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組織培養(yǎng)ppt課件-資料下載頁

2025-05-03 03:38本頁面
  

【正文】 的的不同而不同。一般液體培養(yǎng)的繼代時間短, 1周左右繼代 1次;固體培養(yǎng)繼代時間長些, 2~ 4周繼代 1次。 體細(xì)胞無性系變異 體細(xì)胞無性系變異( somaclonal variation)可能的原因: 從細(xì)胞水平上發(fā)現(xiàn),體細(xì)胞培養(yǎng)的植株染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,引起基因 重排,產(chǎn)生多倍體和非整倍體。染色體缺失、倒位、易位、斷裂等都是在細(xì)胞水平上導(dǎo)致無性系變異的重要因素; 從分子水平上推測,可能是由于遺傳物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化,引起了跳躍基因的出現(xiàn),基因重排、基因擴增或減少、 DNA排列順序發(fā)生變化等。 七、試管苗的馴化與移栽 試管苗生長的特點 1)試管苗的生態(tài)環(huán)境 組織培養(yǎng)中培育出來的苗通常稱試管苗或組培苗。由于試管苗長期生長在試管或三角瓶等培養(yǎng)器皿中,與外界環(huán)境隔離,形成了一個獨特的生態(tài)系統(tǒng)。這個生態(tài)系統(tǒng)與外界環(huán)境條件相比具有以下 4大差異,即高溫、高濕、弱光和無菌。 ( 1)高溫且恒溫 在植物試管苗整個生長過程中,通常均采用恒溫培養(yǎng),即使某一階段稍有變動,溫差也是極小的;并且在培養(yǎng)過程中,通常溫度控制在 25℃ 177。 2 ℃ ,有的植物需將溫度控制得更高;而外界環(huán)境條件,溫度處于不斷變化之中,溫度的調(diào)節(jié)完全是由自然界太陽輻射的日輻射量決定的,溫差很大,而且一般不會達到 25 ℃ 177。 2 ℃ 。 ( 2)高濕 植物組織培養(yǎng)中試管或培養(yǎng)瓶內(nèi)的水分移動有 2條途徑,一是試管苗吸收的水分,從葉面氣孔蒸騰;二是培養(yǎng)基向外蒸發(fā),而后水汽凝結(jié)又進入培養(yǎng)基。這種循環(huán)就是培養(yǎng)瓶內(nèi)的水分循環(huán),其循環(huán)的結(jié)果造成培養(yǎng)瓶內(nèi)空氣的相對濕度接近于 100%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于培養(yǎng)瓶外的空氣濕度,所以試管苗的蒸騰量極小。可見培養(yǎng)瓶內(nèi)的水分狀態(tài)直接影響著試管苗的生長和各種生理活性。 ( 3)弱光 組織培養(yǎng)中的光強與太陽光相比一般很弱,故幼苗一般生長也較弱,經(jīng)受不了太陽光的直接照射。 ( 4)無菌 試管苗所在環(huán)境的另一大特點是無菌。不僅培養(yǎng)基無菌,而且試管苗也無菌。在移栽過程中試管苗要經(jīng)歷由無菌向有菌的轉(zhuǎn)換。這一點若不注意,也會引起試管苗移栽過程中的死亡。另外,試管苗還處在一種特殊的氣體環(huán)境中。以上這些特點都決定了試管苗移栽前持的環(huán)境條件與移栽后的外界環(huán)境條件有極大的差異,只有有效地使試管苗適應(yīng)這種差異,才能使之移栽成活,因而這就需要試管苗有一定的馴化時期。 試管苗的特點 試管苗與常規(guī)苗相比具有如下 特點 : 第 1,試管苗生長細(xì)弱,莖、葉表面角質(zhì)層不發(fā)達; 第 2,試管苗莖、葉雖呈綠色,但葉綠體的光合作用功能較差; 第 3,試管苗的葉片氣孔數(shù)目少,活性差; 第 4,試管苗根的吸收功能弱。 試管苗的馴化 馴化的 目的 :在于提高試管苗對外界環(huán)境條件的適應(yīng)性,提高其光合作用的能力,促使試管苗健壯,最終達到提高試管苗的移栽成活率。 馴化的 原則 :應(yīng)從溫度、濕度、光照及有無菌態(tài)等環(huán)境要素進行,馴化開始數(shù)天內(nèi),應(yīng)和培養(yǎng)時的環(huán)境條件相似;馴化后期,則要與預(yù)計的栽培條件相似,從而達到逐步適應(yīng)的目的。 馴化的 方法 :馴化一般在試管苗移栽前進行,首先進行移栽前的馴化鍛煉即練苗,其具體方法是將長有完整試管苗的試管或三角瓶由培養(yǎng)室轉(zhuǎn)移到半遮蔭的自然光下進行鍛煉,在自然光下恢復(fù)植物體內(nèi)葉綠體的光合作用能力和健壯度,并打開瓶蓋注入少量自來水使幼苗逐漸降低溫度,轉(zhuǎn)向有菌,這樣幼苗周圍的環(huán)境就會逐步與自然環(huán)境相似。馴化一般進行 1~ 2周。 試管苗的移栽 試管苗的移栽往往和馴化同步。移栽的方法有:常規(guī)移栽法、直接移栽法和嫁接移栽法。 ( 1)常規(guī)移栽法 常規(guī)移栽法是指將試管苗在生長素濃度高的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根,當(dāng)獲得大量的不定根后,打開培養(yǎng)瓶注入少量自來水,在半遮光下馴化3d~ 5d,然后取出洗去培養(yǎng)基,移栽到無菌的混合土(如沙子:蛭石 =1: 1)中,保持一定的溫度和水分,當(dāng)長出 2~ 3片新葉時就可將其移栽到田間或盆缽的方法。 ( 2)直接移栽法 直接移栽法是指直接將試管苗移栽到盆缽的方法。 ( 3)嫁接移栽法 嫁接移栽法是指選取生長良好的同一植物的實生苗或幼苗作砧木,用試管苗作接穗進行嫁接的方法。 據(jù)王連清等人對棉花的試管苗進行嫁接移栽的有關(guān)試驗表明,試管苗的嫁接移栽法與常規(guī)移栽法相比具有許多優(yōu)點,其最主要的有以下幾點: 表 41 嫁接移栽法移栽棉花試管苗的效果 試管苗 種類 移栽方法 移栽 植株數(shù) 成活 植株數(shù) 成活率( %) 嫁接移栽法 35 33 壯苗 常規(guī)移栽法 50 24 直接移栽法 21 0 嫁接移栽法 30 21 弱苗 常規(guī)移栽法 27 2 直接移栽法 15 0 影響試管苗移栽成活率的因素 影響試管苗移栽成活率的因素有許多種,包括內(nèi)因與外因。不同的植物和不同的試管苗種類對移栽的具體要求是不同的。 總的來說,提高試管苗移栽成活率的途徑有以下幾種。 ( 1) 試管苗的生理狀況 ( 選擇壯苗 ) 試管苗的生理狀況是影響移栽成活率的內(nèi)在因素。同一種植物的試管苗,其壯苗比弱苗移栽后成活率高(如表 41)。 ( 2) 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì) 一般來說生長素因為能促進生根 , 故也能提高試管苗移栽的成活率 。 但是 , 不同的植物有其適宜的生長素種類 。 如在月季的試驗中發(fā)現(xiàn) , 以 NAA誘導(dǎo)生根和提高移栽成活率效果最好;而 IAA并不理想 ,當(dāng) IAA的濃度超過 1mg/L時 , 反而急劇降低移栽成活率 。 細(xì)胞分裂素一般會抑制根的生長 , 不利于移栽 。 如在月季的試驗中表明 , 無論是 BA或 2ip對生根和移栽都有抑制效應(yīng) , 即使在很低的濃度下也可發(fā)現(xiàn) 。 ( 3) 無機鹽濃度 試驗結(jié)果表明 , 降低無機鹽的濃度對植物生根效果較好 , 有利于移栽成功 。 ( 4)活性炭 在生根培養(yǎng)基中加入少許活性炭,對某些月季的嫩莖生根有良好作用,尤其是采用酸、堿和有機溶劑洗過的活性炭,效果更佳。但活性炭對有些月季品種的促根生長無反應(yīng)。 ( 5)環(huán)境因子 環(huán)境條件也影響試管苗移栽的效果,關(guān)鍵是控制好移栽前 10d的光、溫、濕。做好適當(dāng)遮蔭工作,避免太陽光直射,造成試管苗迅速失水而死亡。溫度一般保持在25℃ ~ 30 ℃ 為好。開始幾天最好用燒杯罩住移栽苗,使其周圍的相對濕度保持在 85%以上。 ( 6)移栽過程中讓試管苗從無菌向有菌逐漸過渡 試管苗出管后,要將其上面的培養(yǎng)基洗凈,以免雜菌滋長。對于移栽后成活比較困難的植物,第一次移栽時最好選用滅菌過的基質(zhì),以提高其移栽成活率。
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