基因敲除新技術(shù)ppt課件-資料下載頁
2025-05-12 03:01本頁面
【正文】 ISPRCas是很多細菌和大部分古生菌的天然免疫系統(tǒng)，通過對入侵的病毒和核酸進行 特異性 的識別，利用 Cas蛋白進行切割，從而達到對自身的免疫。 2 CRISPRCas系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn) 2 CRISPRCas系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn) 2 CRISPRCas系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn) CRISPRCas系統(tǒng)賦予原核細胞針對外源 DNA特異性免疫 , 而這種特異性是由間隔序列（ spacer）決定的。在宿主防御噬菌體攻擊中，針對自然界中龐大的噬菌體種群，細菌進化了 CRISPR 介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫。這種免疫功能的發(fā)揮是由 CRISPR 間隔序列的動態(tài)性變化，即通過增加或刪除間隔序列（ spacer）來實現(xiàn)的。 2 CRISPRCas系統(tǒng)靶向要求 最主要的要求： PAM（ protospaceradjacent motif）為 NGG。 2 CRISPRCas系統(tǒng)靶向要求 在人類基因組中，平均每 8bp就出現(xiàn)一個 NGG PAM。 2 CRISPRCas系統(tǒng)靶向要求 3 CRISPRCas系統(tǒng)介導(dǎo)基因修飾 dualRNA： Cas介導(dǎo)編輯模板替換 2022年 1月 29日在 《 nature biotechnology》 上發(fā)表的《 RNAguided editing of bacterial genomes using CRISPRCas systems》 一文中，作者利用 CRISPRCas系統(tǒng)用設(shè)計好的 DNA模板替換的相應(yīng)基因來達到基因的定向修飾。 dualRNA： Cas介導(dǎo)編輯模板替換 sgRNA： Cas介導(dǎo)基因修飾 2022年 1月 29日在 《 nature biotechnology》 上發(fā)表的《 efficient genome editing in zebra fish using a CRISPRCas system》 一文中，作者利用人工合成的 sgRNAs能指導(dǎo)Cas9內(nèi)源性核酸酶對斑馬魚胚胎基因進行修飾。 sgRNA： Cas介導(dǎo)基因修飾 sgRNA： Cas介導(dǎo)基因修飾 sgRNA： Cas介導(dǎo)基因修飾 Cas9 sgRNA 2022年 2月 15日在 《 science》 上發(fā)表的 《 Multiplex Genome Engineering Using CRISPR/Cas Systems》 一文中，作者利用一個包含兩個靶向不同基因的 spacers的crRNA實現(xiàn)了同時對兩個基因進行編輯。 crRNA： Cas介導(dǎo)雙基因修飾 crRNA： Cas介導(dǎo)雙基因修飾 4 CRISPRCas系統(tǒng)前景分析 這是一項靶向基因修飾的革新技術(shù)，一項極具有可能獲得諾貝爾獎技術(shù)。 4 CRISPRCas系統(tǒng)前景分析 2022年 4月 12日在 《 cell stem cell》 上發(fā)表的 《 Enhanced Efficiency of Human Pluripotent Stem Cell Genome Editing through Replacing TALENs with CRISPRs》 一文中，作者利用 TALENs和 CRISPRs對同一基因進行修飾，效率分別為0%34%和 51%79%。 4 CRISPRCas系統(tǒng)前景分析 而且從實際應(yīng)用的角度來說， CRISPRs比 TALENs更容易操作，因為每一對 TALENs都需要重新合成，而用于CRISPR的 gRNA只需要替換 20個核苷酸就行。 4 CRISPRCas系統(tǒng)前景分析 ?只需合成一個 sgRNA就能實現(xiàn)對基因的特異性修飾， Cas蛋白不具特異性。 ?編碼 sgRNA的序列不超過 100bp，因此比構(gòu)建 TALENs和ZFNs更簡單方便。 ?較短的 sgRNA序列也避免了超長、高度重復(fù)的 TALENs編碼載體帶來的并發(fā)癥。 技術(shù)優(yōu)勢
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