遺傳毒性試驗(yàn)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-05 06:28本頁(yè)面
【正文】 可報(bào)告該受試物對(duì)鼠傷寒沙門氏菌為致突變陽(yáng)性 體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn) 試驗(yàn)原理 ? 在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下，使培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞暴露于受試物中。用中期分裂相阻斷劑（如秋水仙素或秋水仙胺）處理，使細(xì)胞停止在中期分裂相，隨后收獲細(xì)胞，制片，染色，分析染色體畸變。 試驗(yàn)流程 傳代細(xì)胞到六孔板 染毒 換液，繼續(xù)培養(yǎng) 秋水仙素處理，收細(xì)胞，制片 染毒 ? 樣品設(shè)計(jì)三個(gè)劑量， ? 染毒過(guò)程分加 S9混合物和不加 S9混合物 陰性 S1 陰性 S1 S2 S2 S3 S3 陽(yáng)性 陽(yáng)性 S9amp。+S9 S9陽(yáng)性對(duì)照為甲磺酸甲酯 +S9陽(yáng)性對(duì)照為環(huán)磷酰胺 秋水仙素處理，收細(xì)胞，制片 ? 消化細(xì)胞后加含血清培養(yǎng)液，以 1200 r/min離心 7min，棄上清。 ? 加入 ，于 37℃ 水浴低滲處理 7min，加入 2ml固定液，以1500r/min離心 5min~7min，棄去上清液。 ? 再加入 7ml固定液，固定 7min，以 1500r/min離心 7min，棄上清。同法再固定 1~2次，棄上清，加入數(shù)滴新鮮固定液自然干燥，用姬姆薩染液染色。 制片 秋水仙素處理 4h 消化細(xì)胞， 1200rpm離心 7min 低滲處理 7min后加固定液， 1500rpm，7min 加固定液 7ml， 7min后 1500rpm離心7min，重復(fù)兩次 滴片 吉姆薩染色 結(jié)論判斷 ? 在光學(xué)顯微鏡下每一試驗(yàn)組選擇 100個(gè)分散良好的中期分裂相進(jìn)行染色體畸變分析 ? 染色體結(jié)構(gòu)異常包括：裂隙、斷裂、微小體，單體互換等 ? 用 χ2 檢驗(yàn)或其他適當(dāng)?shù)娘@著性檢驗(yàn)方法，對(duì)所得試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。當(dāng)各劑量組與陰性 (溶劑 )對(duì)照組相比，畸變細(xì)胞率的增加有顯著性意義，并有劑量 反應(yīng)關(guān)系時(shí)； 或僅一個(gè)劑量組有顯著性意義的增加，并經(jīng)重復(fù)試驗(yàn)證實(shí)時(shí)，可判為該受試物在本試驗(yàn)中具有致突變性。 ? 當(dāng)畸變率 ≤%為陰性， %~%為可疑陽(yáng)性， 10%~%為 +， 20%~%為 ++，≥50%為 +++ 注意事項(xiàng) ：敵克松、疊氮鈉、 2蒽基芴、1,8二羥基蒽醌、多氯聯(lián)苯、甲磺酸甲酯 ，避免菌株的交叉污染 10min處理 擴(kuò)項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備和試劑 ? Ames實(shí)驗(yàn) 培養(yǎng)箱、水浴搖床、水浴箱、滅菌器、烘箱、普通冰箱、液氮灌、電子天平等 組氨酸、生物素、瓊脂粉、氯化鈉、檸檬酸、磷酸氫二鉀、磷酸氫氨鈉、硫酸鎂、葡萄糖、牛肉膏、胰胨、氯化鉀、氯化鎂、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、輔酶 6磷酸葡萄糖、氨芐青霉素、四環(huán)素、結(jié)晶紫、 ? 體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體 畸變 超凈工作臺(tái)、離心機(jī)、倒置顯微鏡等 甲磺酸甲酯、環(huán)磷酰胺、 DMSO、秋水仙素、氯化鉀、甲醇、冰醋酸、吉姆薩染料、甘油 謝謝！
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