電鏡冷凍制樣技術(shù)newb-資料下載頁
2025-05-01 07:53本頁面
【正文】 生物電子顯微技術(shù) (五）、冷凍固定 ： 1－ 2S，達－ 196℃ 液氦－ 273 ℃ （中間冷媒法） （液態(tài)丙烷） 生物電子顯微技術(shù) ： 銅塊 → 液氮中 → 銅塊接觸樣 → 樣預冷 → 樣入液 N 雙丙烷噴氣式冷凍機 RMC MF7200 高壓冷凍機 Leica／ Reichert 樣品夾放入高壓腔中，注入液氮，加壓冷凍。高壓下 2100標大氣壓下，水的凝聚點降到－ 22 ℃ ，形成冰晶和冰晶生長的速度降低，為組織深層冷凍提供了時間?？梢岳鋬鲋睆綖?1mm左右的樣品，如真菌芽孢。 生物電子顯微技術(shù) 生物電子顯微技術(shù) (六 )、切片和撈片 1. 切片時溫度的控制與選擇 ⑴選擇切片時樣品的溫度 生物樣品 T35℃ ,冰晶損傷小 ⑵ 細胞內(nèi)小分子物質(zhì)和小元素固定下 來 ,T80℃ ⑶ 形成玻璃無定形水溶液混合相 ,始 終 T140 ℃ , （ 若 T＞ 140 ℃ 則樣品中無 定形固體化的水份發(fā)生變形，而且變形不可 逆。） 生物電子顯微技術(shù) ⑷ 刀溫比樣品溫度高 10～ 20℃ ⑸ 根據(jù)研究的目的選擇樣品的溫度 生物電子顯微技術(shù) 2. 切片的速度和厚度 樣品溫度 60℃ ～ 80℃ 切速： 厚度： 70～ 100nm 3. 刀的選擇 : (玻璃刀，鉆石刀 ) 注意： (1) 切片之前冷卻刀 (2) 鉆石刀反復使用后需要調(diào)整 (3) 玻璃刀口上噴鎢，增加其鋒利性 (4) 鉆石刀使用后需認真清洗，防止腐蝕 (5) 使用玻刀時，用鋁鉑膠條做水槽，冷的 硅膠密封 生物電子顯微技術(shù) ◆切片機修塊法 ◆預修塊法 : (關(guān)鍵：穩(wěn)定溫度） ◆濕刀法：低溫下， DMSO做槽液 ◆干刀法：無槽液，刀角 50～ 70176。 生物電子顯微技術(shù) 撈片 (切片收集 )： A 干刀法切片的收集 (1)液滴法：玻棒粘液 → 粘切片 → 在 銅網(wǎng)上展片 → 洗去糖液 (2)直接撥取法：撥片到冷銅網(wǎng)上 → 鏡面壓平 （此過程維持樣品低 溫，在超切機的冷凍樣品室進行） B 濕刀法切片的收集 (1)用預冷的有膜銅網(wǎng)撈片 (2)塑料環(huán)套法： 生物電子顯微技術(shù) 生物電子顯微技術(shù) （七）、 冷凍干燥 優(yōu)點：消除表面張力，避免有機溶 劑對細胞質(zhì)的抽提 缺點：低溫 (80℃ ）真空需幾天或幾十小時 （八）、染色 冷切多用負染色 %1%磷鎢酸， ,染色 1－ 15s %3%醋酸雙氧鈾， ,染色 1－ 15s 負染色：方法簡單，分辨率高、 染色時間短，有利于保存結(jié)構(gòu) 正染色：適于免疫電鏡、細胞化學 （九）、觀察 生物電子顯微技術(shù) 三、冷切總結(jié) ： 取材 → （ 醛類固定 → 預包封） → 冷凍 保護 → 冷凍固定 → 冷凍超切 直接冷凍觀察 → 冷凍干燥 → 染色 → 常溫觀察 低溫 Xray微區(qū)分析 免疫細胞學 生物電子顯微技術(shù) 生物電子顯微技術(shù) 第四節(jié) 冷凍其他相關(guān)技術(shù) 避免化學試劑的固定和脫水 將冰或固體脫水劑直接升華為氣體 (1)低溫下，用有機溶劑取代生物 中的冰，速度相當緩慢 (2)升華固態(tài)的有機溶劑 生物電子顯微技術(shù) 第五節(jié) 凍安全規(guī)則 四防： 防凍傷 防窒息 防爆炸 防燃燒 生物電子顯微技術(shù) 作業(yè) ：冷凍蝕刻、冰晶損傷、冷凍保護、金屬投影技術(shù)、復型技術(shù) 、復型的方法有哪些？ ?怎樣排除？（冰晶損傷的原因，如何防止冰晶損傷？ ) ，與普切比較，其優(yōu) 點是什么？簡述冷凍超切的一般操作步驟。 ？常用的冷凍保護劑及保護方法？ ？它的主要步 驟及優(yōu)缺點是什么？ ？如何命名？ ？ 生物電子顯微技術(shù) 大鼠肝細胞冷凍蝕刻照片 生物電子顯微技術(shù) 分離的人沙眼支原體 生物電子顯微技術(shù) 小鼠肝細胞冰凍蝕刻照片 生物電子顯微技術(shù) 洋蔥的根細胞 生物電子顯微技術(shù) 人肺 II型板層體冷凍蝕刻照片 生物電子顯微技術(shù) 冷杉木材管胞紋孔及微纖
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