【正文】 的設定 參比溶液的類型 第五節(jié) 紫外～可見吸收光譜法的應用 一、 定性分析 二、 定量分析 三、定量分析結果的評價 進行定性分析時 ， 通常是根據吸收光譜的形狀 、吸收峰的數(shù)目以及最大吸收波長的位置和相應的摩爾吸收系數(shù)等進行定性鑒定 。 一般采用比較光譜法 ， 在相同的測定條件下 ，比較待測物與已知標準物的吸收光譜曲線 ， 如果它們的吸收光譜曲線完全等同 (λ max及相應的 κ值均相同 )， 則可以認為是同一種物質 。 因為紫外可見光吸收光譜包含的信息量較少 ，在定性分析中受到一定限制 。 一、 定性分析 定量分析是紫外可見分光光度計最經常使用的功能之一 。 既可用于常量分析 、 也可用于微量分析 ， 還可用于多組分混合物的分析 。 定量分析的理論依據是朗伯－比耳定律 ，即：物質在一定波長處的吸光度與它的濃度呈線性關系 。 二、 定量分析 在紫外～可見光區(qū)有吸收的物質 ， 可直接測定 ， 測定的靈敏度受樣品摩爾吸光系數(shù)的限制 。 用來使被測物質顯色 、 生成有色化合物的試劑稱為顯色劑 。 對顯色劑的要求： 靈敏度高 (與待測物的反應產物有足夠大的摩爾吸光系數(shù) )、 穩(wěn)定性好 、選擇性好 (只與待測物或其他少數(shù)化合物起顯色反應 )。 顯色劑是通過與被測物質發(fā)生氧化還原反應或生成二元或多元絡合物而顯色 。 （一）、單組分物質的定量分析 定量分析方法 ： 利用間接的方法測定待測物質 。 如蛋白質測定的染料結合法：利用酸性橙等某些偶氮染料可與蛋白質分子中堿性氨基酸發(fā)生等當量的反應而沉淀 ， 使染料濃度降低；通過測定染料濃度的變化 ， 間接測定蛋白質中堿性氨基酸含量和蛋白質總含量 。 定量分析方法 間接測定法： （一）、單組分物質的定量分析 根據比耳定律 ， 只要知道樣品中待測組分的摩爾吸光系數(shù) k， 就可通過測得樣品的吸光度 A，由比耳定律公式 A=kbc 算出其濃度 。 如用 Arnon公式測定葉綠素 a、 b的含量就屬于此方法 。 公式計算法屬于絕對測量 ， 因此分析測定吸光度 A的條件應當與公式要求的條件一致 ， 儀器的性能如波長精度 、 單色器帶寬 、 雜散光等對測量的準確度有直接影響 。 計算法： 定量分析方法 （一）、單組分物質的定量分析 為了減少測量條件對計算法的影響 ， 可用已知濃度 Cs的溶液作為標準溶液 ， 在同樣測量條件下 (同一臺儀器 、 同一波長與光程 L等 )與待測物濃度 Cx同時測量其標準液吸光度 As與待測樣品 Ax，根據公式： Cx＝ Cs(Ax/As) 求出待測組分濃度 。 應注意標準溶液的濃度 Cs與樣品溶液的濃度Cx應較為接近。 定量分析方法 比較法： （一）、單組分物質的定量分析 標準曲線法和工作曲線法是用數(shù)學方程或曲線的形式 ， 建立待測組分的濃度與吸光度間的關系 。 是計算法的一種 ， 可以降低測量條件的差異給測定帶來的誤差 。 定量分析方法 標準曲線法和工作曲線法 ： （一）、單組分物質的定量分析 配制一系列不同濃度的被測成分的標準溶液 ，然后在一定測量條件下 ， 分別測出它們的吸光度 A，建立 A與濃度 c的回歸方程或繪制標準曲線；在相同條件下測出待測樣品的吸光度 ， 通過回歸方程或標準曲線算出的待測物的濃度 。 當試劑和工作條件 、 環(huán)境條件變化時 ， 標準曲線應重新測定；標準樣品的最高和最低濃度大體應相差一個數(shù)量級 ， 之間至少應當均勻分布三種濃度 。 標準曲線法 定量分析方法 樣品處理過程 (如分離 、 顯色等 )會造成測定過程的系統(tǒng)誤差 ， 為了消除這些誤差 ， 可以按照樣品處理過程的步驟和條件 ，測定標準樣品的吸光度隨濃度變化的曲線(或回歸方程 )， 稱為工作曲線 。 定量分析方法 工作曲線法： 是標準曲線法的一種。 （一）、單組分物質的定量分析 定量分析方法 （二）、多組分物質的定量分析 根據吸光度的加和性原理 ， 含兩種或兩種以上吸光組分的混合物 ， 也可不經過分離而直接測定 。 根據吸收峰的重疊情況可分成四種情況： A B A B A B A B λ1 λ2 λ1 λ2 λ1 λ2 λ1 λ2 定量分析方法 A B A B A B A B λ1 λ2 λ1 λ2 λ1 λ2 λ1 λ2 第一種 ， A、 B在 λ λ2處相互不干擾 ， 同單組分測定 。 第二種 ， A在 λ2處無吸收 ， 不干擾 B的測定 ， B的測定同單組分測定 。 但 B影響 A的測定 。 第三種 ， A、 B在 λ λ2處相互干擾 ， 需用雙波長法 ， 找等吸收點 ， 通過差減得到單組分的吸收值 ， 來測定 。 第四種 ， A、 B的吸收光譜完全重疊 ， 無法直接測定 ，需通過專用的 導數(shù)光譜法 來進行測定 。 評價分光光度法定量分析的常用參數(shù)是 靈敏度 、 檢測限 、 測定結果的精確度與準確度 、 測定的線性范圍與回收率 等 。 檢測限 是指某一成分用某一種方法測定時 ，最低可以檢測出來的含量或濃度 ， 常用相當于三倍噪聲測量值所對應的待測物含量或濃度來表示 。 檢測限與儀器的噪聲有關 ， 儀器及其使用條件 ， 如分析波長 、 狹縫等對檢測限有一定影響 。 三、定量分析結果的評價 準確度： 指測定值和真值之間相符合的程度，用測定的誤差來表示。 測定結果的絕對誤差是指測定值和真實值之差；相對誤差是指絕對誤差和真值的比值。在一般情況下真值是不知道的，因此誤差難以計算。 準確度一般通過測定回收率進行評價?；厥章手冈诜治鰳悠分屑尤胍欢康拇郎y成分，然后按照分析方法規(guī)定的流程，測定并計算加入待測成分的量，其測定值與實際加入量之比就是回收率。 測定結果的準確度 精確度： 對同一樣品多次重復測定值之間相符合的程度 。 常用測定值的標準差 σ來表示 。 標準差表示測定結果離散度的絕對值 ， 其單位與測定值的單位相同 ， 因此標準差的大小與測定結果所用的單位有關 。 相對標準差是指標準差與測定值的真值或多次測定結果的平均值之比 ， 表示測定結果離散度的相對值 ， 與測定值所用的單位無關 。 測定結果的精確度