a細(xì)胞工程第4節(jié)—植物花粉和花藥培養(yǎng)-資料下載頁
2025-05-25 22:33本頁面
【正文】 ）花藥壁因素 第四節(jié) 單倍體植株鑒定和染色體加倍 一、倍性鑒定 二、染色體加倍 一、倍性鑒定 （為什么要進(jìn)行倍性鑒定？） 染色體直接計(jì)數(shù)法 通常取根尖、莖尖等分生組織區(qū)進(jìn)行制片，直接計(jì)數(shù)染色體數(shù)目。 間接鑒定 （ 1） 掃描細(xì)胞光度儀鑒定（流式細(xì)胞儀） 主要測(cè)定葉片單個(gè)細(xì)胞中DNA的含量確定細(xì)胞的倍性，材料的使用量可少到 1cm2。 （ 2）細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定法 葉片保衛(wèi)細(xì)胞大小、單位面積上的氣孔數(shù)及保衛(wèi)細(xì)胞中葉綠體的大小和數(shù)目與倍性具有高度的相關(guān)性。 （ 3）植株形態(tài)學(xué)鑒定法 單倍體植株瘦弱，葉片窄小，花小柱頭長，花粉粒小，不結(jié)實(shí)。 （ 4）雜交鑒定法 自交或測(cè)交鑒定，看后代分離情況確定二倍體植株是來自小孢子還是體細(xì)胞。 （ 5）分子標(biāo)記鑒定 包括生化標(biāo)記（如同工酶標(biāo)記）和分子標(biāo)記（如 RFLP、 RAPD、 AFLP等） 二、染色體加倍 （為什么要進(jìn)行加倍？） : 花粉細(xì)胞核有絲分裂或核融合可自然加倍，其優(yōu)點(diǎn)是不會(huì)出現(xiàn)畸形，缺點(diǎn)是隨機(jī)性強(qiáng)，難以掌握和利用 。 ： 用秋水仙素溶液浸苗、處理愈傷組織和用含 %秋水仙素的羊毛脂涂抹單倍體植株的頂芽、腋芽，可得到能結(jié)實(shí)的二倍體植株。 ，可得到二倍體植株。 將單倍體植株（孢子體）的莖段、葉柄、根莖切下，置適宜的培養(yǎng)基上使之發(fā)生愈傷組織，反復(fù)繼代后再將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，即可獲得較多二倍體植株。 由于單倍體愈傷組織在培養(yǎng)過程中會(huì)有一定高 頻率的核內(nèi)有絲分裂，從而形成二倍體細(xì)胞，分化出純合的二倍體植株 。 第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù) ? 單倍體植物天然發(fā)生的途徑： 孤雌生 殖 孤雄生 殖 無配子生 殖 也稱單性生殖，即卵不經(jīng)過受精也能發(fā)育成正常的新個(gè)體 配子體可以不經(jīng)過配子的結(jié)合，而直接產(chǎn)生孢子體的，這種現(xiàn)象叫做無配子生殖 花藥和花粉培養(yǎng)基本流程： 預(yù)處理花藥（物理或生理逆境） 收集具胚性小孢子的花藥，或離心收集胚性小孢子 培養(yǎng)（充足的營養(yǎng)、合適的溫光、或條件培養(yǎng)）形成胚狀體 胚狀體轉(zhuǎn)移至固化培養(yǎng)基上”萌發(fā)”形成小植株。 選擇合適的供體植株（ F1？） 倍性鑒定或染色體加倍 花藥培養(yǎng)脫毒 ?1974年日本：花藥培養(yǎng)可以脫除草莓病毒； ?花藥采取時(shí)期 單核期：花蕾 46mm， 花藥 1mm ?花藥誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基 MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+蔗糖 30g+瓊脂 7g/L ?增殖分化培養(yǎng)基 MS+GA1mg/L++BA1mg/L+蔗糖 30g+瓊脂 7g/L ?生根培養(yǎng)基 1/2MS++活性炭 3g/L+蔗糖 20g+瓊脂 7g/L 第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù) 草莓花藥愈傷組織 ,再生植株 ,花藥植株 第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù) 孢子有大小兩型 ,其大形者稱為大孢子 胚囊細(xì)胞 embryo－ sac cell 是種子植物的大孢子，是由胚囊母細(xì)胞減數(shù)分裂形成的單倍的細(xì)胞，相當(dāng)于苔蘚植物和蕨類植物的大孢子 被子植物和裸子植物花藥內(nèi)的花粉四分體也稱為 小孢子 . 孢子是生物所產(chǎn)生的一種有繁殖或休眠作用的細(xì)胞 ， 能直接發(fā)育成新個(gè)體 。 孢子一般微小 ， 單細(xì)胞 。 由于它的性狀不同 ， 發(fā)生過程和結(jié)構(gòu)的差異而有種種名稱 。 生物通過無性生殖產(chǎn)生的孢子叫 “ 無性孢子 ” ， 如分生孢子 、 孢囊孢子 、 游動(dòng)孢子等； 通過有性生殖產(chǎn)生的孢子叫 “ 有性孢子 ” ， 如接合孢子 、 卵孢子 、 子囊孢子 、 擔(dān)孢子等； 直接由營養(yǎng)細(xì)胞通過細(xì)胞壁加厚和積貯養(yǎng)料而能抵抗不良環(huán)境條件的孢子叫 “ 厚垣孢子 ” 、 “ 休眠孢子 ” 等 。 (1)花藥培養(yǎng)是器官培養(yǎng)，花粉培養(yǎng)屬細(xì)胞培養(yǎng)。 (2)花藥培養(yǎng)一般選擇花粉的單核期進(jìn)行接種。 (3)花藥培養(yǎng)包括：選擇材料 消毒 接種培養(yǎng) 愈合組織生成 分化出單倍體植株。 (4)花粉的發(fā)育途徑包括：營養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育、生殖細(xì)胞發(fā)育、營養(yǎng)和生殖細(xì)胞同時(shí)發(fā)育及花粉均等分裂發(fā)育。 (5)花粉培養(yǎng)包括花粉的分離 預(yù)處理 培養(yǎng)過程。 第 5章 花藥和花粉培養(yǎng) 本章小結(jié)： 思考題 １、花藥培養(yǎng)的意義。 ２、花藥培養(yǎng)方法。 ３、花藥培養(yǎng)和花粉培養(yǎng)有何區(qū)別？ ４、花藥培養(yǎng)時(shí)選擇什么發(fā)育時(shí)期的花藥？為什么？ ５、花藥培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基配制有什么特點(diǎn)？ 第 5章 花藥和花粉培養(yǎng)
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