【導(dǎo)讀】炎、宮頸炎和直腸炎等。如不及時(shí)治療，淋球菌可侵入泌尿生殖器的其他部位，部位，形成淋菌性關(guān)節(jié)炎、腱鞘炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎等合并癥。也有5%-20%的男性和60%的女性病人呈現(xiàn)無癥狀經(jīng)過。生殖道的柱狀上皮細(xì)胞，憑借特異的結(jié)構(gòu)和粘膜表面與之相匹配的部位粘附。而侵入細(xì)胞內(nèi)增殖，使粘膜上皮破壞，形成炎癥，出現(xiàn)一系列癥狀。人類尿道上皮尤其是柱狀上皮細(xì)胞對淋球菌相當(dāng)敏感。在感染淋球菌后，經(jīng)。由于細(xì)菌和毒素的作用，粘膜壞死、脫落、淋球菌感染男性病人，常會出現(xiàn)尿痛和尿道流膿等臨床癥狀。淋球菌感染的女病人，常僅有膿性宮頸分泌物或無癥狀。標(biāo)本經(jīng)培養(yǎng)后，菌。檢查淋菌性咽炎時(shí)。在醫(yī)院門診部，從病人取材后，應(yīng)立即接種到培養(yǎng)基上進(jìn)行。如需時(shí)再應(yīng)使用生長運(yùn)送培養(yǎng)基，但即便如此，也不應(yīng)超過2天。淋球菌革蘭染色呈陰性反應(yīng)，具有特殊的菌體形態(tài)。淋球菌為革蘭陰性，呈卵圓形或圓形，常成。淋球菌對外環(huán)境變化頗為敏感，對寒冷和干燥抵抗力很弱。

　　

【正文】 2 頁 共 111 頁 藍(lán)綠色蟲體，大小約 10~30181。m 5~15181。m ，稍大于白細(xì)胞。蟲體借助于鞭毛和波動(dòng)膜作螺旋式跳動(dòng)，運(yùn)動(dòng)活潑。有時(shí)亦可見到保護(hù)形的滋養(yǎng)體，其形態(tài)為外圍細(xì)胞質(zhì)增厚，細(xì)胞質(zhì)呈均勻，光潤，透明。 【注意事項(xiàng)】 1．女性取材時(shí)所用窺陰器，只能用少量無菌等滲鹽水濕潤，不可用潤滑劑，因?yàn)橐恍櫥瑒﹃幍烂蜗x的活動(dòng)有影響。 2．從取 材到觀察的時(shí)間間隔越短越好，否則易影響滴蟲的活動(dòng)性或蟲體受到破壞使檢查結(jié)果受到影響。 3．注意標(biāo)本的保溫，尤其冬季氣溫較低，影響陰道毛滴蟲的活力。 【臨床意義】 滴蟲檢查陽性，結(jié)合臨床表現(xiàn)，即可做出初步診斷，應(yīng)及時(shí)治療。此法簡便、快速，是門診的常規(guī)檢查方法。 涂片染色法 【原理】 分泌物涂片作染色檢查，可以清楚地看到蟲體形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)，還能觀察到陰道的微生物相、清潔度和細(xì)胞組織相。 【材料】 同濕片法 【方法】 1．涂片：將標(biāo)本加少量生理鹽水涂成薄片，置室溫自然干燥。 2．固定： 用酒精燈火焰固定或甲醇固定。 3．染色：革蘭氏染色 4．油鏡觀察結(jié)果。 【結(jié)果】 革蘭染色時(shí)，滴蟲易受涂片時(shí)的擠壓變形，可呈多形性，如梨性、圓形、長 第 33 頁 共 111 頁 圓形、多角形等；大小差異較大，介于白細(xì)胞的 2~3 倍至鱗狀上皮細(xì)胞的 1/2 之間；蟲體輪廓清楚，胞漿稍呈嗜酸性，疏松泡沫狀，有紫紅色長圓形細(xì)胞核，多在偏心位置，并偶見 1~4 條鞭毛，而滴蟲的波動(dòng)膜及軸柱難于著色，不易見。 【注意事項(xiàng)】 1．涂片染色受多種因素影響，上述蟲體典型結(jié)構(gòu)并非完全可見。 2．涂片過程、染色過程的擠壓等閑素，可造成蟲體大小懸殊，形態(tài)多形性， 但是長圓形的細(xì)胞核，疏松且有空泡的細(xì)胞質(zhì)，及偶可見到的 4 根前鞭毛具有一定的特征性，不難辨認(rèn)。 【臨床意義】 滴蟲檢查陽性，結(jié)合臨床表現(xiàn)，即可做出初步診斷。有利于鑒定，并可長時(shí)間保存和利于教學(xué)。 陰道毛滴蟲培養(yǎng) 【原理】 陰道毛滴蟲能在人工培養(yǎng)基中生長。由于滴蟲對培養(yǎng)的要求不太高，因此一般供培養(yǎng)原蟲的培養(yǎng)基也可用于滴蟲的培養(yǎng)，但在任何培養(yǎng)基內(nèi)均需加入血清，因?yàn)檠逯泻械蜗x生長所必需的生長因子。滴蟲是厭氧生物， 它在管底生長良好，為了降低氧的張力，可在培養(yǎng)基中加入還原劑 (如半胱氨酸 )。培養(yǎng)基中加入抗生素是為了殺滅其他微生物以獲得較為純凈的滴蟲。 【材料】 培養(yǎng)基：能夠用于培養(yǎng)陰道毛滴蟲的培養(yǎng)基很多，常用效果較好而使用簡便的培養(yǎng)基有：肝浸液培養(yǎng)基， Diamonds 培養(yǎng)基 (配制見附錄 1)，血清簡易培養(yǎng)基，Johson 氏 CPLM 培養(yǎng)基，簡化胰蛋白酶培養(yǎng)基以及國外商品化的 Kupferberg 培養(yǎng)基（ Difco 和 BBL）和 Feinberg 培養(yǎng)基 (Oxoid)。 【方法】 培養(yǎng)陰道 毛滴蟲的最適溫度為 37℃，最適 ~。因其為厭氧生物，培 第 34 頁 共 111 頁 養(yǎng)基在培養(yǎng)前應(yīng)隔水煮沸 5~10min 以驅(qū)氧，它在管底生長得最好。培養(yǎng)步驟：將所取標(biāo)本直接放入培養(yǎng)基中，置 37℃溫箱培養(yǎng) 48h，用無菌滴管伸入管底吸取 培養(yǎng)物作懸滴法或染色法檢查，如為陰性，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至 6~7 天檢查一次，必要時(shí)離心取沉渣檢查。 【結(jié)果】 可用懸滴法及染色法鏡檢，可見有特征性運(yùn)動(dòng)方式和染色形態(tài)的陰道毛滴蟲。 【注意事項(xiàng)】 1．培養(yǎng)法是檢查陰道毛滴蟲最為敏感的方法，常用于無癥狀感染 (主 要指滴蟲數(shù)量少 )，或有癥狀但涂片檢查為陰性者以及男性滴蟲病的診斷，同時(shí)也可用于尋找敏感藥物以及藥物治療效果的動(dòng)態(tài)觀察等。 2．本法陽性率可高達(dá) 98%。但因操作較麻煩，不作為常規(guī)檢查，主要用來檢查輕癥病人，帶蟲者，慢性患者和科研需要作診斷和療效觀察的依據(jù)。 3．陰道毛滴蟲是厭氧性原蟲，故每管培養(yǎng)基的量相對要多，一般在 15mm l50mm試管內(nèi)約需分裝培養(yǎng)基 9~10ml，陰道毛滴蟲好長于管底，故在檢查培養(yǎng)物時(shí)，應(yīng)使用長頸滴管伸入管底吸取少量培養(yǎng)液作涂片檢查。有時(shí)雖經(jīng)培養(yǎng)但蟲體仍較少時(shí)，則需將培養(yǎng)物離心取沉渣作涂 片檢查。 4．在培養(yǎng)基中加入抗生素后，可獲得滴蟲的純培養(yǎng)，但培養(yǎng)時(shí)間也要相對有所延長，故培養(yǎng)觀察時(shí)間應(yīng)延長至 6~7 天。 5．為了獲得供實(shí)驗(yàn)用的滴蟲蟲株，臨床分離的蟲株需傳代保存。剛從病人體內(nèi)分離的滴蟲開始在培養(yǎng)基中生長不良，每天需轉(zhuǎn)種一次，一周后每 2~3 天轉(zhuǎn)種一次，經(jīng) 2~3 周后，蟲株就適應(yīng)了人工培養(yǎng)環(huán)境，生長良好。 6．一般情況，標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢。無條件立即送檢需較長時(shí)間轉(zhuǎn)送時(shí)，可直接接種于 Diamonds 培養(yǎng)基或血清簡易培養(yǎng)基中，置室溫保存。至少可存活 24h以上。運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室后，先放入 37℃溫箱培養(yǎng) 24~48h，再轉(zhuǎn)種到合適的培養(yǎng)基上。 第 35 頁 共 111 頁 【臨床意義】 臨床標(biāo)本中由于滴蟲的數(shù)量少，一般常規(guī)涂片染色檢查不易檢出，通過培養(yǎng)的方法可使蟲體增殖，數(shù)量增多，提高檢出率，多應(yīng)用于在科研或藥敏篩查。 陰道毛滴蟲抗菌素敏感性試驗(yàn) (MIC) 【原理】 在滴蟲培養(yǎng)基中將抗菌素作不同濃度的稀釋，然后將一定濃度的滴蟲種入，定量測定抗菌素對滴蟲的最小抑菌濃度 (MIC)。 【試劑】 1． Diamonds 培養(yǎng)基 2． 抗菌素 【 方法】 1．排列試管 10~15 支，每管加入 Diamond：培養(yǎng)基 3ml，自第二管起將藥物原液加入 試管中作系列倍比稀釋，濃度應(yīng)適合當(dāng)?shù)氐哪退幩?。第一管為對照管? 2．取一定量的滴蟲懸液，加滴蟲懸液于各管內(nèi)，每管 ，混勻。 3．各管置 35℃孵育 24~48h 后觀察結(jié)果。在管底下吸取培養(yǎng)液一滴置玻片在顯微鏡下觀察。 【結(jié)果】 滴蟲不生長的最小濃度管的濃度為最小抑菌濃度。 【注意事項(xiàng)】 1．用于試驗(yàn)的藥物不應(yīng)含有賦形劑，要求純度要高，需用精密天平稱取。 2．同時(shí)應(yīng)做陰性和陽性對照。 3．觀察時(shí)間一般 48h，以對照為準(zhǔn)。 【臨床意義】 指導(dǎo)臨床用藥和流行病學(xué)研究。 第 36 頁 共 111 頁 第 六 章 念珠菌實(shí) 驗(yàn)室檢測 念珠菌屬陰道內(nèi)正常菌群，絕大多數(shù)女性表現(xiàn)為無癥狀帶菌，部分可發(fā)展成為有癥狀的疾病。男性病人臨床表現(xiàn)為龜頭炎或前列腺炎。對于癥狀不典型的女性病人和男性念珠菌感染往往需要實(shí)驗(yàn)室診斷。 念珠菌的濕片檢查 濕片法 【原理】 10%KOH 可保持念珠菌在組織內(nèi)的形態(tài)，并使菌絲及孢子具淡綠色折光，如觀察到孢子，芽生孢子及假菌絲，即可作為診斷依據(jù)。 【材料】 1．標(biāo)本的采集： ①分泌物： 女性：用滅菌棉拭子從陰道后穹隆處取分泌物。最好取奶酪樣或豆渣 樣白色凝塊。 男性：用滅菌鈍刀蘸取少量滅菌生理鹽水，刮取龜頭或陰莖包皮，取分泌物及皮屑。尿道感染者用尿道拭子緩慢伸入尿道內(nèi) 2~4cm處馭材。 ②尿液：收集清晨新鮮中段尿 10~ 20m1，以 2020r/min 離心 15min 后，取沉渣涂片。 ③前列腺液：前列腺按摩，無菌取材。 ④龜頭皮屑：鈍刀刮取皮屑或濕棉拭子用力擦拭。 2．用具：載玻片、蓋玻片、灑精燈、窺陰器、滅兇棉拭子、連柄鈍刀。 3．試劑：復(fù)方 KOH(10%) KOH 10g 二甲基亞砜 40m1 甘油 20m1 蒸餾水 加至 100ml 第 37 頁 共 111 頁 【方法】 加 1 滴 10%KOH 于載玻片上，將采集標(biāo)本直接涂在 KOH 溶液中，蓋上蓋玻片，置酒精燈火焰微加熱，直接 10 或 40 鏡檢。 【結(jié)果】 念珠菌陽性者鏡下可見略帶淡綠色折光的假菌絲和成群的卵圓形孢子或芽生孢子，孢子直徑 3~5181。m 。假菌絲節(jié)間有明顯的狹窄部，偶可見到分隔的真菌絲。結(jié)果報(bào)告為“假菌絲及芽生孢子陽性 ” 。有時(shí)僅有孢子而無假菌絲，可能為其他酵母菌感染，應(yīng)報(bào)告為“芽生孢子陽性”。皮屑直接鏡檢可見菌絲和孢子，報(bào)告時(shí)應(yīng)寫 為“菌絲、孢子陽性”。 【注意事項(xiàng)】 (1)采集標(biāo)本方法要正確，標(biāo)本量要多。 (2)念珠菌性陰道炎、龜頭炎的病人，僅有分泌物或偽膜而無鱗屑的病人，可直接用等滲鹽水涂片作檢查，這樣可以直接用玻片上的標(biāo)本做真菌培養(yǎng)。 (3)念珠菌性龜頭炎的病人，如有鱗屑應(yīng)滴加 10%KOH 溶液，促進(jìn)角質(zhì)溶解，增加透明度，以利于檢查。 干片革蘭染色法 【原理】 分泌物涂片染色后，念珠菌的假菌絲及芽生孢子可染成革蘭陽性，更利于檢出，同時(shí)還可以觀察有無其他微生物及細(xì)胞組織。 【材料】 滅菌生理鹽水、革蘭染液 【方法】 1． 標(biāo)本采集方法同 10%KOH 鏡檢法。 2． 涂片：將所采集標(biāo)本加少量鹽水制成薄片，室溫自然干燥。 3． 固定：用酒精燈火焰固定． 第 38 頁 共 111 頁 4． 革蘭染色，油鏡觀察。 【結(jié)果】 經(jīng)革蘭染色后假菌絲及芽生孢子或孢子均被染成革蘭陽性 (紫色 )，假菌絲的狹窄部及孢子芽生的特征明顯，易于觀察。 【注意事項(xiàng)】 革蘭染色法檢查念珠菌比 KOH 法、濕片法敏感性高，特異性高，尤其對生殖器念珠菌的分泌物，嬰幼兒皮膚念珠菌感染的檢可，這些標(biāo)本多見芽生孢子，少見假菌絲，革蘭染色比 KOH 法更易查到孢子 。 【臨床意義】 涂片顯微鏡檢查的陽性率較其他方法高，但只要檢查陽性，即可確診。該法具有準(zhǔn)確率高，所需設(shè)備簡單，出報(bào)告快等特點(diǎn)。但陰性時(shí)不能完全排除感染，僅憑鏡檢也不能確定為何種念珠菌感染，需作念珠菌培養(yǎng)鑒定。 念珠菌分離培養(yǎng) 【原理】 念珠菌在沙保葡萄糖瓊脂基上生長良好。將分泌物標(biāo)本用棉拭子采集后直接涂在培養(yǎng)基表面， 24~48h 生長出較大的乳白色菌落。 【材料】 沙保葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 (配制見附錄 1) 【方法】 1．標(biāo)本接種：沙保葡 萄糖瓊脂培養(yǎng)基， 35℃培養(yǎng) 2~3 天。觀察菌落。 2．涂片革蘭氏染色，鏡檢。 【結(jié)果】 24h 培養(yǎng)后，念珠菌菌落為奶油色、閃光、軟而平滑。革氏染色鏡檢可見陽性芽生孢子。 【注意事項(xiàng)】 第 39 頁 共 111 頁 念珠菌和酵母菌同時(shí)可在 GC 或 TM 培養(yǎng)基上生長，但生長較慢，菌落小，呈灰白色。 TM 培養(yǎng)基中含有抗真菌藥物，可能導(dǎo)致有些念珠菌不生長。 【臨床意義】 培養(yǎng)結(jié)果陽性，可見念珠菌，可確診念珠菌感染，尤其對于男性念珠菌性前列腺炎，龜頭炎等。菌株可進(jìn)一步鑒定到種。 念珠 菌的鑒定試驗(yàn) 芽管試驗(yàn) 【原理】 白色念珠菌在血清中形成芽管，而其它念珠菌不能形成。 【材料】 血清：小牛血清或新鮮人血清，經(jīng) 56℃水浴 1h 滅活。 【方法】 加 血清于無菌試管中，接種少量念珠菌培養(yǎng)物，混勻后置 37℃孵育，每 1h 用接種環(huán)取 1 滴培養(yǎng)物鏡檢，共 3 次。 【結(jié)果】 念珠菌菌體長出芽，長約為菌體 3~4 倍，寬為菌體 1/2。 【注意事項(xiàng)】 1．血清應(yīng)新鮮。 2．其它念珠菌，星形念珠 菌 和熱帶念珠菌的某些菌種也可產(chǎn)生芽管，但其形態(tài)較寬、短。 【臨床意義】 該 法是快速鑒別白色念珠菌的常用方法之一。特異性 75%。 厚壁孢子形成試驗(yàn) 【原理】 在 25℃溫度下，白色念珠菌可在玉米吐溫 80 瓊脂培養(yǎng)基上形成頂端厚壁孢 第 40 頁 共 111 頁 子，其它念珠菌不能形成。 【材料】 玉米吐溫 80 瓊脂培養(yǎng)基： (配制見附錄 1)。 【方法】 無菌蓋玻片及載玻片置于無菌空平皿內(nèi)，滴加溶化的玉米吐溫 80 瓊脂 1 滴于蓋玻片上，凝固后，用接種針將待鑒定菌從緊貼蓋玻片處穿刺接種到培養(yǎng)基，用鑷子將蓋玻片翻轉(zhuǎn)，有培養(yǎng)基的面貼在載玻片上