豬鏈球菌的檢測ppt課件-資料下載頁
2025-05-01 12:12本頁面
【正文】 94℃ 預(yù)變性 5分鐘 。94℃ 、 30秒， 60℃ 、 30秒， 72℃ 、 30秒， 25個循環(huán)，最后延伸 72℃ 、 5分鐘。取 5微升擴(kuò)增產(chǎn)物在 ℅ 的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳。 ? 檢測過程中防止交叉污染的措施 ? 1）抽樣和制樣過程 抽樣和制樣工具，應(yīng)清洗干凈， 121℃ 、 15 min20 min滅菌，一套清潔工具限于一個樣品使用。存放樣品的容器應(yīng)該經(jīng)過清洗、滅菌，或為一次性滅菌容器。 ? 2)檢測過程 ? ① PCR實驗室應(yīng)分為樣品制備區(qū)、前 PCR區(qū)、 PCR區(qū)、后 PCR區(qū)。將模板提取、 PCR反應(yīng)液配制、 PCR循環(huán)擴(kuò)增及 PCR產(chǎn)物的鑒定等步驟分區(qū)或分室進(jìn)行。實驗室的運作應(yīng)從 “ 凈區(qū) ” 到 “ 臟區(qū) ” 單方向進(jìn)行。 ? ② 實驗過程中，應(yīng)穿實驗服和戴手套，手套要經(jīng)常更換。各區(qū)要有專用實驗服，經(jīng)常清洗。 ? ③ 各區(qū)所有的試劑、器材（尤其是移液器）、儀器都應(yīng)專用，不得帶出該區(qū)。 ? ④ 所有溶液、水、耗材和器具要 121℃ 、 15 min 20 min滅菌，避免核酸和（或）核酸酶污染。每種溶液應(yīng)使用高質(zhì)量的成分和新蒸餾的雙蒸水。在 20℃ 25℃ 貯存的試劑中，可加 %的疊氮鈉。所有試劑應(yīng)該以大體積配制，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。 ? ⑤ 裝有 DNA模板或引物的離心管打開之前，要簡短離心，離心管不能用力崩開，以免產(chǎn)生氣溶膠。 ? ⑥ 茼 PCR區(qū)中，最好能在 PCR操作箱中加入 PCR反應(yīng)各組分。 ? ⑦ 實驗前后，實驗室用紫外線消毒以破壞殘留的 DNA。 ? ⑧ 可使用 UDG和 dUTP系統(tǒng)控制污染。 ? ⑨ 檢測過程中的廢棄物，應(yīng)收集后高壓滅菌處理。 ? 符合以下特性者應(yīng)判為豬鏈球菌 2型； ? —— 豬鏈球菌 2型在 36℃ 培養(yǎng) 24 h后，在普通瓊脂綿羊血平板和選擇性普通瓊脂綿羊血平板上形成圓形、微凸、表面光滑、濕潤、邊緣整齊、半透明的菌落，直徑約 mmlmm，大多數(shù)菌株 呈 a溶血，部分菌株產(chǎn)生 p溶血； ? —— 革蘭氏陽性球菌，單個、成對或成鏈存在； ? —— 過氧化氫酶試驗陰性； ? —— 發(fā)酵 5%乳糖和海藻糖產(chǎn)酸，發(fā)酵七葉苷，不發(fā)酵甘露醇和山梨醇，不水解馬尿酸鈉（本試驗項目具有不確定性，鑒定時供參考），或法國生物一梅里埃公司 AP120 Strep生化鑒定系統(tǒng)鑒定為 豬鏈球菌 2型者； ? —— 與豬鏈球菌 2型陽性血清玻片凝集試驗陽性； ? —— 豬鏈球菌 2型定型 PCR檢測陽性。 ? 符合以下特性者的菌株可判定為致病性豬鏈球菌 2型菌株： ? —— 符合 6的特性； ‘ ? —— 主要毒力基因 (mrp、 ef、 orf sly)全部或之一 PCR檢測陽性。 七、鑒別診斷 ? 本病應(yīng)與其他可致發(fā)熱、瘀點、瘀斑、休克、多器官功能損害等表現(xiàn)的疾病相鑒別，尤其應(yīng)注意與下列疾病相鑒別： ? 1. 其他鏈球菌 TSS： A組鏈球菌以及所產(chǎn)生的鏈球菌致熱外毒素（ streptococcal pyrogenic exotoxins， SPE），如 SPEA、 SPEC、 SPEF等可導(dǎo)致嚴(yán)重 TSS， B組鏈球菌、 C組鏈球菌、 G組鏈球菌以及草綠色鏈球菌中的緩癥鏈球菌感染也均可引起 TSS。結(jié)合患者發(fā)病前 7天內(nèi)無病豬或死豬等家畜直接接觸史，可與人感染豬鏈球菌病相鑒別， PCR或免疫學(xué)方法檢測 SPEA等有助于診斷；感染部位標(biāo)本或血培養(yǎng)鑒定為 A組鏈球菌或其他鏈球菌即可鑒別。 ? 2. 葡萄球菌 TSS（ Staphy TSS）： 是由金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的中毒性休克綜合征毒素 Ⅰ （ TSSTⅠ ）和腸毒素引起、與人感染豬鏈球菌病臨床表現(xiàn)相似的 TSS，分為月經(jīng)相關(guān)性 TSS（ mTSS）和非月經(jīng)相關(guān)性 TSS（ nmTSS）兩種類型。年輕婦女、有陰道月經(jīng)塞使用史、月經(jīng)期突然發(fā)病等有助于 mTSS診斷； TSS繼發(fā)于局灶性感染、外傷、侵入性診療操作后，應(yīng)注意 nmTSS的可能性。臨床標(biāo)本培養(yǎng)分離出金黃色葡萄球菌，或特異性 TSSTI或腸毒素 A、 B、 C、 D、G等陽性結(jié)果即可鑒別。 ? 3. 其他疾病：還應(yīng)注意與其他革蘭陽性細(xì)菌敗血癥、感染性休克（ septic shock）、爆發(fā)型流行性腦脊髓膜炎、腎綜合征出血熱（ HFRS）及全身炎癥反應(yīng)綜合征（ SIRS）等疾病相鑒別。后期應(yīng)注意排除其他嚴(yán)重感染所致的多器官功能損害綜合征（ MODS）或多器官功能衰竭（ MOF）。
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