分子熒光分析法ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-06 08:16本頁(yè)面
【正文】 定律率為常數(shù)，取決于熒光效0I IF熒光分析定量依據(jù)： 熒光強(qiáng)度 F與濃度 c 成線(xiàn)性關(guān)系。 第二節(jié) 熒光定量分析方法 58 F c 一般當(dāng) εb c ? 時(shí) , F 與 c呈線(xiàn)性關(guān)系 高濃度 時(shí)，熒光物質(zhì)發(fā)生 自熄滅 和 自吸收 現(xiàn)象， 使 F與 c不呈線(xiàn)性關(guān)系 F c 59 二、定量分析方法 1. 校正曲線(xiàn)法 2. 比例法 3. 聯(lián)立方程式法 60 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法 1） 確定 lex和 lem (激發(fā)光譜和發(fā)射光譜 )； 2）確定適宜的 條件 : 試劑濃度、 pH、 T、 t 等； 3）以標(biāo)準(zhǔn)溶液做 工作曲線(xiàn) ； 4） 測(cè)未知樣 的熒光強(qiáng)度 (F), 根據(jù)工作曲線(xiàn)計(jì)算熒光物質(zhì)的濃度 . 61 比例法：若標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)通過(guò)原點(diǎn) ， 在線(xiàn)性范圍內(nèi)可采用比例法 (只需 1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液 )；若標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)不通過(guò)原點(diǎn) ， 則應(yīng)扣除空白溶液的熒光強(qiáng)度后再計(jì)算： 聯(lián)立方程式法：多組分混合物的熒光分析 ssxxxsxsxss cFFFFcccFFFFcFFcFF????????????????000000062 第三節(jié) 熒光分光光度計(jì)及其他熒光分析技術(shù) I0 It F 氙燈 (或高壓汞燈） （ 200800 nm) 光電倍增管 圖 117 熒光分光光度計(jì)示意圖 63 熒光儀部件 激發(fā)光源 : 能夠在紫外 可見(jiàn)光區(qū)連續(xù)發(fā)光 ， 常用 氙燈 、 高壓汞燈 或 激光光源 . 樣品池 : 石英池 , 四壁透明 . 單色器 : 兩個(gè) 光柵單色器 , 分置于樣品池前后 . 檢測(cè)器 : 光電池或 光電倍增管 , 與激發(fā)光 成直角的 方向 檢測(cè)熒光 . 64 熒光光度計(jì)光路圖 電源 光度計(jì) 記錄儀 光電倍增管 試樣液池 光源 65 儀器的校正 ? 靈敏度校正 ? 波長(zhǎng)校正 ? 激發(fā)光譜和熒光光譜校正 66 二、其他熒光分析技術(shù)簡(jiǎn)介（自學(xué)） ? 激光分析技術(shù) ? 時(shí)間分辨熒光分析 ? 同步熒光分析 ? 膠束增敏熒光分析 67 熒光光度法的應(yīng)用 生物化學(xué)分析，生理醫(yī)學(xué)研究，臨床檢測(cè) . ? 直接測(cè)定能產(chǎn)生熒光的物質(zhì) . 帶苯環(huán)的氨基酸：色氨酸、酪氨酸、苯基丙氨酸 . ? 測(cè)定能與熒光試劑反應(yīng)生成熒光化合物的物質(zhì) . 熒光生色團(tuán)標(biāo)記蛋白質(zhì)，研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)； 致癌物同核酸結(jié)合常引起顯著的熒光； 無(wú)機(jī)離子（ Mg2+、 Al3+、 Zn2+、 Be+等）可同試劑形成熒光絡(luò)合物。 ? 熒光熄滅法測(cè)定猝滅劑 Ni2+對(duì) AlPAN絡(luò)合物有熒光猝滅作用，可測(cè) Ni2+（ 6 105 ～ 6 103 ?gmL1） 68 舉例 — 痕量 3,4苯并芘的測(cè)定 : 苯并芘 萃?。ōh(huán)己酮或石油醚） → 濃縮 → 層析 → 以 H2SO4 溶解苯并芘 → 熒光分析 熒光測(cè)定： lex = 520 nm lem= 545 nm 69 復(fù)習(xí) ? 分子熒光的發(fā)生過(guò)程 ? 激發(fā)光譜和發(fā)射光譜 ? 熒光光譜的特征 ? 分子結(jié)構(gòu)與熒光的關(guān)系 ? 影響熒光強(qiáng)度的因素 ? 熒光定量分析方法。 70 課堂復(fù)習(xí) (1) 下列敘述中正確的是 ( )。 a. 熒光光譜的形狀與激發(fā)波長(zhǎng)無(wú)關(guān)。 b. 受激分子從激發(fā)態(tài)的各個(gè)振動(dòng)能級(jí)返回至基態(tài)時(shí)所發(fā)出的光稱(chēng)為熒光。 c. 熒光波長(zhǎng)短于激發(fā)光波長(zhǎng)。 d. 磷光波長(zhǎng)短于熒光波長(zhǎng)。 (2) 熒光分光光度法是屬于 :（ ） 。 。 。 。 (3) 從化合物的分子結(jié)構(gòu)，推斷熒光最強(qiáng)的是 :（ ） b. 萘 c. 1氯萘 d. 蒽 (4) 熒光定量分析中，測(cè)定的是（ ） a. 拉曼光 b. 發(fā)射光 c. 瑞麗光 d. 磷光 a a d b 71 作業(yè) ： p225： 5
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