【正文】 BCA）制備胰島素納米囊（分散在水性介質）時，使用了乳化聚合的一步法和兩步法（浸吸法），一步法分別以Dextran ％％；兩步法分別以Dextran ％％。說明工藝與穩(wěn)定劑分別對包封率有明顯的影響。（二）納米囊或納米球表面的電性 在用乳化聚合法制備米托蒽醌的聚氰基丙烯酸丁酯（PBCA）納米球時，用電泳法測定所得納米球的ζ電位。當氰基丙烯酸丁酯（BCA）單體聚合前通入SO2，可以得到粒徑小至10nm的納米球，且納米球的ζ電位從不通SO2時的20mV變?yōu)?3mV。如以Na2S2O5+NaCl、Na2S2ONa2SONaCl或KCl為附加劑時，、其納米球內(nèi)部載藥量（％）、故ζ電位的絕對值愈大者載藥量也愈大。當納米球分散在水性介質中測定包封率時，也發(fā)現(xiàn)有相同的次序，即ζ電位的絕對值愈大者包封率也愈大?？赡苁怯捎谠诜磻獥l件下藥物帶正電荷，易于進入帶負電荷的PBCA納米球。（三）介質的pH值和離子強度 對聚氰基丙烯酸烷酯類納米球，聚合時介質pH值的影響很大，因為以OH－為催化劑，pH值太低時聚合難以進行，太高時反應太快形成凝塊，而在pH 2~5范圍可得到較好的納米球。用兩步法制備阿克拉霉素A聚氰基丙烯酸異丁酯納米球時，發(fā)現(xiàn)介質pH不同時浸吸量也不同，、、（mg/g），即pH值愈低的載藥量愈大?？赡苁怯捎诩{米球帶負電荷，而在pH值較低的介質中藥物帶正電荷較多的緣故。如浸吸介質具有不同的離子強度（Na2SO4的量分別為0、116 g/L）時，載藥量也不同（、 mg/100mg）。 ? 七、納米囊與納米球的穩(wěn)定性（一）滅菌 納米囊和納米球常用于制備注射劑，這種注射劑含有生物降解材料，滅菌可引起納米囊和納米球不穩(wěn)定。 g 輻射滅菌和無菌操作是實用的方法。通常 g 輻射不會引起平均粒徑的變化，但必須注意有時會引起防腐劑和增稠劑的分解，并使聚合物進一步交聯(lián)和分子量增大。過濾滅菌不會引起其理化性質任何變化，對不粘稠、粒徑較小的納米球系統(tǒng)較適合，但須注意濾膜孔徑的大小。 （二）貯存 納米球貯存穩(wěn)定性一般較差，貯存條件與所用材料有關。一般貯存后都不同程度發(fā)現(xiàn)納米球形狀不規(guī)則且變大 。以冷凍干燥后貯存為宜。 （三）冷凍干燥 納米球于水溶液中不穩(wěn)定，因其聚合物材料易發(fā)生降解，從而引起納米球形態(tài)變化和聚集，也可能引起藥物泄漏和變質。將納米球冷凍干燥，可明顯提高其穩(wěn)定性，通常冷凍溫度應低于納米球與水共存的低共熔點10~20℃、10 Pa壓力下冷凍干燥24~90 h。為避免凍干后納米球聚集和粒徑變化，常先加入冷凍保護劑，如葡萄糖、甘露醇、乳糖、NaCl等，在冷凍時促進大量微小冰晶生成，或使凍干品呈疏松狀態(tài)，以利納米球保持原形態(tài)并易于在水中再分散。 ? 八、納米囊與納米球的質量評定1．形態(tài)、粒徑及其分布2．再分散性 凍干品的外觀應為細膩疏松塊狀物，色澤均勻；加一定量液體介質振搖，應立即分散成幾乎澄清的均勻膠體溶液。再分散性可以用分散有不同量納米囊和納米球的介質的濁度變化表示，如濁度與一定量介質中分散的納米囊和納米球的量基本上呈直線關系，表示能再分散，直線回歸的相關系數(shù)愈接近1，表示再分散性愈好。3．包封率與滲漏率 測定液體介質中納米囊（球）的藥物包封率；凍干品應分散在液體介質后再測定。液體介質中納米囊（球）的分離方法包括透析、凝膠柱、低溫超速離心等，分別測定系統(tǒng)中的總藥量和游離的藥量，從而計算出包封率。納米囊（球）貯存一定時間后再測定包封率，計算貯存后的滲漏率。 4．突釋效應 ％。5．有機溶劑殘留量? 第六節(jié) 脂質體的制備技術一、 概述 脂質體(liposomes，或類脂小球)是一種類似生物膜結構的雙分子層微小囊泡。1971年英國Rymen等人開始將脂質體作為藥物載體。 由一層類脂質雙分子層構成者，稱為單室脂質體，它又分大單室脂質體（large unilamellar Vesicles, LUVs，~1mm之間）和小單室脂質體（single unilamellar vesicles, SUVs，~，可稱為納米脂質體（nanoliposomes）。由多層類脂質雙分子層構成的稱為多室脂質體（multilamellar vesicles, MLVs），粒徑在1~5mm之間。 ? 構成膜的磷脂及膽固醇? （一）脂質體的組成與結構? 脂質體的結構與由表面活性劑構成的膠束（micelle）不同，后者是由單分子層所組成，而脂質體由雙分子層所組成。脂質體的組成成分是磷脂及附加劑。? 膽固醇亦屬于兩親物質，其結構中亦具有疏水與親水兩種基團，但疏水性較親水性強。用磷脂與膽固醇作脂質體的膜材時，必須先將二者溶于有機溶劑，然后蒸發(fā)除去有機溶劑，在器壁上形成均勻的類脂質薄膜，此薄膜是由磷脂與膽固醇混合分子相互間隔定向排列的雙分子層所組成。? （二）脂質體的理化性質? 1．相變溫度 脂質體的物理性質與介質溫度有密切關系。當溫度升高時，脂質體雙分子層中酰基側鍵可從有序排列變?yōu)闊o序排列，從而引起一系列變化，如由“膠晶”變?yōu)橐壕B(tài)，膜的橫切面增加、厚度減少、流動性增加等。轉變時的溫度稱為相變溫度（phase transition temperature），相變溫度的高低取決于磷脂的種類。脂質體膜也可以由兩種以上磷脂組成，它們各有特定的相變溫度，在一定條件下它們可同時存在不同的相。? 2．電性 含磷脂酸（PA）和磷脂酰絲氨酸（PS）等的酸性脂質體荷負電，含堿基（胺基）如十八胺等的脂質體荷正電，不含離子的脂質體顯電中性。脂質體表面的電性對其包封率、穩(wěn)定性、靶器官分布及對靶細胞的作用均有影響。? （三）脂質體的特點1．靶向性 載藥脂質體進入體內(nèi)可被巨噬細胞作為外界異物而吞噬，脂質體以靜脈給藥時，能選擇地集中于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，70%~89%集中于肝、脾。2．緩釋性 許多藥物在體內(nèi)作用時間短，被迅速代謝或排泄。將藥物包封于脂質體中，可減少腎排泄和代謝而延長藥物在血液中的滯留時間，使某些藥物在體內(nèi)緩慢釋放，延長藥物的作用時間。 3．降低藥物毒性 由于脂質體靶向于肝脾，如將對心、腎有毒性的藥物或對正常細胞有毒性的抗癌藥包封于脂質體中，可明顯降低藥物的毒性。4．提高藥物穩(wěn)定性 不穩(wěn)定的藥物被脂質體包封后受到脂質體雙層膜的保護，可提高穩(wěn)定性。 ? 二、制備脂質體的材料磷脂類 包括卵磷脂、腦磷脂、大豆磷脂以及其他合成磷脂，如合成二棕櫚酰ＤＬa磷脂酰膽堿、合成磷脂酰絲氨酸等都可作為脂質體的雙分子層的基礎物質。采用蛋黃卵磷脂為原料，以氯仿為溶劑提取，即得卵磷脂，但產(chǎn)品中氯仿難除盡，卵磷脂的成本也比豆磷脂高。 豆磷脂的組成為卵磷脂與少量腦磷脂的混合物。磷脂可在體內(nèi)合成，還可相互轉化，如腦磷脂可轉化為卵磷脂和絲氨酸磷脂，絲氨酸磷脂也可轉化為腦磷脂。膽固醇類 膽固醇與磷脂是共同構成細胞膜和脂質體的基礎物質。膽固醇具有調節(jié)膜流動性的作用，故可稱為脂質體“流動性緩沖劑”（fluidity buffer）。當?shù)陀谙嘧儨囟葧r，膽固醇可使膜減少有序排列，而增加流動性；高于相變溫度時，可增加膜的有序排列而減少膜的流動性。? 三、脂質體的制備方法（一）薄膜分散法（film dispersion method） 將磷脂、膽固醇等類脂質及脂溶性藥物溶于氯仿（或其他有機溶劑）中，然后將氯仿溶液在燒瓶中旋轉蒸發(fā)，使其在內(nèi)壁上形成一薄膜；將水溶性藥物溶于磷酸鹽緩沖液中，加入燒瓶中不斷攪拌，即得脂質體。 （二）逆相蒸發(fā)法將磷脂等膜材溶于有機溶劑，如氯仿、乙醚等，加入待包封的藥物水溶液（水溶液:有機溶劑=1：3~1：6）進行短時超聲，直到形成穩(wěn)定W/O型乳狀液。然后減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，達到膠態(tài)后，滴加緩沖液，旋轉幫助器壁上的凝膠脫落，在減壓下繼續(xù)蒸發(fā)，制得水性混懸液，通過凝膠色譜法或超速離心法，除去未包入的藥物，即得大單層脂質體。（三）冷凍干燥法（lyopyilization）將磷脂分散于緩沖鹽溶液中，經(jīng)超聲波處理與冷凍干燥，再將干燥物分散到含藥物的水性介質中，即得。（四）注入法 將磷脂與膽固醇等類脂質及脂溶性藥物共溶于有機溶劑中（一般多采用乙醚），然后將此藥液經(jīng)注射器緩緩注入于攪拌下的50℃磷酸鹽緩沖液（可含有水溶性藥物）中，加完后，不斷攪拌至乙醚除盡為止，即制得大多室脂質體，其粒徑較大，不適于靜脈注射。再將脂質體混懸液通過高壓乳勻機二次，則所得的成品大多為單室脂質體。（五）超聲波分散法 將水溶性藥物溶于磷酸鹽緩沖液，加至磷脂、膽固醇與脂溶性藥物共溶于有機溶劑中制成的溶液中，攪拌蒸發(fā)除去有機溶劑，殘液經(jīng)超聲波處理，然后分離出脂質體，再混懸于磷酸鹽緩沖液中，即得 。? 三、脂質體的制備方法①類脂質膜材料的投料比：當增加膽固醇含量時可提高水溶性藥物的包封率；②脂質體電荷的影響：當藥物包封于相同電荷的脂質體雙層膜中，由于同電相斥致使雙層膜之間的距離增大，可包封更多親水性藥物；③脂質體粒徑大小的影響：當類脂質的量不變，脂質雙分子層的空間體積愈大所載藥物量就愈多，多室脂質體的包封率遠比單室的大；④藥物溶解度的影響：極性藥物在水中溶解度愈大，在脂質體水層中的濃度愈高；非極性藥的脂溶性愈大，包封率愈多，水溶性與脂溶性均小的藥物包封率也?。虎葜苽淙萜鞯挠绊懀汗軤钪苽涞亩嗍抑|體比圓底制備的包封率高，梨形與圓底相同。? 四、脂質體的修飾（一）長循環(huán)脂質體 脂質體表面經(jīng)適當修飾后，可避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，延長在體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)的時間，稱為長循環(huán)脂質體（longcirculating liposomes）。如脂質體用聚乙二醇（PEG）修飾，其表面被柔順而親水的PEG鏈部分覆蓋，極性PEG基增強了脂質體的親水性，減少血漿蛋白與脂質體膜的相互作用，降低被巨噬細胞吞噬的可能，延長在循環(huán)系統(tǒng)的滯留時間，因而有利于肝脾以外的組織或器官的靶向作用。將抗體或配體結合在PEG末端，既可保持長循環(huán)，又對靶體識別。如胞質素基因（一種蛋白）通過羧基與PEG的末端結合，PEG再同脂質體膜材料（二硬脂酸磷脂酰乙醇胺，DSPE）制成脂質體，具有長循環(huán)和對靶體纖維蛋白結合的雙重性質。? 四、脂質體的修飾（二）免疫脂質體 在脂質體表面接上某種抗體，使具有對靶細胞分子水平上的識別能力，提高脂質體的專一靶向性。免疫脂質體可以提高人體免疫機能，加快免疫應答，增強脂質體結合于靶細胞和釋藥的能力，且載藥量大、體內(nèi)滯留時間長且靶向性好。（三）糖基脂質體 糖基連接在脂質體表面，而不同的糖基有不同的靶向性。如帶有半乳糖殘基可被肝實質細胞所攝取，帶甘露糖殘基可被K細胞攝取，氨基甘露糖的衍生物可集中于肺內(nèi)。 ? 四、脂質體的修飾（四）溫度敏感脂質體 將不同比例的膜材二棕櫚酸磷脂（DPPC）和二硬脂酸磷脂（DSPC）混合得不同的相變溫度，在相變溫度時，脂質體中磷脂從膠態(tài)過渡到液晶態(tài)，可增加脂質體膜的通透性，此時包封的藥物釋放速率亦增大，而偏離相變溫度時則釋放減慢。溫度敏感脂質體若加熱時間過長可造成正常結締組織損傷。（五）pH敏感脂質體 腫瘤間質液的pH值比周圍正常組織顯著低，從而設計了pH敏感脂質體。這種脂質體在低pH值范圍內(nèi)可釋放藥物，通常采用對pH敏感的類脂（如DPPC、十七烷酸磷脂）為膜材，其原理是pH降低時，可導致脂肪酸羧基的質子化引起六方晶相（非相層結構）的形成而使膜融合。? 五、脂質體的質量評價1．形態(tài)與粒徑及其分布 2．包封率 3．滲漏率 表示脂質體在貯存期間包封率的變化情況，是脂質體不穩(wěn)定性的主要指標，在膜材中加一定量膽固醇以加固脂質雙層膜，減少膜流動，可降低滲漏率。4．磷脂的氧化程度 磷脂容易被氧化，這是脂質體的突出缺點。在含有不飽和脂肪酸的脂質混合物中，磷脂的氧化分3個階段：單個雙鍵的偶合；氧化產(chǎn)物的形成；乙醛的形成及鍵斷裂。因為各階段產(chǎn)物不同，氧化程度很難用一種試驗方法評價。5．有機溶劑殘留量 測定有機溶劑殘留量應符合中國藥典或ICH要求。 ? 六、類脂質體 類脂質體亦稱泡囊（niosomes），系指用非離子型表面活性劑為囊材制成的單層囊泡（nonionic surfactant vesicles），其特點是穩(wěn)定性高于脂質體，可克服脂質體因磷脂氧化而帶來的毒性，近年受到國內(nèi)外的關注，成為很有前途的新型藥物的傳遞系統(tǒng)。 類脂質體的制法與脂質體相近。如由薄膜分散法制得的卡鉑泡囊與異煙肼泡囊等，均具有緩釋與肺靶向的雙重性質，可提高藥效，降低毒副作用。