【正文】 3 b2 b1 b1 a5 b4 a4 bppm12345678910 ppm123456789105b2b 4a4b 1b1a3b5b2b1b1a3b4a4b2D NOESY experiment (phasesensitive) NON HSOOR3 b2 b1 b1 a5 b4 a4 bppm123456789101112 ppm1234567891011125b2b 4a4b 1b1a3b5b2b1a1b3b4a4bge2D NOESY experiment (phase sensitive) NOESY和 ROESY的區(qū)別： ROESY是旋轉(zhuǎn)坐標(biāo)系的 NOESY譜，都提供通過(guò)空間作用的核自旋相關(guān)信息，但兩者有區(qū)別： （ 1） NOESY和 ROESY的交叉峰都取決于相關(guān)自旋間存在交叉馳豫，但 NOE是縱向交叉馳豫（ Longitudinal cross relaxation） nn 而 ROE是橫向交叉馳豫（ trasbverse cross relaxation）。 （ 2）檢測(cè)靈敏度的差異。 NOE和 ROE交叉峰強(qiáng)度與對(duì)角線峰強(qiáng)比值與相關(guān)時(shí)間 τm有關(guān)。 NOESY交叉峰在分子量大和小兩個(gè)極端，靈敏度很大。而 ROESY交叉峰在不同分子量的分子中變化不大。 （ 3） NOESY相關(guān)峰為反相組分，而 ROESY相關(guān)峰為同相組分，可以檢測(cè)小的相互作用。 ppm12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm1211109876543210N H NH NSOORge2D NOESY experiment (phase sensitive) ppm12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm1211109876543210N H NH NSOOR2D ROESY experiment (phase sensitive) 異核相關(guān)譜可通過(guò)觀測(cè)碳 (1H13C Hetcor) 或觀測(cè)氫 (HMQC, HSQC). 觀測(cè)氫的實(shí)驗(yàn)也稱做反相實(shí)驗(yàn) . FID 1H p/2 p 13C p/2 p/2 D D t1 1H –13C HSQC － 碳?xì)渲苯酉嚓P(guān)實(shí)驗(yàn) 1H13C HSQC 實(shí)驗(yàn)是異核二維譜，沒(méi)有對(duì)角線峰。每個(gè)相關(guān)峰表示相交的氫、碳峰所對(duì)應(yīng)的氫、碳原子是直接（一鍵）相連的。 HSQC實(shí)驗(yàn)可以使氫譜和碳譜中的譜峰指認(rèn)信息相互利用、相互印證。 當(dāng) CH2上兩個(gè)氫的化學(xué)位移不等時(shí)， HSQC譜上，一個(gè)碳峰就會(huì)與兩個(gè)氫峰有相關(guān)峰。 ppm8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm1801601401201008060402002D 1H13C HSQC using presaturation (phase sensitive) Pl9=5560db D1= ge2D 1H13C HSQC with a zfilter (phase sensitive) ppm8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm140120100806040200ppm8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm140120100806040200ge2D 1H13C HSQC using echoantiecho (phase sensitive) ppm8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm140120100806040200ge2D 1H13C HSQC with improved sensitivity (phase sensitive) ppm8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm140120100806040200ge2D 1H13C editedHSQC with a zfilter (phase sensitive) ppm8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm140120100806040200ge2D 1H13C multiplicityedited HSQC using echoantiecho (phase sensitive) 1H13C HMBC－氫碳遠(yuǎn)程相關(guān)實(shí)驗(yàn) ? HMBC是異核二維譜，沒(méi)有對(duì)角線峰。每個(gè)相關(guān)峰表示相交的氫、碳峰所對(duì)應(yīng)的氫碳原子是以兩鍵、叁鍵或四鍵相連的。 ? HMBC 譜上是否出峰與氫、碳原子相隔幾鍵沒(méi)有直接關(guān)系，只與實(shí)驗(yàn)參數(shù)設(shè)置中 所設(shè)的 J值 有直接關(guān)系。氫碳兩鍵、三鍵或四鍵的 J值范圍有很大部份是重疊的。 ? 由于脈沖序列的關(guān)系， HMBC譜中有時(shí)也會(huì)出現(xiàn) 一鍵偶合的峰 ，是 以一對(duì)相隔一百多 Hz的小峰 出現(xiàn)在對(duì)應(yīng)氫峰的化學(xué)位移兩邊。 ppm123456789 ppm202202001801601401201008060402002D 1H13C HMBC using lowpass J filter (magnitude mode) ppm8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm1801601401201008060402002D 1H13C HMBC using presaturation (magnitude mode) ppm9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm160140120100806040200Magnitudemode ge2D 1H13C HMBC ppm9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm180160140120100806040200ge2D 1H13C HMBC with lowpass J filter (Magnitudemode) 化學(xué)位移相關(guān)譜提供兩健或大于兩鍵的 CH偶合信息。是建立 CC間關(guān)聯(lián)，甚至躍過(guò)氧，氮或其它原子的官能團(tuán)關(guān)聯(lián)的有效方法。成為推導(dǎo)結(jié)構(gòu)，歸屬同碳質(zhì)子，確定 1H取向等立體結(jié)構(gòu)分析以及解決那些由屏敝效應(yīng)難以解釋的季碳?xì)w屬問(wèn)題的強(qiáng)有力工具。同 CH相關(guān)一樣， COLOC的缺點(diǎn)是：① 1JC_H峰得不到有效的壓制；②靈敏度通常用樣量 20～ 30mg，累加 1418小時(shí)。 HMBC實(shí)驗(yàn)可以完全解決以上缺點(diǎn)?，F(xiàn)在已經(jīng)淘汰了 COLOC實(shí)驗(yàn)方法 。 一維選擇性 NOE, COSY,TOCSY 樣品： NHO 溶劑： DMSO。 400MHz；軟件： TOPSPIN 1，先做氫譜（勻場(chǎng)，調(diào)諧） 2，在命令行鍵入： butselnmr， 右側(cè)出現(xiàn)界面 3，點(diǎn)擊 selective 4，進(jìn)入積分菜單，選擇需要激發(fā)的峰積分， save region save region to ‘reg’ 保存并返回 ns=1, td=32k, 點(diǎn) set pulse calibrate 自動(dòng)保存數(shù)據(jù)（第一次要求做此步，以后就可以不做了。） 4，點(diǎn)擊右側(cè)界面上的 sel Gr NOESY OR COSY， TOCSY 5, re 2。 efp, apk。(NOE, ROESY信號(hào)弱，累加次數(shù)增加。 ) 實(shí)驗(yàn)步驟： 一維選擇性 NOE, COSY,TOCSY 樣品： NHO 溶劑： DMSO。 400MHz；軟件： TOPSPIN 補(bǔ)充：實(shí)驗(yàn)步驟 4的操作細(xì)節(jié) 一維選擇性 NOE：脈沖序列 sp2: f1 channel shaped pulse P12[us]: f1 channel 180 degree shaped pulse 一維選擇性 NOE：采樣參數(shù)設(shè)置 采樣參數(shù)： ased O1：需要被激發(fā)峰的頻率 一維選擇性 NOE：譜圖 NHO一維選擇性 COSY：脈沖序列 sp2: f1 channel shaped pulse P12[us]: f1 channel 180 degree shaped pulse 一維選擇性 COSY：譜圖 NHO一維選擇性 COSY：采樣參數(shù)設(shè)置 采樣參數(shù)： ased 一維選擇性 TOCSY：脈沖序列 一維選擇性 TOCSY：采樣參數(shù)設(shè)置 采樣參數(shù)： ased 一維選擇性 TOCSY：譜圖 NHOxwinnmr常用命令 ? lock: 鎖場(chǎng) ? lockdisp：顯示鎖場(chǎng)窗口 ? rga：根據(jù)樣品條件自動(dòng)調(diào)整增益 ? zg: 開(kāi)始采樣 ? acqu或 a: 顯示采樣窗口 ? tr: 中間取數(shù) ? efp: 對(duì)采樣結(jié)果進(jìn)行傅立葉變換 ? apk: 自動(dòng)相位調(diào)整 ? abs：自動(dòng)基線校正 ? pps: 列出譜圖中所有的譜峰 ? sref: 根據(jù)所用氘代溶劑進(jìn)行自動(dòng)化學(xué)位移標(biāo)定 ? lb: 線寬（單位 Hz） ? sw: 掃場(chǎng)寬度（單位 ppm） ? o1p: 中心頻率（單位 ppm） ? ns: 掃描次數(shù) ? gpro：讀取探頭參數(shù)并且采樣 ? View 或 v: 顯示譜圖 ? plot: 打印譜圖 ? eda：編輯采樣參數(shù) ? edo: 選擇輸出選項(xiàng)，修改或是選擇模板 ? edg: 修改輸出內(nèi)容 ? edc: 修改數(shù)據(jù)文件目錄 ? iexpno: 在當(dāng)前目錄下，增加一個(gè)新的實(shí)驗(yàn)號(hào)，其采樣，處理參數(shù)與上一個(gè)實(shí)驗(yàn)相同。 ? setti: 設(shè)定標(biāo)題＝ t ? re： 讀數(shù)據(jù) ? showpp: 顯示脈沖序列 ? halt: 保存數(shù)據(jù) , 停止采樣 ? stop: 停止采樣，不保留數(shù)據(jù) ? ased: 與脈沖序列有關(guān)的參數(shù) ? cf: configure the spectrometer ? ii: ? xfb: 讀取二維數(shù)據(jù) ? edmac: 編輯宏命令 ? gradshim: gradient shimming ? gshim： ? edsolv: ? edlock: edit the lock table ? lopo： set the lock parameters ? ased: edit acquistion parameters used in pulse program ? wobb: 手動(dòng)調(diào)諧 ? atma或 atmn： 自動(dòng)調(diào)諧 ? expt: 實(shí)驗(yàn)時(shí)間 ? ej: 氣體出，放入樣品 ? ij: 進(jìn)樣 ? rpar: 讀取實(shí)驗(yàn)參數(shù) ? wpar: 寫(xiě)實(shí)驗(yàn) ? rsh: 讀勻場(chǎng)值 ? wsh: 寫(xiě)勻場(chǎng)值 ? edte： 變溫實(shí)驗(yàn) ? edasp： 通道選擇，功率 (set up nuclei and spectrometer routing) ? edprosol： 編輯脈寬，功率 (edit probehead and solvent dependent parameters ? SFO1: ? dpl: 保存顯示譜圖區(qū)域（ save the displayed region） ? getprosol: 進(jìn)入脈沖序列（ get probehead and solvent dependent parameters） ? paropt: 參數(shù)優(yōu)化 ? edpul： edit a pulse program ? edcpul: edit the current pulse program ? edcpd: edit posite pulse decoupling programs ? edgp: edit gradient programs ? edcpg: edit current gradient program ? iconnmr: user interface for routine spectroscopy and automation