造血干細(xì)胞的發(fā)育調(diào)控-資料下載頁
2025-05-26 22:00本頁面
【正文】 成血液細(xì)胞。 ? 體外造血祖細(xì)胞培養(yǎng)就是在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，將從機(jī)體中分離出的造血祖細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，使之生存、增殖分化。 造血祖細(xì)胞培養(yǎng) 的 主要應(yīng)用： 1） 檢測造血祖細(xì)胞在骨髓、外周血和臍血中的數(shù)量 2） 研究體外造血祖細(xì)胞類型、特性及生理意義 3） 利用人工培養(yǎng)條件易于嚴(yán)格控制的特點(diǎn)，研究造 血調(diào)節(jié)； 4） 用于造血系統(tǒng)疾病發(fā)生機(jī)制，診斷、預(yù)后判斷、 療效觀察及治療藥物的選擇等方面的研究。 一、造血干／祖細(xì)胞體外培養(yǎng)的基本條件 （一） 細(xì)胞培養(yǎng) 室條件 （二）培養(yǎng)的支持物 （三）營養(yǎng)液 （四）細(xì)胞因子 （五）血清 二、造血干／祖細(xì)胞體外培養(yǎng) （一） 造血祖細(xì)胞 集落 培養(yǎng)： （ 1） 分離培養(yǎng)細(xì)胞，制成單個(gè)核細(xì)胞懸液。 （ 2） 配制培養(yǎng)體系 ： 按比例將培養(yǎng)液、細(xì)胞、血清、 細(xì)胞 因子加入 到 培養(yǎng)體系，混勻。 （ 3） 將配制的培養(yǎng)體系在 37℃ 水浴 中 保溫 10min。 （ 4） 將瓊脂等支持物煮沸融化（甲基纖維素不需加熱）。 （ 5） 待支持物降至 40℃ 左右，加入培養(yǎng)體系并混勻。 （ 6） 將混勻后的培養(yǎng)體系加入培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板孔內(nèi)，一般平行做 3份。 （ 7） 于 5% CO飽和濕度及 37℃ 溫箱內(nèi)孵育。 BFUE需 14天 ， CFUE需 7天。 （ 8） 觀察結(jié)果。 （一）紅系 祖細(xì)胞 誘導(dǎo)分化的液體 培養(yǎng)： ? Medium ? FBS ? EPO ? Stem cell factor ? IL3 FVA CELLS: an in vitro system to study erythroblast differentiation 0h 12h 24h 44h FVA cells: Briefly, 10 days after infection with 104 spleen focusforming units of the anemiainducing strain of Friend leukemia virus (FVA), female CDF1 mice were killed, and proerythroblasts (spleen origin) were purified and cultured. Koury MJ,et al. J Cell Physiol 1984, 121:526–532. Lee G,et al. Blood, 2022,101, 17901797. ? High amount of enucleating erythroblast cells produced. After 44 hours of culture, one can purify young reticulocytes and extruded nuclei. ? One starts with highly synchronized erythroblasts proerythroblasts basophilic erythroblast polychromatic erythroblast Orthochromatic erythroblast and reticulocyte Biggest advantages of this system:
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