【正文】 相容性[1,2]一個成功的軟質(zhì)材料的支架涂層的應(yīng)用。分段的熱塑彈性體，例如PDMS基聚氨酯[5,6]和PIB基聚氨酯[7,8]也被報道為生物穩(wěn)定和生物相容的?；赑DMS的PIB和基于熱塑性彈性體增強的生物穩(wěn)定性歸因于這兩種PDMS和聚異丁烯主鏈的疏水性和惰性。 三嵌段聚（甲基）丙烯酸酯，如聚甲基丙烯酸甲酯B PNBA 嵌段 聚甲基丙烯酸甲酯是通過活性陰離子聚合（LAP ）中合成的常規(guī)熱塑性彈性體，稍后，該共聚物已成功通過ATRP [9,10]合成。然而，共聚物通過ATRP合成具有低的儲能模量，高的復(fù)數(shù)粘度，高有序 無序轉(zhuǎn)變溫度和差的極限拉伸強度和斷裂伸長率，比LAP類似物。這些差異是由于甲基丙烯酸甲酯的慢啟動由PNBA大分子引發(fā)劑在原子轉(zhuǎn)移自由基聚合中使用該得到廣泛的PDI [9]。 但從合成的角度，充分的聚（甲基）丙烯酸酯系熱塑性彈性體是由于：（一）溫度的范圍，由于不同的聚（甲基）丙烯酸酯[范圍從250℃下進行聚可調(diào)的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度（Tg）的屬性的有益（丙烯酸異辛酯）高達190 ℃下聚（甲基丙烯酸異冰片）[9,11] ，通過活性自由基聚合（ LRP ）（二）容易合成[ 9 ] ，（三）可調(diào)力學(xué)性能由簡單的線性改變結(jié)構(gòu)徑向[ 12 ] ，通過LRP工藝[ 13,14] （四）易于表面修飾及（v ）極好的氧化和耐紫外線性能相比聚（二烯）類共聚物[ 9,15 ]。 盡管聚（甲基）的更好的氧化穩(wěn)定性丙烯酸酯相比，聚（二烯烴），聚（甲基）丙烯酸酯也經(jīng)受氧化降解[16]。的確，加速氧化降解試驗表明，聚（甲基）丙烯酸酯為基礎(chǔ)的熱塑性彈性體也氧化/水解脆弱[13]。聚降解的這種類型的（甲基）丙烯酸酯系TPE可能限制他們在體內(nèi)的應(yīng)用程序，其中的生物穩(wěn)定性是非?？扇〉摹Ｒ郧暗奈墨I報道了用全聚（甲基）丙烯酸酯系三嵌段共聚物插件10噸涂層的應(yīng)用。這類共聚物的長期生物穩(wěn)定性/生物相容性，沒有被評估[17,18]。的PIB β聚甲基丙烯酸甲酯嵌段共聚物的合成報道通過結(jié)合活性陽離子聚合和偶聯(lián)反應(yīng)[19]。 PIB和聚（甲基丙烯酸甲酯）或聚苯乙烯的嵌段共聚物，還通過組合活性陽離子聚合和原子轉(zhuǎn)移自由基聚合[20]合成。通常情況下,70 85％（ W / W ）軟塊是要達到合理的熱塑性特性。當(dāng)然，熱塑性彈性體具有較好的力學(xué)性能，當(dāng)它包含中間軟塊和結(jié)束塊硬盤。因此，合成生物穩(wěn)定/生物相容的和占優(yōu)勢的聚（甲基）丙烯酸酯的含彈性體是可取的特定的生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用。 以增強細胞相容性，并解決傳統(tǒng)的PMMA B PNBA bPMMA共聚物貧乏的體外氧化穩(wěn)定性的問題，我們提出使用其可將所述共聚物的表面上的大分子引發(fā)劑，沒有機械性能產(chǎn)生負面影響。因此本工作的重點是主要由聚（甲基）丙烯酸酯的含熱塑性彈性體具有改善的性能，只要生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用被認為是合成的。在此，我們報告ATRP大分子引發(fā)劑（軟中間塊），如PNBA ，硅橡膠和聚異丁烯分別對性能（相分離行為，力學(xué)性能，體外氧化穩(wěn)定性和細胞的相互作用）各共聚物的新穎效果。它表明，共價連接的PIB（ W10重量％）的中等量到聚（甲基）丙烯酸酯系共聚物極大地改善了性能的進一步應(yīng)用。2. 實驗部分 物料 烯丙基封端的PIB（烯丙基PIB 烯丙基）與NMR衍生的分子量（Mn ， NMR 188。 5300克/摩爾）和多分散性指數(shù)（PDI）188。 ，日本提供并原樣使用。 NBA （ Aldrich公司，98％）和甲基丙烯酸甲酯（ Aldrich公司，96％）洗滌，用5％ NaOH水溶液洗滌，無水氯化鈣，真空蒸餾，并在氮氣下儲存在→5→ C。三乙胺（ Spectrochem ，印度）被存儲在NaOH顆粒AND4 分子篩。二壬基3,20 二吡啶（ dNbpy ） （97％） ，2 溴異丁酰溴（ EBiB ）（98 ％），9 硼雜雙環(huán)[ ]壬烷（ 9BBN ， ）購自Aldrich獲得并且原樣使用。催化劑氯化亞銅（BDH ，98％）和溴化亞銅（ Aldrich公司， 98％）洗滌，用10％純化，分別（重量/體積） HCl和HBr的水，然后在氮氣氣氛下，用甲醇和乙醚在Schlenk管中洗并存儲在干燥器中。對二甲苯，甲苯（98％ ，SRL，印度），氯化鈷（ Spectrochem ，印度），過氧化氫（在水中30％的溶液，Rankem ，印度）用作接收。四氫呋喃（THF）（ Rankem ，印度）中蒸出的鈉和使用。該三嵌段共聚物（三嵌段） PNBA / PMMA （聚甲基丙烯酸甲酯B PNBA β聚甲基丙烯酸甲酯）和PDMS的含PMMA b PnBAb PDMS b PNBA 嵌段 聚甲基丙烯酸甲酯五嵌段共聚物（五嵌段）的PDMS / PNBA /聚甲基丙烯酸甲酯]合成為早些時候報道[ 13 ] 。 合成 合成含有聚異丁烯作為軟塊中的一個五嵌段采用PIB為基礎(chǔ)的雙官能團大分子引發(fā)劑（ BrPIB 溴）的BR PIB溴大分子引發(fā)劑是從烯丙基PIBAllyl準備通過兩步反應(yīng)（補充內(nèi)容）。 BR PNBA 嵌段 聚異丁烯 嵌段 PNBA 溴[（三嵌段） PIB/PnBA2 ]的合成含14 ％（重量） PIB大分子引發(fā)劑使用BR PIB溴作為大分子引發(fā)劑，合成了NBA的原子轉(zhuǎn)移自由基聚合液體三嵌段大分子引發(fā)劑。一個典型的例子為（三段） PIB/PnBA2大分子引發(fā)劑的合成方法如下： BR PIB溴（≤2克， 10） ，拍攝于裝有B24標準接頭和圓形底燒瓶的一個攪拌棒。接著，對 二甲苯（ ） ，NBA （， ），預(yù)先用氮氣吹掃的氮氣氣氛下引入燒瓶。燒瓶然后關(guān)閉用橡膠隔膜這是由銅導(dǎo)線固定并攪拌20分鐘。隔，然后在氮氣氛下再開，溴化亞銅（， ?10 為4mol ）和dNbpy（，）加入。再次將燒瓶用隔膜封閉。形成均勻的栗色溶液后，燒瓶保持在油浴中在90攝氏度和攪拌5小時。將混合物稀釋，甲苯，并將該溶液通過硅膠/氧化鋁柱，除去銅催化劑。將甲苯溶液濃縮通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在甲醇中沉淀。接下來，將分離的聚合物，再在60℃下干燥，在真空烘箱中48小時，并稱重。的轉(zhuǎn)化率為79％。分子量（錳，GPC測定，Mn ，NMR）由凝膠滲透色譜法（GPC）和NMR法計算，分別為27,700 38,000克/摩爾分別。 。通過進行四組聚合使用完全相同的配方和聚合反應(yīng)終止，在不同的時間進行動力學(xué)分析。 五嵌段聚甲基丙烯酸甲酯B PNBA 嵌段 聚異丁烯 嵌段 PNBA bPMMA [（五嵌段） PIB/PnBA/PMMA2 ]含有10 ％（重量）聚異丁烯共聚物的合成 一個典型的程序（五嵌段） PIB/PnBA/PMMA2共聚物的合成方法如下。預(yù)先合成（三嵌段） PIB/PnBA2大分子引發(fā)劑（3克， 39。1039。 5摩爾）溶解在裝有攪拌棒的圓底燒瓶中。接著，對 二甲苯（）和甲基丙烯酸甲酯（， ），預(yù)先用氮氣吹掃，分別注入用氣密注射器燒瓶中。焊劑，然后關(guān)閉用橡膠隔片，將其固定用銅導(dǎo)線。將混合物攪拌為大分子引發(fā)劑完全溶解5小時。隔膜在氮氣氣氛下重新打開，氯化亞銅（ ， ?10 為4mol ）和dNbpy （， ?10 ？為4mol ） ，然后快速地在氮氣氣氛下加入到燒瓶中。將燒瓶充滿了用氮氣再次通過密封隔膜。形成均勻的栗色溶液后，將燒瓶保持在油浴中于90? C和攪拌55分鐘。然后將該聚合物分離，純化和所描述的三嵌段共聚物進行干燥。的轉(zhuǎn)化率為45％ ，和分別的Mn，GPC ，錳， NMR和共聚物的PDI分別為38,000 ， 51400克/ 。通過進行四組聚合使用完全相同的配方和聚合反應(yīng)終止，在不同的時間進行動力學(xué)分析。 描述 Mn和PDI 共聚物的MNS是由兩個GPC和NMR分析測定。 ， 1000 ， 500 這是前面加一個前置過濾器的氣孔尺寸進行。 HPLC級四氫呋喃（ 穆斯堡爾 ，印度）作為洗脫劑以1毫升/分鐘aflow率。該共聚物溶液通過穿過事先堿性氧化鋁柱，以注入到GPC系統(tǒng)從銅鹽釋放它們進行純化。該共聚物溶液，然后通過一個預(yù)濾波濾波器組合系統(tǒng)與有機溶劑相容的過濾。為校準，聚苯乙烯標準品使用。布魯克200兆赫光譜儀被用來record1H NMR譜。核磁共振錄得25 ℃。使用CDCl3was作為溶劑， TMS為內(nèi)標。 BR PIB溴的Mn為也通過NMR分析得到的，考慮到PIB的雙官能團。 BR PIB溴的錳，估計是5300克/ mol的由NMR通過以下等式： 其中MIB是IB的分子量。 （CH 3） 2epresent在PIB骨干andeOeCH2e存在于PIB鏈的末端。值252為溴烷基的分子量。 兩個聚甲基丙烯酸甲酯和PNBA塊的NMR衍生的Mns估計由下面的等式： and MnBAare計算各自圖單體的分子量的重復(fù)單元。 1表示烯丙基PIB 烯丙基，OH PIB OH， BR PIB BR，（三嵌段） PIB/PnBA2大分子引發(fā)劑，并代表（五嵌段） PIB/PnBA/PMMA2共聚物的NMR譜圖。因此，共聚物估計經(jīng)1HNMR （圖 S1 ，補充的內(nèi)容）。原子轉(zhuǎn)移自由基聚合中，單體轉(zhuǎn)化率也通過NMR （圖S2的補充量）來確定。 被執(zhí)行的其他材料特性，包括拉伸性能，動態(tài)力學(xué)分析（DMA ，差示掃描量熱法（DSC ）,水q測量和掃描電鏡分析，作為較早報道的PDMS含共聚物（補充內(nèi)容）[ 13 ] 。 加速氧化降解試驗 在正常和預(yù)拉伸條件下樣品的加速水解/氧化降解是由暴露于水氯化鈷溶液調(diào)查（ 200毫升， ）含過氧化氫（ 25 ％ ，W / V）的不同時間段，在60 ℃和濃度溶液中存在的自由基保持相對恒定，通過改變每周兩次（補充內(nèi)容詳細實驗）的溶液。 細胞培養(yǎng)研究和細胞形態(tài)學(xué)評估 單元的軟五嵌段共聚物的表面上的附著，完全硅橡膠（對照）和組織培養(yǎng)板是根據(jù)類似的體外條件下測試。對細胞表面上的附著的分析。特性最初用70 ％體積/體積乙醇1小時，隨后洗滌三次，在無菌磷酸鹽緩沖液（PBS ，pH值188。 ）。然后將膜切成相等的大小和放置在24孔組織培養(yǎng)板（Corning ，德國）。 特性最初為每孔2小時，接著在5 106mouse骨髓干細胞（的BMMSCs）的播種在平衡的2毫升培養(yǎng)基（ DMEM高葡萄糖）的存在。然后將板輕輕地搖動10分鐘，以確保細胞分布均勻，然后置于培養(yǎng)箱內(nèi)于在5％ CO2atmosphere 37 ℃ 。附件周期的4小時后，將細胞裝膜液用培養(yǎng)基以去除未附著或松散地附著的細胞和1毫升培養(yǎng)液加入到它，并進一步培養(yǎng)4小時?？偧毎母街患毎暮巳旧治鰺晒馊玖?0,6 二脒基2 苯基吲哚（DAPI ）和通過熒光顯微鏡（ AXIOVERT 25 ，蔡司，德國）觀察。 另外，在共聚物表面緊密附著的細胞的形態(tài)決定的。對于形態(tài)學(xué)研究，細胞接種共聚物薄膜進行培養(yǎng)1天。溫育后，將細胞在4 ％戊二醛液然后混合。進一步的細胞脫水中增加的乙醇梯度（10100 ％）。脫水后，膜前面為SEM分析按照較早的協(xié)議[21]。簡言之，表面薄膜被涂布的金顆粒的樣品在濺射鍍膜機3分鐘，在真空條件下，并根據(jù)掃描觀察它們在1000 放大后檢查電子顯微鏡（SEM ， LEO435 VF ，UK）。 細胞活力 測定（ HIMEDIA ，印度） 對共聚物膜，硅橡膠（對照）和組織培養(yǎng)板中的細胞存活率用MTT （（ 4,5 二甲基吡啶2 基）2,5 二苯基溴化3 ）進行測定。對于此樣品被接種的BMMSCs和不同時期培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)束后，細胞用PBS洗滌兩次，并孵育含有MTT （）于37℃在黑暗中4小時新鮮培養(yǎng)基。然后將未反應(yīng)的染料除去，并加入DMSO來溶解細胞內(nèi)不溶性紫色甲臜產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成有色溶液。此溶液的吸光度進行定量照片光譜在570nm處用酶標儀（ FLUO星的Optima 4131210 ，BMG LABTECH ，德國）。后2，5天和10天播種，進行該測定。細胞接種在組織培養(yǎng)板中分別用作陽性對照為這項研究。 細胞存活率也基于活的和死細胞計數(shù)臺盼藍染色法測定。生存力測定法測量細胞懸液是可行的百分比。后培養(yǎng)細胞24小時，從每個表面胰蛋白酶消化并制備細胞懸浮液（ 106cells/ml ） 。1:1（ V / V） ％ （ W / V）臺盼藍溶液，然后制備的懸液。使用血細胞計數(shù)器未染色的細胞進行計數(shù)。百分比未染色的細胞的總細胞的代表活細胞的百分比。 細胞增殖，吖啶橙/溴化乙錠染色和活性氧（ROS）的測試對各種樣品鼠標的BMMSCs細胞增殖，結(jié)晶紫法檢測。播種為2,5和10天后，細胞膜的構(gòu)建體在PBS中洗滌，固定于4 ％多聚甲醛15分鐘。％的結(jié)晶紫為30分鐘。在這之后，細胞用PBS洗滌三次。染色所采取的細胞中，然后在100％甲醇提取15分鐘。甲醇提取物的外徑是采取在540 nm處。吖啶橙/溴化乙錠染色和ROS的決心也進行了評估細胞相容性的共聚物（補充內(nèi)容） 。