【正文】 鐵試劑萃取金屬離子時萃取常數(shù)順序： Mo(Ⅵ ） 、 Fe（ Ⅲ ） 、 Ga（ Ⅲ ） 、 Cu（ Ⅱ ） 、 In（ Ⅲ ） 、 Al（ Ⅲ ） ， 如果用銅鐵試劑的銅鹽作萃取劑 ， 則 In（ Ⅲ ） 和 Al（ Ⅲ ） 不被萃取 ， 而 Mo(Ⅵ ） 、 Fe（ Ⅲ ） 、 Ga（ Ⅲ ）可取代 Cu（ Ⅱ ） 進(jìn)入有機(jī)相 。 ? 配體之間的交換萃取：如測定痕量銻時 ， 先用苯萃取結(jié)晶紫和氯銻酸締合物 ， 然后用羅丹明 6G交換締合物中的結(jié)晶紫 。 （３）萃取色譜 萃取色譜是將溶劑萃取的選擇性和色譜分離的高效能相結(jié)合的一種富集分離技術(shù) 。 如無機(jī)萃取色譜是將有機(jī)萃取劑或絡(luò)合劑等吸附在惰性載體上 ，以無機(jī)物質(zhì)如酸 、 堿 、 鹽等溶液為流動相 ， 用于分離無機(jī)物質(zhì)的一種色譜法 。 如把 TBP涂在硅膠柱上 ， 以 HNO3H2O作流動相分離 Zr和 Nb。 萃取色譜有兩種形式：表面涂敷固定相和萃淋樹脂 (將萃取劑鍵合到惰性支撐體上 )。 （４）反膠團(tuán)萃取 反膠團(tuán)的特性 反膠團(tuán)是表面活性劑在非極性有機(jī)相中的濃度超過臨界膠團(tuán)濃度時，它會形成一種納米尺度的聚集體。 反膠團(tuán)萃取機(jī)理 萃取過程中，水相中的溶質(zhì)進(jìn)入反膠團(tuán)相需經(jīng)歷三步傳質(zhì)過程： ① 通過表面液膜擴(kuò)散，從水相到達(dá)相界面； ② 在相界面處溶質(zhì)進(jìn)入反膠團(tuán)； ③ 含溶質(zhì)的反膠團(tuán)擴(kuò)散進(jìn)入有機(jī)相。 反萃操作中溶質(zhì)亦經(jīng)歷相似的過程，只是方向相反，在界面處溶質(zhì)從反膠團(tuán)釋放出來。 反膠團(tuán)萃取機(jī)理 萃取過程 反萃過程 )( 00 mccKdtdcAVdtdcAVJ wfw ?????)39。( w00w cmcKdtdcAVdtdcAVJ r ?????tVAKcc )(ln f0ww ??tVAKcc ???????????????? ?r00w1ln反膠團(tuán)萃取蛋白質(zhì)的主要影響因素 表 4 5 反膠團(tuán)萃取蛋白質(zhì)的主要影響因素 膠團(tuán)、蛋白質(zhì)間相互作用 類型 與反膠團(tuán)相關(guān)因素 與水相相關(guān)因素 與目標(biāo)蛋白質(zhì)相關(guān)因素 靜電性作用 膠團(tuán)內(nèi)雙重電荷層 pH 、離子強(qiáng)度 等電點(diǎn) pI 、表面 電 荷分布 立體性相互作用 膠團(tuán)尺度、含水率、表面活性劑濃度 分子大小 疏水性相互作用 溶劑、膠團(tuán)疏水基 親水疏水性殘基 特異性相互作用 親 和配體 構(gòu)象 反膠團(tuán)萃取的應(yīng)用 ? （ 1）分離蛋白質(zhì)混合物； ? （ 2） 濃縮 α淀粉酶； ? （ 3） 從發(fā)酵液中提取胞外酶 ； ? （ 4） 直接提取胞內(nèi)酶； ? （ 5） 用于蛋白質(zhì)復(fù)性 。 案例 通過調(diào)節(jié)水相 pH值和 KCl濃度來實(shí)現(xiàn)三種蛋白質(zhì)的分離。在 pH=9時，核糖核酸酶的溶解度很小，保留在水相而與其他兩種蛋白質(zhì)分離；相分離后得到的反膠團(tuán)相（含細(xì)胞色素 C和溶菌酶）與 mol/dm3的 KCl水溶液接觸后，細(xì)胞色素 C被反萃取到水相，而溶菌酶留在反膠團(tuán)相；含溶菌酶的反膠團(tuán)與 mol/dm3KCl， pH值為 ，將溶菌酶反萃至水相中。 雙水相萃?。?aqueous twophase extraction）是利用物質(zhì)在互不相溶的兩水相間分配系數(shù)的差異來實(shí)現(xiàn)分離的一新型分離技術(shù)。由于它具有收率高、成本低、可連續(xù)化操作等技術(shù)優(yōu)勢，因而已被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和生物化工等領(lǐng)域，進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，蛋白質(zhì)、核酸等產(chǎn)品的分離純化。用此方法提純的酶已達(dá)數(shù)十種，其分離也達(dá)到了相當(dāng)規(guī)模。近年來又進(jìn)行了雙水相萃取氨基酸類和病毒小分子物質(zhì)的研究，大大擴(kuò)展了應(yīng)用范疇并提高了選擇性，使雙水相萃取技術(shù)具有更大的潛力和美好的發(fā)展前景。 （５） 雙水相萃取 雙水相體系 物質(zhì)類型 物質(zhì) P的名稱 物質(zhì) Q的名稱 兩種非離子型聚合物 聚丙二醇 聚乙二醇 聚乙烯醇 葡萄糖（ Dex） 羥丙基葡萄糖 聚乙二醇（ PEG） 聚乙烯醇 葡萄糖 (Dex) 聚乙烯吡咯烷酮 P為帶電荷聚電解質(zhì) 硫酸葡聚糖鈉鹽 羧甲基葡聚糖鈉鹽 聚丙二醇、聚乙二醇 甲基纖維素 P、 Q都為聚電解質(zhì) 羧甲基葡聚糖鈉鹽 羧甲基纖維素鈉鹽 P為聚合物 Q為鹽類 聚乙二醇 磷酸鉀、硫酸銨、硫酸鈉 硫酸鎂、酒石酸鉀鈉 圖中把均相區(qū)與兩相區(qū)分開的曲線，稱為雙節(jié)點(diǎn)曲線。如果體系總組成位于雙節(jié)點(diǎn)曲線下方的區(qū)域，兩高聚物均勻溶于水中而不分相。如果體系總組成位于雙節(jié)點(diǎn)曲線上方的區(qū)域，體系就會形成兩相。上相富集了高聚物 Q，下相富集了高聚物 P。用 A點(diǎn)代表體系總組成， B點(diǎn)和 C點(diǎn)分別代表互相平衡的上相和下相組成，稱為節(jié)點(diǎn)。 A、 B、 C三點(diǎn)在一條直線上，稱為系線。 雙水相中溶質(zhì)分配理論 溶質(zhì)在雙水相中的分配性質(zhì)可用分配系數(shù) K表示，計(jì)算方法如下： BTccK ? 溶質(zhì)在雙水相中的分配受表面自由能、表面電荷、疏水作用及生物親和作用等因素的影響，其中表面自由能、表面電荷對分配行為的影響最為重要，因而對這兩方面的理論研究也比較深入。溶質(zhì)分配的理論研究對雙水相萃取起到指導(dǎo)作用，使萃取過程可通過控制相關(guān)的影響因素而得到優(yōu)化。 A 表面自由能的影響 kTEK /ln △??kTrK )(4ln 2SS12 ??? ???kTAK )(ln 2S1S ?? ???kTMK ?rln ? 因?yàn)榇蠓肿游镔|(zhì)的 Mr很大， λ的微小改變會引起分配系數(shù) K發(fā)生很大的改變，因此利用不同的表面性質(zhì)，可以達(dá)到分離大分子的目的。 B 表面電荷的影響 ???? ???? ZZKKFZZRTUUΨAB12 ln)(RTF ΨZKK ii*i lnln ??C 疏水作用 兩相系統(tǒng)中如有鹽存在，會對大分子在兩相間的分配系數(shù)發(fā)生改變 在 pH值為等電點(diǎn)的雙水相中，蛋白質(zhì)主要根據(jù)表面疏水性的差異產(chǎn)生各自的分配平衡。 雙水相萃取的應(yīng)用 ? 產(chǎn)品的濃縮 ? 蛋白質(zhì)的提取和純化 ? 生物小分子的分離和純化 ? 中草藥有效成分的提取 ? 生物活性物質(zhì)的分析檢測 案例 從細(xì)胞漿液中提取蛋白質(zhì)時，蛋白質(zhì)均分配于上相，而細(xì)胞或細(xì)胞碎片分配于下相。在大多數(shù)情況下分配系數(shù)大于 3，很多雜蛋白也和細(xì)胞同時除去。實(shí)際操作中多數(shù)采用 PEG—鹽體系，主要是因?yàn)檫@種體系物理特性較好．易于相分離，而且價格也低。 細(xì)胞漿液的加入量是一個重要參數(shù)。大量細(xì)胞或細(xì)胞碎片的存在使體系兩相的粘度，特別是下相的粘度大大增高，上、下相體積比降低．從而影響蛋白質(zhì)的收率。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，一般 1kg萃取體系中加入 200～ 400g濕細(xì)胞為宜。 從細(xì)胞漿液中提取到的蛋白質(zhì)還需要進(jìn)一步純化。通?？赏ㄟ^多步雙水相萃取來達(dá)到純化的目的。第一步萃取后，分布于上相的蛋白質(zhì)可通過加入適量的鹽 (有時也可同時加入少量的 PEG)進(jìn)行第二次萃取。通常第二次萃取的目的是除去核酸和多糖，它們的親水性強(qiáng)，因而易分配于鹽相中，而蛋白質(zhì)留在 PEG相中。第三步萃取的目的是使目的蛋白分配于鹽相，使其與 PEG分離，以便進(jìn)一步純化蛋白和回收 PEG并循環(huán)使用。