分子熒光分析法ppt課件-資料下載頁
2025-05-06 08:16本頁面
【正文】 定律率為常數，取決于熒光效0I IF熒光分析定量依據： 熒光強度 F與濃度 c 成線性關系。 第二節(jié) 熒光定量分析方法 58 F c 一般當 εb c ? 時 , F 與 c呈線性關系 高濃度 時，熒光物質發(fā)生 自熄滅 和 自吸收 現象， 使 F與 c不呈線性關系 F c 59 二、定量分析方法 1. 校正曲線法 2. 比例法 3. 聯(lián)立方程式法 60 標準曲線法 1） 確定 lex和 lem (激發(fā)光譜和發(fā)射光譜 )； 2）確定適宜的 條件 : 試劑濃度、 pH、 T、 t 等； 3）以標準溶液做 工作曲線 ； 4） 測未知樣 的熒光強度 (F), 根據工作曲線計算熒光物質的濃度 . 61 比例法：若標準曲線通過原點 ， 在線性范圍內可采用比例法 (只需 1個標準溶液 )；若標準曲線不通過原點 ， 則應扣除空白溶液的熒光強度后再計算： 聯(lián)立方程式法：多組分混合物的熒光分析 ssxxxsxsxss cFFFFcccFFFFcFFcFF????????????????000000062 第三節(jié) 熒光分光光度計及其他熒光分析技術 I0 It F 氙燈 (或高壓汞燈） （ 200800 nm) 光電倍增管 圖 117 熒光分光光度計示意圖 63 熒光儀部件 激發(fā)光源 : 能夠在紫外 可見光區(qū)連續(xù)發(fā)光 ， 常用 氙燈 、 高壓汞燈 或 激光光源 . 樣品池 : 石英池 , 四壁透明 . 單色器 : 兩個 光柵單色器 , 分置于樣品池前后 . 檢測器 : 光電池或 光電倍增管 , 與激發(fā)光 成直角的 方向 檢測熒光 . 64 熒光光度計光路圖 電源 光度計 記錄儀 光電倍增管 試樣液池 光源 65 儀器的校正 ? 靈敏度校正 ? 波長校正 ? 激發(fā)光譜和熒光光譜校正 66 二、其他熒光分析技術簡介（自學） ? 激光分析技術 ? 時間分辨熒光分析 ? 同步熒光分析 ? 膠束增敏熒光分析 67 熒光光度法的應用 生物化學分析，生理醫(yī)學研究，臨床檢測 . ? 直接測定能產生熒光的物質 . 帶苯環(huán)的氨基酸：色氨酸、酪氨酸、苯基丙氨酸 . ? 測定能與熒光試劑反應生成熒光化合物的物質 . 熒光生色團標記蛋白質，研究蛋白質的結構； 致癌物同核酸結合常引起顯著的熒光； 無機離子（ Mg2+、 Al3+、 Zn2+、 Be+等）可同試劑形成熒光絡合物。 ? 熒光熄滅法測定猝滅劑 Ni2+對 AlPAN絡合物有熒光猝滅作用，可測 Ni2+（ 6 105 ～ 6 103 ?gmL1） 68 舉例 — 痕量 3,4苯并芘的測定 : 苯并芘 萃取（環(huán)己酮或石油醚） → 濃縮 → 層析 → 以 H2SO4 溶解苯并芘 → 熒光分析 熒光測定： lex = 520 nm lem= 545 nm 69 復習 ? 分子熒光的發(fā)生過程 ? 激發(fā)光譜和發(fā)射光譜 ? 熒光光譜的特征 ? 分子結構與熒光的關系 ? 影響熒光強度的因素 ? 熒光定量分析方法。 70 課堂復習 (1) 下列敘述中正確的是 ( )。 a. 熒光光譜的形狀與激發(fā)波長無關。 b. 受激分子從激發(fā)態(tài)的各個振動能級返回至基態(tài)時所發(fā)出的光稱為熒光。 c. 熒光波長短于激發(fā)光波長。 d. 磷光波長短于熒光波長。 (2) 熒光分光光度法是屬于 :（ ） 。 。 。 。 (3) 從化合物的分子結構，推斷熒光最強的是 :（ ） b. 萘 c. 1氯萘 d. 蒽 (4) 熒光定量分析中，測定的是（ ） a. 拉曼光 b. 發(fā)射光 c. 瑞麗光 d. 磷光 a a d b 71 作業(yè) ： p225： 5
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