【正文】 要有四大策略，即基因修正、基因置換、基因失活和基因修飾。基因修正：采用基因打靶技術(shù)糾正突變的抑癌基因中的突變序列；基因置換：將外源性的正常抑癌基因直接導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞，取代突變的抑癌基因發(fā)揮作用，以改變腫瘤細(xì)胞的惡性表型；基因失活：利用基因干擾技術(shù)等抑制異常表達(dá)的癌基因或腫瘤相關(guān)基因，降低其表達(dá)活性或不表達(dá)； 基因修飾：將具有增強(qiáng)治療效果的外源基因?qū)氚屑?xì)胞，外源基因的表達(dá)產(chǎn)物可以修飾、改變靶細(xì)胞的功能或使靶細(xì)胞原有功能得到增強(qiáng)，其中包括自殺基因治療、免疫基因治療、藥物敏感基因治療和耐藥基因治療等多種方法。（二）腫瘤基因治療的常用方法1．基因干預(yù)技術(shù)：通過基因干預(yù)，使得腫瘤細(xì)胞過度表達(dá)的癌基因得到抑制，從而降低其惡性表型。2．自殺基因治療—分子化療：直接殺死腫瘤細(xì)胞。3．腫瘤的免疫基因治療：以激發(fā)機(jī)體腫瘤免疫效應(yīng)或提高免疫效應(yīng)細(xì)胞功能為目的的一種腫瘤基因治療方法。4．提高化療效果的輔助基因治療： (1)藥物增敏基因治療； (2)耐藥基因治療。 （1）反義RNA技術(shù)：反義RNA的獲得可通過體外構(gòu)建反義RNA表達(dá)載體，導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞表達(dá)反義RNA，也可體外合成反義RNA，導(dǎo)入靶細(xì)胞，直接對表達(dá)異常的癌基因產(chǎn)生抑制效應(yīng)。反義RNA技術(shù)治療腫瘤的途徑：（1）封閉異常表達(dá)的癌基因，如fos、neu、kras、csrc、cmyb和cmyc；（2）癌基因易位和重排部位是反義RNA治療的靶點(diǎn)。費(fèi)城染色體(phˊ) bcrabl融合基因的連接處是反義封閉的最佳位置。（3）抑制腫瘤細(xì)胞耐藥性，提高化療效果。 （2）RNA干擾技術(shù)：RNA干擾技術(shù)可用于癌基因異常表達(dá)的惡性腫瘤基因治療。利用RNA干擾技術(shù)可以阻斷Kras基因的表達(dá)從而抑制腫瘤發(fā)生，或殺死bcr/abl表達(dá)的人白血病細(xì)胞系。通過RNA干擾技術(shù)可以抑制某些內(nèi)源性基因的表達(dá)，促進(jìn)白血病細(xì)胞的凋亡或增加其對化療藥物的敏感性。應(yīng)用RNA干擾技術(shù)成功地阻斷了乳腺癌細(xì)胞中一種異常表達(dá)的與細(xì)胞增殖分化相關(guān)的核轉(zhuǎn)錄因子基因的功能。RNA干擾技術(shù)在惡性腫瘤的基因治療中顯示了美好的前景。(3）反基因技術(shù)：由于人工合成的TFO很容易被體內(nèi)廣泛存在的DNA酶降解，因此在使用前必須對其進(jìn)行修飾。修飾主要針對反義寡核苷酸的磷酸骨架，可采用硫原子或甲基基團(tuán)代替磷酸二酯中帶負(fù)電的氧原子，提高對核酸酶的耐受力。TFO與HER2原癌基因的啟動子區(qū)域競爭性結(jié)合，抑制乳腺癌細(xì)胞中過度表達(dá)的HER2基因。使用TFO也成功地抑制了Hela細(xì)胞中cmyc的轉(zhuǎn)錄。2．自殺基因治療：是目前腫瘤基因治療領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)之一?；驹恚合蚰[瘤細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入某些真核細(xì)胞中不存在的酶基因，這些基因表達(dá)的特異性酶可以催化對真核細(xì)胞無毒或低毒的藥物前體，轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂幸种坪怂岷铣尚?yīng)的抗代謝藥物，進(jìn)而選擇性地將轉(zhuǎn)染了該基因的腫瘤細(xì)胞“自殺”。這些基因也相應(yīng)地被稱為“自殺基因”。目前研究較多的“自殺基因”有單純皰疹病毒的胸腺嘧啶激酶(TK)基因，它編碼的胸腺嘧啶激酶可以將無毒的核苷類似物──丙氧鳥苷（ganciclovir, GCV）磷酸化為細(xì)胞毒性物質(zhì)。此外，還有大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶（cytosine deaminase, CD）基因，它編碼的酶可以將5氟胞嘧啶（5fluorocytosine, 5FC）轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性藥物5氟尿嘧啶（5fluorouracil, 5FU）。 自殺基因治療的前提條件是“自殺基因”的表達(dá)必須局限于腫瘤細(xì)胞中，而不傷及正常細(xì)胞。自殺基因轉(zhuǎn)移常用方法：①利用免疫脂質(zhì)體、受體介導(dǎo)等技術(shù)進(jìn)行定向基因轉(zhuǎn)移。②根據(jù)腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞分裂的顯著差異，利用逆病毒載體不感染非分裂細(xì)胞的特點(diǎn)，進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移。③腫瘤特異性基因轉(zhuǎn)錄。④腫瘤內(nèi)直接注射。 “旁觀者效應(yīng)”（bystander effect）：不僅轉(zhuǎn)導(dǎo)了“自殺基因”的腫瘤細(xì)胞在用藥后被殺死，而且與其相鄰的未轉(zhuǎn)導(dǎo)“自殺基因”的腫瘤細(xì)胞也被殺死。這種效應(yīng)明顯擴(kuò)大了“自殺基因”的殺傷作用，大大放寬了對基因轉(zhuǎn)移效率的限制，對于自殺基因治療的發(fā)展具有重要意義。 3．腫瘤的免疫基因治療腫瘤的免疫基因治療是根據(jù)免疫學(xué)的理論和技術(shù)，并結(jié)合基因轉(zhuǎn)移和基因表達(dá)調(diào)控等分子生物學(xué)方法，以激發(fā)機(jī)體腫瘤免疫效應(yīng)或提高免疫效應(yīng)細(xì)胞功能為目的的一種腫瘤基因治療方法。主要包括細(xì)胞因子（或受體）基因治療和抗原抗體基因治療兩大類。 4．提高化療效果的輔助基因治療：臨床上對腫瘤患者進(jìn)行化療時(shí)，通常面臨兩大難題：一是患者機(jī)體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感程度存在差異，特別是某些經(jīng)過多次化療的患者，其體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞已經(jīng)產(chǎn)生了多藥耐藥性，對多種化療藥物產(chǎn)生交差耐受，最終導(dǎo)致化療失敗。二則是大劑量的化療可能導(dǎo)致患者的正常細(xì)胞，特別是骨髓造血細(xì)胞的功能受到抑制。 (1)藥物增敏基因治療：為了使化療藥物能夠最大程度地殺死腫瘤細(xì)胞，可以考慮將某些藥物增敏基因?qū)肽[瘤細(xì)胞，特別是對化療藥物原本不敏感的腫瘤細(xì)胞，使其對抗腫瘤藥物的敏感性大大增加，從而達(dá)到增強(qiáng)化療效果的目的。將雞鈣調(diào)素（calmodulin, CaM）基因?qū)胄∈笕橄侔┘?xì)胞株C127，結(jié)果僅需低劑量的長春新堿或長春花堿即可明顯抑制該細(xì)胞株的生長。對其作用原理進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，CaM基因的表達(dá)產(chǎn)物作為細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)系統(tǒng)的重要物質(zhì)，明顯增加了腫瘤細(xì)胞對長春新堿或長春花堿的吸收量而相應(yīng)減少了排出量，從而提高了腫瘤細(xì)胞內(nèi)化療藥物濃度，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。 (2)耐藥基因治療：在解決化療所致骨髓細(xì)胞造血功能受到嚴(yán)重抑制的問題方面，通過向腫瘤患者的骨髓細(xì)胞導(dǎo)入某種耐藥基因，如mdr1基因等，以增強(qiáng)骨髓細(xì)胞的抗藥性，以便耐受大劑量的化療藥物，以達(dá)到徹底殺滅腫瘤細(xì)胞的目的。研究表明，腫瘤細(xì)胞耐藥性的產(chǎn)生與多種糖蛋白或酶有關(guān)，包括多藥耐藥（mdr1）基因編碼的P糖蛋白、多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRP）以及近年來發(fā)現(xiàn)的肺耐藥相關(guān)蛋白等；還有細(xì)胞內(nèi)氧化和解毒作用的酶系統(tǒng)，包括細(xì)胞色素P450（cytochrome，P450）、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶（GST）以及谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPX）等等。目前除了開發(fā)針對腫瘤細(xì)胞耐藥性產(chǎn)生機(jī)制的拮抗劑，如用于阻斷P糖蛋白所引發(fā)多藥耐藥的戊脈安（verapamil）和用于阻斷GSH合成的丁硫氨酸亞砜胺（BSO）等。還采用基因干擾技術(shù)，在基因水平阻斷耐藥基因的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性喪失，從而易于被化療藥物殺死。三、病毒性疾病的基因治療研究據(jù)統(tǒng)計(jì)，75%的人類傳染病是由病毒引起的。病毒感染人體后不僅可能急性發(fā)病，還可以在人體內(nèi)長期潛伏，造成終身傷害。同時(shí)，病毒還是造成先天畸形的重要因素之一。有研究表明，它與某些癌癥、自身免疫性疾病和內(nèi)分泌疾病也存在一定的聯(lián)系。迄今為止，臨床上對絕大多數(shù)病毒感染性疾病仍然缺乏有效的治療手段，而在眾多開展的抗病毒治療方案中，抗病毒基因治療十分引人注目。1．調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答：（1）將細(xì)胞因子(如干擾素、白細(xì)胞介素等)的基因，通過適當(dāng)?shù)妮d體導(dǎo)入機(jī)體免疫細(xì)胞，激活免疫細(xì)胞并促進(jìn)其增殖分化，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答，促進(jìn)機(jī)體清除病毒感染細(xì)胞和游離病毒。（2）將能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答的病毒抗原基因，如乙型肝炎病毒表面抗原基因等，插入表達(dá)載體后直接導(dǎo)入機(jī)體，表達(dá)的抗原不僅可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體，還可以引發(fā)特異性的細(xì)胞免疫應(yīng)答，產(chǎn)生對野生致病病毒攻擊的防御作用。 2．抗病毒復(fù)制：根據(jù)病毒在機(jī)體細(xì)胞中復(fù)制周期的各個(gè)環(huán)節(jié)來設(shè)計(jì)的，主要包括：（1）抑制病毒與宿主細(xì)胞結(jié)合：即阻斷病毒表面抗原決定簇與宿主細(xì)胞受體間的特異性結(jié)合。（2）干擾病毒基因組的轉(zhuǎn)錄起始和調(diào)控。（3）抑制病毒基因組的復(fù)制和蛋白質(zhì)合成。（4）RNA干擾技術(shù)。（5）將抗病毒蛋白質(zhì)基因，如2ˊ→5ˊ腺苷酸合成酶等基 因，導(dǎo)入機(jī)體細(xì)胞并持續(xù)表達(dá)，可以激活核酸酶F，降解病毒RNA，對RNA病毒的感染產(chǎn)生明顯的抵抗作用。四、其他疾病的基因治療研究 神經(jīng)退化性疾?。ㄈ缗两鹕喜。?由于腺病毒可以感染有絲分裂后的細(xì)胞，同時(shí)具有潛在的高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和在中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫特惠區(qū)（immunologically privileged site）中的低病原性，因此是進(jìn)行神經(jīng)系統(tǒng)疾病基因治療的有效載體。已試驗(yàn)了兩種傳遞治療基因的主要策略：（1)重組載體的腦內(nèi)直接注射；(2）采用取出體內(nèi)細(xì)胞在體外經(jīng)由載體轉(zhuǎn)染修飾后回輸腦內(nèi)相關(guān)區(qū)域。神經(jīng)母細(xì)胞（neuroprogenitor）和人星型膠質(zhì)細(xì)胞明顯可以作為自體同源的細(xì)胞載體用于ex vivo修飾和擴(kuò)張。使用四環(huán)素調(diào)節(jié)的腺病毒載體來表達(dá)酪氨酸羥化酶在若干動物模型中用ex vivo技術(shù)表現(xiàn)出了可觀的前景。在用腦衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）腺病毒重組體緩解亨廷頓疾病的實(shí)驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)在表達(dá)BDNF的大鼠模型中得到了可喜的結(jié)果。小結(jié)：基因治療的問題與展望n 治療基因調(diào)控元件的選擇 ；n 安全高效載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)移技術(shù)的選擇；n 靶細(xì)胞的選擇 ；n 商業(yè)目的七、思 考 題：。？3．簡述逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和生活周期。?它在基因治療中有何突出優(yōu)勢？。八、參考文獻(xiàn)：1. 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