【正文】 死細胞； 取樣：搖勻后，用吸管吸取上述不同的藻液分別滴到蓋有蓋玻片的血球計數(shù)板的邊緣，使藻液慢慢進入蓋有蓋玻片的區(qū)域，避免蓋玻片浮起，用吸水紙輕輕吸走多余的藻液，每種藻液取樣 2 次； 觀察計數(shù)：顯微鏡下觀察不同的藻種并分別計數(shù)。 1）血球計數(shù)板計數(shù)原理 血球計數(shù)板是一塊特制的載玻片，板的中部一“H” 型的凹槽， 橫槽兩邊的平臺上各有一個有九個大方格的方格網(wǎng)。每個大格：邊長 為１ｍｍ，深為 ，容積為 (104ml)。中間大方格為計數(shù) 室以計數(shù)室為中心，對角線兩端各有一個有 16 個中格組成的大格。 2）計算藻細胞密度 數(shù)出對角線上的 4 個大方格中的總藻數(shù) A，若藻液的稀釋倍數(shù)為 B，則計算公式如下：細胞密度＝A247。4B104（個／ml）（單位：個／ml）七、實驗結果按下表記錄實驗數(shù)據(jù)。 次數(shù)各大格中的藻數(shù)112342八、問題與思考 用此法計數(shù)的結果是活藻體還是死、活菌體的總和？實驗七 土壤細菌、放線菌、霉菌及纖維素降解菌的分離及提純一、目的要求 通過平板涂布法學習土壤中一般異養(yǎng)性細菌、放線菌、霉菌及纖維素降解菌的分離以及純化方法二、基本原理 微生物分離培養(yǎng)的基本原理是：選用不同成分和酸堿度的培養(yǎng)基，在不同的濕度和不同的通氣條件下進行培養(yǎng)，使只有適合該條件的微生物得以生長。微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成的單個菌落可以是由一個細胞繁殖而成的集合體。因此可通過挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。由于土壤中菌數(shù)高，常需進行一定量稀釋，使微生物能在培養(yǎng)基上長成單個菌落，以達到分離的目的。本實驗將采用四種不同的培養(yǎng)基從土壤中分離不用的微生物三、器材 培養(yǎng)基：牛肉蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、高氏一號培養(yǎng)基、馬丁培養(yǎng)基、赫奇遜培養(yǎng)基 土壤懸液、無菌玻璃棒、無菌吸管、盛有9ml無菌水的試管、無菌試管四、操作步驟 選定采土地點后，鏟去表涂層2～3cm，取3～10cm深層土壤10g。稱取土樣1g，加入盛有99ml無菌水的錐形瓶中，振蕩10min，使土壤中菌體、芽孢或孢子均勻分散，制成10－2稀釋度的土壤稀釋液。然后按10倍稀釋法進行稀釋分離，以制備10－7稀釋度為例，具體操作過程如下：，按10－3……10－7順序編號，放置在試管架上。取移液管一支，－2土壤稀釋液，此為10－3稀釋度的土壤稀釋液，依次操作，制成10－10－10－10－7的土壤稀釋液。 接種于相應的培養(yǎng)基平板上。每一稀釋度至少有兩個平板重復。接種時每一稀釋度用一支無菌吸管，菌液注入平板后，應立即用無菌涂棒將該菌液均勻地涂布于平板表面，注意勿刮破瓊脂。 通常，細菌采用1010106三種稀釋液接種于牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，37176。C培養(yǎng)；放線菌采用1010105三種稀釋液接種于高氏一號培養(yǎng)基。28176。C培養(yǎng)；霉菌則采用1010104三種稀釋度接種于馬丁培養(yǎng)基，28176。C培養(yǎng)；纖維素降解菌采用1010104三種稀釋度接種于赫奇遜培養(yǎng)基，28176。C。 當單菌落長出時，用接種環(huán)挑菌落接到相應的斜面培養(yǎng)基上，在相應的溫度下培養(yǎng)五、問題與思考 你所涂布的平板是否較好的得到了單菌落？ 在四種不同的平板上你得到了哪些類群的微生物？簡述它們的菌落特征？實驗八、微生物實驗常用玻璃器皿清洗一、 實驗目的、包扎技術二、實驗原理 為確保實驗順利地進行，要求把實驗所用的玻璃器皿清洗干凈。為保持滅菌后和無菌狀態(tài)，需要對培養(yǎng)皿、吸管等進行包扎，對試管和三角瓶等加塞棉塞。這些工作看起來很普通簡單，但如操作不當或不安操作規(guī)定去做，則會影響實驗結果，甚至會導致試驗的失敗。三、試劑和儀器、試管、三角瓶、培養(yǎng)皿和吸管、棉線、紗布、棉花、牛皮紙、報紙等、去污粉和相應洗滌液四、實驗內容（一） 玻璃器皿的清洗：新購的玻璃器皿的洗滌 將器皿放入２％鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時，以除去游離的堿性物質，最后用流水沖凈。對容量較大的器皿，如大燒瓶、量筒等，洗凈后注入濃鹽酸少許，轉動容器使其內部表面均沾有鹽酸，數(shù)分鐘后傾去鹽酸，再以流水沖凈，倒置于洗滌架上晾干，即可使用。 常用舊玻璃器皿的洗滌 確實無病原菌或未被帶菌物污染的器皿，使用前后，可按常規(guī)用洗衣粉水進行刷洗；吸取過化學試劑的吸管，先浸泡于清水中，待到一定數(shù)量后再集中進行清洗。帶菌玻璃器皿的洗滌凡實驗室用過的菌種以及帶有活菌的各種玻璃器皿，必須經(jīng)過高溫滅菌或消毒后才能進行刷洗：、試管、三角瓶等物品，做完實驗后放入消毒桶內，～30 min后再刷洗。含菌培養(yǎng)皿的滅菌，底蓋要分開放入不同的桶中，再進行高壓滅菌。、滴管，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來蘇爾或5%%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內消毒24h后， min后，取出沖洗。，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來蘇爾或5%%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內消毒24h后，用夾子取出經(jīng)清水沖干凈。新購置的載片，先用2%鹽酸浸泡數(shù)小時，沖去鹽酸。再放濃洗液中浸泡過液，用自來水沖凈洗液，浸泡在蒸餾水中或擦干裝盒備用。如用于細菌染色的載玻片，要放入50g/ L肥皂水中煮沸10min，然后用肥皂水洗，再用清水洗干凈。最后將載玻片浸入95%酒精中片刻，取出用軟布擦干，或晾干，保存?zhèn)溆谩Ｈ粲迷硪翰荒芟磧舻钠髅?，可用洗液浸泡適當時間后再用清水洗凈。一）單獨高壓滅菌：～30 min→趁熱倒去污物→倒放在鋪有吸水紙的籃子上→用100 ℃→用5%的碳酸氫鈉水煮兩次→再用肥皂水刷洗干凈。（二）玻璃器材的晾干或烘干不急用的玻璃器材：可放在實驗室中自然晾干；急用的玻璃器材：把器材放在托盤中（大件的器材可直接放入烘箱中），再放入烘箱內，用80～120℃烘干，當溫度下降到60℃以下再打開取出器材使用。（三）器皿的包扎：要滅菌后的器皿仍保持無菌狀態(tài)，需在滅菌前進行包扎。：洗凈的培養(yǎng)皿烘干后每10套（或根據(jù)需要而定）疊在一起，用牢固的紙卷成一筒，或裝入特制的鐵桶中，然后進行滅菌。：洗凈、烘干后的吸管，在吸口的一頭塞入少許脫脂棉花，以防在使用時造成污染。塞入的棉花量要適宜，多余的棉花可用酒精燈火焰燒掉。每支吸管用一 條寬約4~5cm的紙條，以30~50℃的角度螺旋形卷起來，吸管的尖端在頭部，另一端用剩余的紙條打成一結，以防散開，標上容量，若干支吸管包扎成一束 進行滅菌。使用時，從吸管中間擰斷紙條，抽出試管。：試管和三角瓶都需要做合適的棉塞，棉塞可起過濾作用，避免空氣中的微生物進入容器。制作棉塞時，要求棉花緊貼玻璃壁，沒有皺紋和縫隙， 松緊適宜。過緊易擠破管口和不易塞入；過松易掉落和污染。棉塞的長度不小于管口直徑的2倍，約2/3塞進管口。目前，國內已開始采用塑料試管塞，可根據(jù)所用的試管的規(guī)格和試驗要求來選擇和采用合適的塑料試管塞。若干支試管用繩扎在一起，在棉花部分外包裹油紙或牛皮紙，再用繩扎緊。三角瓶加棉塞后單個用油紙包扎。問題與思考：敘述常用玻璃器皿清洗方法及步驟