哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)ppt課件-資料下載頁
2025-05-12 07:21本頁面
【正文】 轉(zhuǎn)移 培養(yǎng) 單克隆 轉(zhuǎn)移 5 mM MTX mM MTX 培養(yǎng) 單克隆 外源基因擴(kuò)增至 100拷貝 哺乳動(dòng)物細(xì)胞高效表達(dá)外源蛋白的基本原理 通過強(qiáng)化基因擴(kuò)增高效表達(dá)外源基因 GSMSX高效表達(dá)系統(tǒng) 谷氨酰胺合成酶 （ GS） 能解除 甲硫氨酸亞砜 （ MSX） 對(duì)動(dòng)物細(xì) 胞的毒害作用。先將帶有 GS編碼基因 的載體轉(zhuǎn)入培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì) 中不必使用 GS缺陷型的受體細(xì)胞，而且在正常的 MSX濃度下就能篩 選到含有高拷貝外源基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞，這是 GSMSX系統(tǒng)比 DHFR 胞中，由于只有多拷貝的 GS編碼基因才能抗 MSX， 所以在轉(zhuǎn)染過程 MTX系統(tǒng)優(yōu)越之處。 哺乳動(dòng)物細(xì)胞高效表達(dá)外源蛋白的基本原理 通過強(qiáng)化基因轉(zhuǎn)錄高效表達(dá)外源基因 在載體上安裝病毒或細(xì)胞來源的強(qiáng)啟 Ap r M13 ori ColE1 ori CMVP Polylinker Gene Intron SV40 T PolyA signal 高效表達(dá)載體 mRNA前體 AAAAAAAAA mRNA 動(dòng)子以及有效的翻譯元件，也是使外源基 因高效表達(dá)的一種手段，如： 細(xì)胞巨化病毒 CMV的啟動(dòng)子 動(dòng)物珠蛋白基因的 內(nèi)含子 SV40的 終止子 和 polyA化 信號(hào)序列 絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的表達(dá)型載體 上攜帶內(nèi)含子結(jié)構(gòu)，因?yàn)?mRNA前體的剪 切能促進(jìn)成熟 mRNA向胞質(zhì)的運(yùn)輸，有利 于翻譯。有的還含有各種信號(hào)肽序列。 哺乳動(dòng)物細(xì)胞高效表達(dá)外源蛋白的基本原理 利用哺乳動(dòng)物工程細(xì)胞生產(chǎn)的重組蛋白 迄今為止，已有大約 300種重組蛋白藥物正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)，但 在哺乳動(dòng)物工程細(xì)胞中大規(guī)模生產(chǎn)的只有少數(shù)幾種： b 干擾素 g 干擾素 凝血因子 VIII 凝血因子 IX 促紅細(xì)胞生成素（ EPO） 生長(zhǎng)因子（ hGH） 白介素 2（ IL2） 乙型肝炎表面抗原 單克隆抗體 CD4受體 組織型纖溶酶原激活劑（ tPA） 利用哺乳動(dòng)物工程細(xì)胞生產(chǎn)人源化的小鼠抗體 大多數(shù)惡性淋巴 Neor 鼠金屬硫蛋白啟動(dòng)子 b 肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子 抗體輕鏈 cDNA b 肌動(dòng)蛋白終止子 pL dhfr SV40啟動(dòng)子 b 肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子 抗體重鏈 cDNA b 肌動(dòng)蛋白終止子 pH 瘤細(xì)胞表面上都 有一種特異性的 糖蛋白 campath 用人源化的小鼠 抗 campath抗體 治療非霍金淋巴 細(xì)胞瘤患者，效 果良好。重組抗 體采用 DHFRM TX系統(tǒng)表達(dá)。 利用哺乳動(dòng)物工程細(xì)胞生產(chǎn)人組織纖溶酶原激活劑 第一個(gè)由重組哺乳動(dòng)物 dhfr 啟動(dòng)子 人 tPA cDNA 終止子 細(xì)胞規(guī)模化生產(chǎn)的醫(yī)用蛋白 是治療急性心肌梗塞的溶血 栓藥物： 人組織纖溶酶原激 活劑 （ tPA）。 同樣采用 DHFRMTX系統(tǒng)表達(dá)，受體 細(xì)胞選用 CHO系統(tǒng)。目前， 用該工藝路線生產(chǎn)的重組人 tPA已經(jīng)商品化。 信號(hào)肽編碼序列 此外，人 tPA也可由重組大腸桿菌生產(chǎn)，但蛋白的重折疊效率低。 利用哺乳動(dòng)物工程細(xì)胞生產(chǎn)人凝血因子 VIII 凝血因子 VIII編碼基因的缺陷與血友病密切相關(guān)。多年來，血友病 病人都是使用從人血中分離純化的凝血因子 VIII生物制品進(jìn)行治療，然 而由于人的血源污染乙肝病毒或愛滋病病毒，數(shù)千名使用這種血液制 品的血友病人慘遭感染，其中 10%的病人最終死于愛滋病而非血友病。 早在上述情況發(fā)生之前，人凝血因子 VIII的 cDNA便已被克隆和鑒 定，血源的污染則加速了利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)該藥物的進(jìn)程。與 tPA 相似，人凝血因子 VIII也是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的大分子，必須通過重組哺乳 動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)，但目前商品化了的重組人凝血因子 VIII尚不能滿足幾代 血友病人的大量需求。
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1