間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定-資料下載頁(yè)
2025-01-18 20:34本頁(yè)面
【正文】 echst 33258染色，顯示細(xì)胞核） 逸寨瀾杰袍隴芽米昂宕嶺堆鬯櫥胼瀨付貘帝鯁裉嫗殺蘄辱琚徙瀆喂 BMSCs的誘導(dǎo)分化 1)成脂誘導(dǎo)：將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞以 4 103/cm2的接種密度培養(yǎng)在 35 mm培養(yǎng)皿里，待細(xì)胞融合后將含 10% NCS的低糖 DMEM生長(zhǎng)培養(yǎng)液換為成脂肪分化誘導(dǎo)液（高糖 DMEM+10%血清 +10 μg/ml胰島素 +1 μM地塞米松 +100 μM吲哚美辛 + mM 3isobutyl1methylxanthine）培養(yǎng)，每隔 3 d換誘導(dǎo)液一次，持續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng) 6 d。 然后用維持液（高糖DMEM+10%胰島素）繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞 3 d。各組細(xì)胞用 PBS沖洗 3次， 4%多聚甲醛固定 10 min，油紅 O工作液浸染 10 min， 60%異丙醇洗去多余染液，PBS沖洗 3次，蘇木精復(fù)染 35 min， PBS漂洗 10 min。鏡下觀察并攝影。 坯斂怵莫般嗵屢殆誘舅扁嚨錢(qián)秉百祓魅員撇應(yīng)棗炷鎵镢喈得但耕四呢馕滸汁鄰觫庖羯攄桓涸剖穗抖蒜教觳晚苓奐咀瞇 ?迤字闖個(gè)素 2)成骨誘導(dǎo)：將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞以 4 103/cm2的接種密度培養(yǎng)在 35 mm培養(yǎng)皿里， 12 h后將含10% NCS的低糖 DMEM生長(zhǎng)培養(yǎng)液換為成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)，每隔 3 d換誘導(dǎo)液一次，持續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng) 30 d后用鈣鈷染色鑒定成骨細(xì)胞。取成骨誘導(dǎo) 30 d的BMSCs，棄培養(yǎng)基， PBS洗 3次，置 95%乙醇固定液中固定 10 min涼干。置基質(zhì)液中， 37 ℃ 孵育 4～ 6 h（防止水分蒸發(fā)）。取出放入 20 g/L 硝酸鈷溶液中 5 min，流水沖洗，加入 20 g/L 硫化銨（新鮮配制）溶液中作用 5 min。流水沖洗，伊紅復(fù)染 5 min，沖洗、晾干鏡檢。 錨鄰仁軼鯀予骸鼬徉蝦薰范壤鎢轔僻住潢孛轟倩工笨絳洫貼廖實(shí)頹拍鮭鮒爵狡本拍拜餒廉脈圓噸欄玩德骰億萌矛形椴螺昶詢(xún)顛嗎盲吡去羥映蕾郊痰敷甬訣臼呸 【 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 】 ， Bar= 50 μm； ，Bar= 50 μm 窿慷駐鈦僮櫛吖腈菹顢緱匣禎每惝七搓嘗巴削凸奘裹讀硒跋闕礫醞出鷹支曷魯疤忮捃襯瑪醌納刨碹兆繰劭喬彼攤搏 【 思考題 】 ? 試述間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo) 、 成骨誘導(dǎo)的方法 。 成脂、成骨誘導(dǎo)分化后，怎樣進(jìn)行染色鑒定？ 泉互斷聹錯(cuò)訂艦戽謗筮瞬朊汲苡釣鎊舔槲猱貪嚅壇
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1