【正文】 使用不同機(jī)械清洗方法對內(nèi)鏡生物膜進(jìn)行處理a) 持續(xù)灌流10天后，取出Teflon管，排空管腔內(nèi)的灌流液，用浸有75%酒精的無菌紗布擦干Teflon管外表面。棄去Teflon管的兩端各5cm，用無菌手術(shù)刀片以Ⅰ組16cm，Ⅱ組16cm（a）、16cm（b）、16cm（c），Ⅲ組16cm（d）、16cm（e）、16cm（f），Ⅳ組16cm（g）、16cm（h）、16cm（i），分段切開并標(biāo)記。b) Ⅰ組為空白對照組，放入盛有無菌PBS的容器中進(jìn)行沖洗，輕輕翻轉(zhuǎn)容器5次，棄去PBS液,用吸管吸取殘余的溶液，重復(fù)3次后取出，洗掉浮游菌，用無菌干紗布吸凈多余液體。將準(zhǔn)備好的Ultrasnap拭子擦拭Teflon管內(nèi)管腔，使用ATP生物熒光法檢測有機(jī)物殘余量。用無菌手術(shù)刀片將長16cm的管腔分別切為5段3cm和1段1cm長的Teflon管。c) Ⅱ組為Olympus清洗刷組，Teflon管a、Teflon管b、Teflon管c分別浸泡在盛有無菌PBS的容器中各刷洗一次、二次、三次。刷完后每段Teflon管分別放入盛有無菌PBS的容器中進(jìn)行沖洗，輕輕翻轉(zhuǎn)容器5次，棄去PBS液,用吸管吸取殘余的溶液，重復(fù)3次后取出，洗掉浮游菌，無菌干紗布吸凈多余液體。將準(zhǔn)備好的Ultrasnap拭子擦拭Teflon管內(nèi)管腔，使用ATP生物熒光法檢測有機(jī)物殘余量。用無菌手術(shù)刀片將長16cm的管腔分別切為5段3cm和1段1cm長的Teflon管。d) 3cm長的Teflon管為收集管腔內(nèi)的細(xì)菌，試驗管縱向切開等分為兩部分，每段管腔的內(nèi)表面用一個2mm寬的消毒小木棒進(jìn)行擦刮，與擦刮棒一起放入盛有5mlPBS的試管中。這5個試管先進(jìn)行超聲水浴10min（42~47KH、20℃），然后使用漩渦振蕩器振蕩1min。振蕩后的懸浮液。e) 振蕩后的液體進(jìn)行梯度稀釋并重復(fù)接種3個平板，37℃培養(yǎng)48h后進(jìn)行細(xì)菌菌落學(xué)計數(shù)。f) 1cm長的Teflon管行熒光染色后進(jìn)行CLSM檢查。d) Teflon管Ⅲ組和Ⅳ組處理方法同Ⅱ組。（4） 評價方法① 細(xì)菌菌落計數(shù)：收集后的菌液進(jìn)行細(xì)菌梯度稀釋。經(jīng)震蕩混勻器充分震蕩均勻后的液體取1ml接種至直徑90mm的無菌平皿，每個平皿分別倒入無菌的45℃48℃營養(yǎng)瓊脂15ml18ml，邊傾注邊搖勻。待瓊脂凝固，于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h后計數(shù)。培養(yǎng)后觀察菌落生長情況,記錄平板菌落數(shù),計算細(xì)菌總數(shù)（菌落數(shù)/鏡=2個平皿菌落數(shù)平均值2）。細(xì)菌計數(shù)的結(jié)果用實際菌落數(shù)的常用對數(shù)(log cfu/cm3)為標(biāo)準(zhǔn)菌落計數(shù)單位來表達(dá)。菌落計數(shù)換算為標(biāo)準(zhǔn)菌落計數(shù)單位。實際菌落數(shù)(cfu/cm3)=肉眼可計菌落數(shù)稀釋倍數(shù)/體積，取實際菌落數(shù)的常用對數(shù)(log cfu/cm3)為標(biāo)準(zhǔn)菌落計數(shù)單位。② ATP生物熒光法檢測：準(zhǔn)備好Ultrasnap拭子并確定其外表面干凈且干燥。打開蓋子，將Ultrasnap拭子放入ATP生物熒光法檢測儀中后關(guān)閉蓋子。開始檢測，15s后觀察結(jié)果讀數(shù)。結(jié)果判斷：0~45RLU為合格，≥46RLU為不合格。③ CLSM檢測。（5） 統(tǒng)計學(xué)處理：應(yīng)用SPSS 軟件進(jìn)行處理,同種處理因素不同水平采用方差分析中的oneway ANOVA進(jìn)行檢驗,不同處理因素間的兩兩比較采用LSDt檢驗。技術(shù)路線：是研究步驟的圖表化全國范圍內(nèi)臨床內(nèi)鏡生物膜現(xiàn)狀資料收集形成解決內(nèi)鏡生物膜問題的新思路內(nèi)鏡生物膜模型制作清洗刷作用于內(nèi)鏡生物膜模型對照組Ⅰ實驗組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ處理效果評價菌落計數(shù)ATP熒光分析CLSM檢測收集數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，驗證干預(yù)的效果篩選即適用于臨床，又能有效的清除內(nèi)鏡生物膜的機(jī)械清洗方案指導(dǎo)臨床內(nèi)鏡機(jī)械清洗的正確方法，防止內(nèi)鏡生物膜的發(fā)生全國范圍內(nèi)臨床內(nèi)鏡生物膜調(diào)研調(diào)查問卷實驗室檢測了解現(xiàn)狀分析形成及影響因素手工刷洗方法的可行性研究四 研究工作條件和基礎(chǔ)這部分主要寫開展研究具備的條件，而非需要的條件。醫(yī)科大學(xué)內(nèi)科消化學(xué)組始建于50年代。1955年引進(jìn)了硬式胃鏡，1957年開展了軟式胃鏡，1973年在國內(nèi)率先開展了纖維結(jié)腸鏡檢查。在70年代初成立了消化?？频耐瑫r，成立了生化實驗室，1979年組建全軍消化醫(yī)學(xué)?？浦行暮?，先后建立了微生態(tài)實驗室及病理檢驗室，開展了厭氧菌培養(yǎng)和腸道菌群分析，1990年初增建了相對獨立的細(xì)胞培養(yǎng)室、分子生物學(xué)實驗室、胃腸激素室，使消化內(nèi)科實驗室成為初具規(guī)模、在國內(nèi)消化界有較大影響力的臨床實驗室?，F(xiàn)該實驗室為全國重點學(xué)科的中心實驗室，先后完成了國家自然基金課題10項；軍隊重點攻關(guān)和廣東省各類基金20余項。本實驗室現(xiàn)有面積約420平方米，擁有細(xì)胞培養(yǎng)及小動物室等多個相對的獨立實驗室和三個無菌工作間，現(xiàn)已具備：紫外－可見分光光度計（BIORAD）、超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、空氣浴與水浴搖床、生化免疫、病理、分子生物學(xué)、胃腸激索、微生態(tài)等實驗室。配有PCR擴(kuò)增儀，顯微圖像分析儀、熒光分光光度計、80℃低溫冰箱、熒光顯微鏡、倒置顯微鏡、低溫超速離心機(jī)、BioRad酶標(biāo)儀、低溫高速離心機(jī)、微量高速離心機(jī)、核酸定量儀、ScanArray5000掃描儀、各種電泳裝置、核酸轉(zhuǎn)移裝置、等主要試驗用儀器，是國內(nèi)唯一能開展多種需氧及厭氧菌培養(yǎng)的臨床實驗室，均狀態(tài)良好，運行正常。醫(yī)院中心實驗室、校本部實驗室，設(shè)備先進(jìn)、技術(shù)力量雄厚，P級實驗室、共聚焦顯微鏡等儀器，在本課題需要時可隨時使用。研究基礎(chǔ)：前期已做的工作前期工作中，我們參考了國內(nèi)外大量文獻(xiàn)，進(jìn)行了內(nèi)鏡生物膜模型的建立和不同清洗劑清除內(nèi)鏡生物膜的實驗研究。其中內(nèi)鏡生物膜模型的建立通過大腸桿菌在內(nèi)鏡Teflon管上生物膜的形成與培養(yǎng)時間、流速、溫度的關(guān)系，研究形成了成熟穩(wěn)定的黏附于內(nèi)鏡Teflon管上的生物膜。研究發(fā)現(xiàn)細(xì)菌更容易在Teflon管超微結(jié)構(gòu)上微小的溝紋縫隙中積聚，因此在這些縫隙中更易形成生物膜，提示在內(nèi)鏡的手工清洗中要注意選擇合適的刷子及適當(dāng)?shù)乃⑾捶绞?，以免劃傷?nèi)鏡管腔的內(nèi)表面，從而降低細(xì)菌的黏附。五 計劃進(jìn)度選題研究在時間和順序上的安排。起止日期論文工作進(jìn)度（主要內(nèi)容、完成要求）準(zhǔn)備實驗用品，進(jìn)行臨床內(nèi)鏡管道的收集及評價進(jìn)行手工刷洗對內(nèi)鏡生物膜清洗效果的處理并收集數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)整理，統(tǒng)計分析完成課題，撰寫論文畢業(yè)答辯指導(dǎo)教師評語導(dǎo)師簽名： 年 月 日教研室意見主任簽名： 年 月 日學(xué)院意見院長簽名： 年 月 日12