氨基酸的結構及性質-資料下載頁
2025-04-29 12:54本頁面
【正文】 出 ?為 α NH2的反應 ?用于 N末端分析，又稱 Edman降解法 ? Edman （苯異硫氰酸酯法） 氨基酸順序分析法實際上也是一種 N端分析法。此法的特點是能夠不斷重復循環(huán)，將肽鏈 N端氨基酸殘基逐一進行標記和解離。 ? 肽鏈（ N端氨基酸）與 PITC偶聯(lián)，生成 PTC肽 ? 環(huán)化斷裂：最靠近 PTC基的肽鍵斷裂，生成 PTC氨基酸和少一殘基的肽鏈，同時 PTC氨基酸環(huán)化生成PTH氨基酸 ? 分離 PTH氨基酸 ? 層析法鑒定 ? Edman降解法的改進方法 DNSEdman降解法 ?用 DNS(二甲基萘磺酰氯 )測定 N端氨基酸 ? 原理 DNFB法相同 ? 但水解后的 DNS氨基酸不需分離，可直接用電泳或層析法鑒定 ? 由于 DNS有強烈熒光，靈敏度比 DNFB法高 100倍，比 Edman法高幾到十幾倍 ? 可用于微量氨基酸的定量 第三節(jié) 氨基酸的分離與純化技術 一、電泳 舉例： Glu、 Leu 、 His 、 Lys 4種氨基酸的混合樣品，在，泳動方向及相對速度。 Glu Leu His Lys pI 二、層析 層析即色層分析又稱色譜 (chromatograph) 固定相 (stationary phase) 流動相 (mobile phase) 1891年 Nerst提出分配定律，即：當一種溶質 在兩種互不相溶的溶劑中分配時，在一定溫度下 達到平衡后，溶質在兩相中的濃度比為一常數(shù)稱 為 分配系數(shù) (Kd) 。 物質分配不僅在互不相溶的兩液相間分配， 也 可以在固相 液相間或在氣相 液相間分配層析系統(tǒng)中的靜相可以是固相、液相或固 液相混合相（半液體）；流動相可以是液相或氣相，它充滿于固定相的空隙中，并能流過固定相。 有效分配系數(shù) Keff Keff = 某一物質在 流動相中 的總量 某一物質在 固定相中 的總量 根據層析的分離原理分類： 吸附層析法 分配層析法 離子交換層析法 凝膠層析法（排阻層析法） 親和層析法 疏水層析法 根據層析的操作方式分類： 柱層析法 薄層層析法 紙層析法 薄膜層析法 高效液相層析法（ HPLC） 柱層析 －－分配層析 可以同檢測器、記錄儀、餾分收集器、輸液泵構成層析系統(tǒng)。 薄層層析 －－ 吸附層析 分辨率高、所需樣品量微、層析速度快 薄層層析介質 —— 纖維素粉、硅膠和氧化鋁粉 蓋子 層析缸 層析板 溶劑 紙層析 －－分配層析 Rf主要與 R基的極性有關，溶劑的pH可影響 R基的極性，氨基酸與濾紙的吸附作用也影響 Rf。 紙層析中的 Rf值 Rf= X Y 溶劑前沿 氨基酸顯色點 濾紙 原點 離子交換層析－－一種用離子交換樹脂作支持 劑的層析方法 4 氨基酸的離子交換分離原理 若 pIpH ，兩性離子帶凈正電荷，若 pI pH ，兩性離子帶凈負電荷。差值越大，所帶的凈電荷越多。 用氨基酸自動分析儀分析氨基酸混合物的洗脫曲線（陽離子交換劑）。 洗脫的先后順序取決于氨基酸的所帶電荷與離子交換樹脂的靜電吸引和疏水相互作用兩者的綜合作用的結果。
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