之后穩(wěn)定了，應(yīng)該還是比較好消化的。Caco貼壁比較慢，所以一定要去除胰酶EDTA，要用一次性培養(yǎng)瓶。高糖DMEM培養(yǎng)基添加10%血清（FBS、NBS無所謂）。一兩天內(nèi)細胞貼壁形態(tài)不明顯，兩天之后才能看到細胞貼壁成塊狀，之后12天細胞生長迅速，4天差不多可以傳代。祝好運! 樓上的為什么要用一次性培養(yǎng)瓶啊，我們養(yǎng)的發(fā)現(xiàn)玻璃瓶比一次性的一直都長的好些，雖然細胞普遍長的不好~ 謝謝summityoung！摸索摸索咯～ 我養(yǎng)的時候覺得Caco細胞用玻璃瓶養(yǎng)養(yǎng)，貼壁不好。 丁香園：ATCC建議用MEM+20%FBS，細胞長得也不快，1：4傳代需要57天才可以傳下一代。但是，細胞會出現(xiàn)很多分泌物，看上比較臟，形態(tài)不好看。如果你使用Gibco血清時，可以用逐漸降到10％FBS，一則省血清，二則減少細胞分泌物。國產(chǎn)血清就別省了吧。國內(nèi)的Caco2細胞被馴化過了，可以在10％FBS的條件下長得不錯。如果你是從中科院購買細胞，你可要注意了，尤其是使用進口的好血清時，一定要用10％FBS養(yǎng)，千萬別用20％FBS，否則細胞會瘋長。個人認為，一、血清的多少對Caco2的結(jié)果有影響的，一定要注意血清比例。二、Caco2不應(yīng)該長得很快，一般57天傳一代比較好。三、那些認為Caco2好養(yǎng)的人要注意了，如果你的細胞長得比較快的話，可能是血清的原因，也可能你的細胞已經(jīng)不是Caco2了。電阻儀，太貴了，但又是必備阿Caco－2 細胞單層模型的評價：細胞形態(tài)學(xué)(小腸微絨毛結(jié)構(gòu)及細胞間緊密連接) 。 小腸刷狀緣細胞標志酶———堿性磷酸酶的活性。Caco－2 細胞單層的跨膜電阻( transepithelial electrical resistance ,TEER) 。 漏出標志物(甘露醇、熒光黃等) 被動擴散的跨膜通量。培養(yǎng)時普通培養(yǎng)瓶就好，等到做藥物穿透性試驗時才需要鋪在TRANSWELL板上，賣得公司挺多的，我們用的是MILLIPORE的電阻儀好貴啊，打算用LC/MS測甘露醇ATCC培養(yǎng)方法師姐教我這樣做：1）棄舊培養(yǎng)液，2）PBS洗23遍，棄去，3）加入適量消化液，50ml瓶我加入800ul，蓋好蓋子放進培養(yǎng)箱約3min，4）3min后從培養(yǎng)箱取出培養(yǎng)瓶，在倒置鏡下觀察，大多數(shù)細胞已變圓，棄去消化液，室溫下讓殘留消化液繼續(xù)作用，5）隔幾分鐘輕輕拍打瓶壁，待細胞從瓶壁上脫落時，加入適量完全培養(yǎng)基中止消化作用，用吸管輕輕吹打即可，6)將消化下來的細胞轉(zhuǎn)至離心管進行離心，1000rpm，5min，7）取出離心管，棄去上清液，加入1ml新鮮完全培養(yǎng)基，充分混勻后分瓶。Caco2對營養(yǎng)，對血清的要求較高，如果你傳代后成團，擠著生長，而且你用的是國產(chǎn)血清，試試換成進口的吧，我以前用四季清的，就是你這樣情況，總是長不開養(yǎng)不活，換成GIBCO狀態(tài)就好了，還有，培養(yǎng)液10%的血清比例要足夠，傳代時培養(yǎng)基體積盡量多點也沒關(guān)系的。大家如果感興趣，可以在園子里搜索一下我對于Caco2問題的一些解答和建議，希望能有幫助，在這里把大家在這個帖子里的
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