生物工程下游技術(shù)第十四章電泳分離技術(shù)-資料下載頁(yè)
2025-01-16 17:36本頁(yè)面
【正文】 陽(yáng)、陰極會(huì)重新吸引它回到 pI位置。因此 Pr只能在 pI位置被濃縮成窄、穩(wěn)定的帶 。稱(chēng)這種濃縮效應(yīng)為聚焦。 只要凝膠中的 pH梯度范圍足夠窄。便可將 pI相近的 Pr分開(kāi)， EF是電泳技術(shù)中分辨率最高的技術(shù)。 ? 方法（ EF的關(guān)鍵） ⑴載體兩性電解質(zhì) CA 分辨率 ⑵固相 pH梯度 以具弱酸或弱堿性質(zhì)的丙 烯 酰胺衍生物 CH2＝ CH─CO─NH─R R=─COOH R=─4 級(jí)氨基 R為弱酸 or弱堿 ,形成緩沖體系 ? 體系分辨率達(dá) pH梯度范圍最窄可為 CAIEF是兩性分子 ,在凝膠聚合時(shí)形成兩性分子 ； 在電場(chǎng)中 ,CA遷移到自己的 pI而形成pH梯度 . 1).低離子溶液中 ,不同電荷的蛋白質(zhì)分子間 會(huì)發(fā)生相互靜電作用 ,增加溶液離子強(qiáng)度可減少這種作用 ,但會(huì)提高電泳時(shí)的電流 ,使產(chǎn)熱更多 ,溫度升高又促進(jìn)蛋白質(zhì)的擴(kuò)散 ,使區(qū)帶變寬 ,分辨率下降 .因此電泳緩沖液的 離子強(qiáng)度 必須控制適當(dāng)。 的離子強(qiáng)度 離子強(qiáng)度低 ,速度快 ,發(fā)熱低 ,有電滲 離子強(qiáng)度高 ,速度慢 ,發(fā)熱大 電泳技術(shù)問(wèn)題及對(duì)策 2).蛋白質(zhì)分子 所帶凈電荷 主要取決于 電泳緩沖液的 pH值 ,應(yīng)仔細(xì)調(diào)整和控制電泳緩沖液的 pH值 ,使各組分分子的凈電荷數(shù)差異加大 .但極端 pH下蛋白質(zhì)會(huì)變性失活 ,因此一般控制在 ～ 。 電泳技術(shù)問(wèn)題及對(duì)策 3). 緩沖液的種類(lèi) ,濃度和其他電解質(zhì)濃度 影響蛋白質(zhì)所帶 電荷的極性和數(shù)量 ,同時(shí)還影響蛋白質(zhì) 分子間的相互作用 ,因此 必須根據(jù)分離溶質(zhì)的不同選擇合適的緩沖系統(tǒng) 。 電泳技術(shù)問(wèn)題及對(duì)策 4).表面活性劑 (SDS等 )強(qiáng)烈破壞蛋白質(zhì)分子間的 非共價(jià)作用 ,使蛋白質(zhì)分子為表面溶劑分子所包圍 ,阻止了蛋白質(zhì)之間的相互作用 ,同時(shí) 也消除了不同蛋白質(zhì)固有的電荷差異 。 電泳技術(shù)問(wèn)題及對(duì)策 5).控制電泳介質(zhì)的有效黏度 ,包括選擇適當(dāng)?shù)哪z孔徑和添加能增加介質(zhì)黏度的物質(zhì) 。 電泳技術(shù)問(wèn)題及對(duì)策 6).電泳過(guò)程發(fā)熱量的控制 : 發(fā)熱的難題：蛋白質(zhì)變性 。蛋白質(zhì)區(qū)帶擴(kuò)散 ,分辨率下降 。 ? 對(duì)策 : ① 減少發(fā)熱 :降低電流 ,提高電壓 。提高傳熱表面積 。提高材質(zhì)的傳熱系數(shù) 。提高冷卻系統(tǒng)的溫差 . ② 減少擴(kuò)散 :增加緩沖系統(tǒng)或介質(zhì)的黏度可以減少擴(kuò)散 。在微重力作用下進(jìn)行電泳 。 思考 ? 什么是等電點(diǎn)電泳 ?什么是等電聚焦電泳 ?二者的主要差別在什么地方 ?
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