【正文】 并穿透反光鏡而由目鏡觀察。該方法較簡便，效率高，50W的光源強度比透射熒光法的250W還強。 熒光方法是利用波長較短的紫外光、紫光、藍紫光、藍光及綠光等去激發(fā)樣品，只要樣品中含有可產生熒光的成分，它便吸收短波的激發(fā)光而釋放出波長較長的熒光。不同物質只能吸改特定波長的激發(fā)光，而釋放的熒光也會有特定的波長，因而用作特異性的鑒定十分有效，如某些致病的細菌和螺旋體，受紫外光激發(fā)后能發(fā)出它們特有的熒光，很容易作出鑒定，這種利用物質吸收激發(fā)光后放出特有熒光的方法稱為自發(fā)熒光法。某些物質自身不會吸收激發(fā)光，或吸收后不能釋放熒光，但可以吸收或吸附特定的熒光色素或染料，而這些特定的熒光色素或染料也只能吸收特定的激發(fā)光，再釋放出特定的熒光，從而間接地鑒別出某種物質，這稱為間接熒光法。上述熒光方法廣泛應用于醫(yī)學、生物學及工業(yè)的特異性研究和鑒別上。調整方法：熒光顯微鏡或附有熒光部件的顯微鏡，調整的方法大致相同。① 汞燈的安裝 a. 打開包裝，取出汞燈將其小心安裝在上電極散熱帽上，安裝時注意手指不能直接接觸燈管和散熱帽的正面，汞燈的封氣口要對向散熱帽的左側或右側； b. 把汞燈的上電極引張安裝并固定在散熱帽底面的小孔上，再把汞燈的下電極及上電極引線另一端，分別安裝在燈座上各自的插孔中并固定； c. 鎖緊散熱片上的螺絲后，把汞燈連同燈座及散熱帽小心裝入燈室中，鎖緊相應的螺絲，再把燈座上的連線和插座插到汞燈電源后部專用的插座上。 d. 詳細的安裝方法請參照有關說明書。② 汞燈燈室在顯微鏡外的初步調整： a. 接通汞燈電源，讓汞燈預熱1015min；b. 把汞燈燈室擺放在桌面上，讓汞弧投影到23m外的墻上，劃一條與燈室窗口中心線對地高度一樣的水平線作為參考線； c. 轉動燈室調焦旋鈕，使汞弧的像清晰地投影于墻上；d. 分別調節(jié)燈室外殼上的5個調節(jié)螺絲孔，把汞弧的像其反射像調成并排且盡量靠近，但不要重疊在一起。③ 汞燈汞弧在顯微鏡內位置的檢驗： a. 將汞燈照明光路系統(tǒng)中的視場光闌開到最大； b. 把熒光濾光片組推到藍光激發(fā)的位置上，以避免汞燈中的藍光太刺眼；c. 把觀察的樣品或一塊載玻片放在物臺上，蓋上一張比蓋玻片稍大且潔白的薄紙；d. 取下一個物鏡，使激發(fā)的藍光經(jīng)物鏡轉換器的空檔照在白紙上，白紙上會有一藍色的圓形照明區(qū)域，汞弧的像及其反射像都應該出現(xiàn)在這區(qū)域的中央部位，否則，可調節(jié)燈室調焦旋鈕至最清晰，然后分別調節(jié)燈室外殼上的5個調節(jié)螺絲孔，直至汞弧的像及其反射像并排在照明區(qū)域的中央位置。 e. 調好之后，把物鏡裝回去，通過目鏡可見白紙被藍光激發(fā)后發(fā)射出的黃綠色熒光； f. 仔細調焦，可看清白紙的纖維；取去白紙，樣品上的熒光細節(jié)隱約可見而很容易調焦清晰。④ 汞燈使用注意事項　目前通常使用的為50W超高氣壓汞燈，燈管內通有一對鎢電極和液態(tài)汞（室溫下附在管壁上），未點燃時，管內氣壓很低，在燈管的兩電極間施加電壓角發(fā)點燃后，汞氣化為汞蒸氣形成汞弧而產生強光，溫度升高，管內氣壓迅速升到10個大氣壓。由于是高氣壓的氣體放電，必須了解其特性才能安全地使用汞燈。 a. 汞燈接通電源后需要1015min預熱時間，汞才能充分汽化并形成汞弧，產生高亮度而穩(wěn)定的激發(fā)光。因此，觀察前要提早通電； b. 汞燈在使用過程中，不要隨意開關汞燈的電源； c. 關掉汞燈電源后，必須等待1520min，待汞燈自燃冷卻后才可再次接通電源，違反這一操作規(guī)定時，將會造成嚴重后果！ 由于汞燈內的汞蒸氣未完全液化，汞蒸氣內阻很小，一旦通電在兩電極間施加電壓，汞燈內形成強大的電流，輕則燒斷保險絲或燒毀汞燈電源中的扼流圈，重則汞燈爆炸，汞蒸氣彌漫整個實驗室，造成工作人員中毒，不僅損失了汞燈，還會炸毀燈室內的集光聚光部件。d. 汞燈的使用壽命一般只有300h，使用得當可達600h，使用壽命與開關的次數(shù)成反比，應集中一批樣呂作23h的觀察。汞燈價格及昂貴，應珍惜使用。 e. 汞燈壽命終結的標志是點燃困難，燈管發(fā)黑。5. 暗視野法（dark field）　許多透明或半透明的樣品，如細菌、微生物、細胞內的精細結構及結晶體的內含物等，在明視野顯微鏡中不容易看清楚，如果采用暗視野法就可以大大提高樣品的可視度。以暗視野法所看到的是襯托在黑暗視野背景中發(fā)亮的樣品輪廓及其細節(jié)。 ?m，而暗視野顯微鏡雖然對樣品的細節(jié)構造分辨不清楚，?m以上微細顆粒的存在，即可以看到亞顯微結構，特別適合用來觀察微細的顆粒與細菌等。調整方法：暗視野法的主要必需部件是暗視野聚光鏡。使用時須先用明視野聚光鏡把庫勒照明系統(tǒng)調整好。換上暗視野聚光鏡時，要把載玻片（樣品）移開，將浸沒油滴在聚光鏡頂部，再把樣品載玻片擱在物臺上，浸沒油便充填在兩者之間，這種聚光鏡須與裝有可變光闌的100油鏡配用。另一種中倍率干式暗視野聚光鏡可與中倍率的物鏡配用，這種聚光鏡具有中央光擋，照明光只能透過光檔與聚光鏡邊緣之間的透光環(huán)才能進入聚光鏡內。對于配備齊全的相差顯微鏡，與編號為Ph3物鏡配用的相差聚光鏡相差環(huán)，可以和 10及10以下的相差物鏡配用而形成低倍率的暗視野效果。光學顯微鏡的保養(yǎng) 顯微鏡是一種精密的光學儀器，價格普遍較高。從結構上看，顯微鏡由許多光學部件和較精密的金屬零件組成，在使用過程中應特別注意做好保養(yǎng)工作。 1. 嚴格按照有關操作規(guī)則使用顯微鏡，避免因使用不當造成損毀。 2. 顯微鏡在儲存和使用過程中，普遍存在著生霉起霧問題，霉和霧會使顯微鏡的視場模糊，分辯率下降。為了使顯微鏡保持良好的工作狀態(tài)，延長使用壽命，顯微鏡的工作環(huán)境應保持清潔、干燥、防塵。 3. 顯微鏡在每次使用完畢后應及時做好清潔工作，特別是目鏡、物鏡等容易污染的光學部件，如發(fā)現(xiàn)表現(xiàn)表面有灰塵、指紋、臟物等，應及時用鏡頭紙清潔干凈。4. 顯微鏡工作室最好能安裝空調、抽濕及防塵裝置。 5. 如發(fā)現(xiàn)光學部件內部有生霉等現(xiàn)象，最好及時聯(lián)系有關廠家派人清潔、維修。